芍药苷调节丝氨酸/苏氨酸激酶/鼠双微基因2/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响实验研究

目的:探讨芍药苷(PAE)调节丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/鼠双微基因2(MDM2)/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以OCI-LY3细胞为研究对象,分别设置PAE低浓度组(15μmol/L PAE)、PAE中浓度组(30μmol/L PAE)、PAE高浓度组(60μmol/L PAE)、PAE高浓度+SC79(AKT激活剂)组(60μmol/L PAE+8μg/ml SC79),同时以未经处理的细胞为对照组。48 h后,分析细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期和凋亡变化,检测AKT/MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,PAE低浓度组、PAE中浓度组、PAE高浓度组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期增加,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期降低(均P<0.05)。与PAE高浓度组比较,PAE高浓度+SC79组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期降低,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期增加(均P<0.05)。结论:PAE通过抑制AKT/MDM2上调p53表达,抑制DLBCL细胞增殖、细胞周期进展,诱导其凋亡。

胶质瘤组织中Bcl-2相关抗凋亡基因3表达及其对U87细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨胶质瘤组织中Bcl-2相关抗凋亡基因3(BAG3)表达及其对U87细胞增殖和侵袭能力的影响。方法选取2011年4月至2017年4月于新乡市中心医院手术切除的胶质瘤组织及癌旁组织(距瘤旁边缘>2 cm)标本各73例,采用免疫组织化学法检测胶质瘤组织和癌旁组织中BAG3蛋白表达;培养人胶质瘤U87细胞,待细胞融合度达70%以上时随机分为siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组,siRNA-BAG3组细胞转染BAG3干扰序列,siRNA-对照序列组细胞转染阴性对照序列,空白对照组细胞不作任何处理,转染后继续培养48 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测U87细胞中BAG3 mRNA表达,Western blot法检测U87细胞中BAG3蛋白表达,细胞计数试剂盒-8检测U87细胞增殖情况,克隆形成实验检测U87细胞克隆能力,流式细胞仪检测U87细胞凋亡情况,Transwell小室检测U87细胞侵袭能力。结果胶质瘤组织中BAG3蛋白高表达率为73.97%(54/73),低表达率为26.03%(19/73);癌旁组织中BAG3蛋白高表达率为36.99%(27/73),低表达率为63.01%(46/73);胶质瘤组织中BAG3蛋白高表达率显著高于癌旁组织(χ~2=20.215,P<0.05)。胶质瘤组织中BAG3蛋白表达与患者的年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤直径及Karnofsky评分无关(P>0.05),而与肿瘤分级有关(P<0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组U87细胞中BAG3 mRNA相对表达量分别为1.42±0.11、2.17±0.12和2.31±0.18;siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组U87细胞中BAG3蛋白相对表达量分别为0.20±0.12、0.84±0.13和0.92±0.12;siRNABAG3组U87细胞中BAG3 mRNA及蛋白相对表达量显著低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组U87细胞中BAG3 mRNA及蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48、72、96 h时,siRNA-BAG3组U87细胞增殖能力显著低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组U87细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组U87细胞克隆形成数分别为30.76±6.19、81.32±3.55、85.07±3.05;siRNA-BAG3组U87细胞克隆形成数显著少于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组U87细胞克隆形成数比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组细胞凋亡率分别为(21.43±6.89)%、(5.50±2.95)%、(7.37±3.31)%;siRNA-BAG3组细胞凋亡率显著高于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组侵袭细胞数分别为116.92±8.82、179.00±11.64、172.48±18.16,siRNA-BAG3组侵袭细胞数显著少于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05),siRNA-对照序列组与空白对照组侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BAG3蛋白在胶质瘤组织中呈高表达,且与肿瘤恶性程度有关,特异性沉默人胶质瘤U87细胞中BAG3基因可有效抑制细胞增殖及侵袭能力。

胃黏膜相关淋巴组织型淋巴瘤细胞凋亡和bcl-2、p53蛋白表达

目的 :探讨胃黏膜相关淋巴组织型 (MALT)淋巴瘤中细胞凋亡特点及其与bcl 2、p5 3基因蛋白表达的关系。 方法 :应用TdT酶介导生物素化dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术 ,显示肿瘤凋亡细胞 ,免疫组织化学S P法显示bcl 2、p5 3基因蛋白表达。结果 :低度恶性 ,低高混合恶性 ,以及高度恶性组肿瘤细胞凋亡率平均分别为 (0 2 5± 0 12 ) %、(0 46± 0 2 4) %及 (1 32± 0 35 ) % ;而三组bcl 2阳性率分别为 83%、61 6 %及 43 7%。高度恶性组与低度恶性组bcl 2阳性率及凋亡发生率均差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;bcl 2表达与凋亡率呈显著负相关 (P <0 0 5 ) ;86例肿瘤组织中 ,p5 3阳性者 2 7例 (30 % ) ,其中低度恶性组 3例 ,混合恶性组 3例 ,高度恶性组 2 1例。高度恶性组 p5 3阳性率高于其余两组。p5 3表达与bcl 2表达著负相关 (P <0 0 5 )。结论 :在胃MALT淋巴瘤中 ,随着组织学分级的提高 ,凋亡细胞显著增多 ,凋亡在肿瘤发生发展转化中起重要作用。p5 3和bcl 2均为重要的凋亡调控基因 ,在胃MALT淋巴瘤从低度恶性到高度恶性的转化中 ,p5 3和bcl 2基因可能起重要作用。

bcl-2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷联合对恶性淋巴瘤细胞系凋亡的影响

目的 :研究bcl 2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷 (As2 O3 )联合对恶性淋巴瘤细胞系凋亡的影响。方法 :采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态 ,原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞的DNA含量和bcl 2蛋白的表达。结果 :10～ 4 0 μmol/Lbcl 2基因的反义寡核苷酸和 0 .5～ 2 .0 μmol/L三氧化二砷均能抑制恶性B淋巴瘤细胞系Raji细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,流式细胞仪检测Raji细胞 ,发现亚G1期细胞明显增多 ,bcl 2蛋白的表达明显降低 ,呈现时间剂量依赖效应 ,两者联合应用比单独应用抑制作用显著。结论 :bcl 2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷联合应用 ,明显抑制恶性B淋巴瘤细胞系生长 。

Bcl-2基因在鼠T-细胞淋巴瘤细胞中抗凋亡作用的实验研究

目的应用转染了Ｂｃｌ－２基因的鼠Ｔ－细胞淋巴瘤ＷＨｂ１２细胞系进一步研究Ｂｃｌ－２基因的抗凋亡作用及意义。方法分别采用紫外线照射２０ｓ、１０μｍ地塞米松作用２４ｈ和２００ｎｇ／ｍｌ鬼臼乙叉甙作用２４ｈ等方法，诱导ＷＨｂ１２细胞和其亲本细胞Ｗ７２ＵＳＡ细胞凋亡，与亲本细胞相比较，观察转染了Ｂｃｌ－２基因的ＷＨｂ１２细胞是否具有抗凋亡作用。结果未转染Ｂｃｌ－２基因的亲本细胞Ｗ７２ＵＳＡ细胞发生了凋亡，而转染了Ｂｃｌ－２基因的ＷＨｂ１２细胞存活完好，无明显凋亡发生。结论进一步证实了Ｂｃｌ－２基因具有显著的抗凋亡作用，其抗凋亡作用谱广，具有重要意义。

凋亡相关基因Bcl-2和细胞因子bFGF在豚鼠透镜诱导近视眼中的研究

目的:探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在透镜诱导豚鼠近视眼后极部巩膜细胞中的表达,以及二者对巩膜细胞凋亡的影响。方法:选健康4周龄豚鼠45只,随机分成3组,Ⅰ组(右眼配戴-20D)、Ⅱ组(右眼配戴-10D)Ⅲ组(不作任何干预)。实验前后用睫状肌麻痹下验光、A超动态观察豚鼠眼屈光度和眼轴长度,并取后极部巩膜组织,用电镜、终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术检测巩膜的凋亡细胞,应用免疫组织化学染色和蛋白印迹(Western-blot)法检测bFGF和bcl-2蛋白。结果:实验后诱导眼形成近视,且伴有眼轴延长。并在诱导眼巩膜细胞中检测到凋亡细胞,凋亡率高于对照组(P<0.05),透镜诱导的豚鼠近视眼后极部巩膜组织中bFGF和bcl-2的含量降低(P<0.05)。结论:bFGF与bcl-2在透镜诱导豚鼠近视眼后极部巩膜细胞中表达阳性,并可通过抑制细胞凋亡参与透镜诱导豚鼠近视的形成。

乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl鄄2和Bax表达的影响。方法将雄性昆明种小鼠随机分为4组,每组6只,分别给予10%,20%,30%的乙醇和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续30d,通过心肌细胞的核固红鄄结晶紫和免疫组织化学染色,分析细胞凋亡及凋亡相关基因——B细胞淋巴瘤/白血病鄄2基因(B鄄celllymphoma/leukemia鄄2,Bcl鄄2)和Bcl相关蛋白(Bcl鄄associatedxprotein熏Bax)的表达。结果实验组部分心肌细胞核染色质凝集,染为蓝紫色;定量分析显示,实验组异常的心肌细胞核明显多于对照组(P<0.01)。实验组心肌细胞中Bcl鄄2的表达弱于对照组(P<0.01),且分布不均;而实验组心肌细胞中Bax的表达明显增强(P<0.01),可见棕色粗大颗粒。结论心肌细胞凋亡在乙醇对心肌影响的发生机制上发挥一定的作用;随着乙醇浓度的增加,心肌细胞的凋亡征象愈加明显;乙醇引起的心肌细胞凋亡与凋亡相关基因Bcl鄄2和Bax的异常表达有关。

哮喘平对哮喘模型大鼠肺组织细胞凋亡相关调控基因蛋白Bcl-2、Bax水平的影响

目的:观察哮喘平对哮喘大鼠模型肺组织细胞凋亡相关调控基因蛋白Bcl-2、Bax水平的影响,研究哮喘平治疗哮喘的作用机制。方法:将60只SD雄性大鼠随机分为6组,每组10只,即空白对照组、哮喘模型组、桂龙咳喘宁组、哮喘平低剂量组、哮喘平中剂量组、哮喘平高剂量组。以卵蛋白致敏复制大鼠哮喘模型,成功复制模型21 d后,空白对照组和模型组每天给予等量的氯化钠溶液灌胃,连续给药2周后处死大鼠,解剖大鼠并取出肺组织。采用免疫组化法测定大鼠肺组织中细胞凋亡相关调控基因蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠Bcl-2表达升高,Bax表达降低(P<0.01),与模型组比较,给药组大鼠Bcl-2表达降低,Bax表达升高(P<0.05,P<0.01);与桂龙咳喘宁组比较,哮喘平中高剂量组Bcl-2表达显著降低,Bax表达显著升高(P<0.01)。结论:哮喘平可以降低抑凋亡基因蛋白Bcl-2的表达,升高促凋亡基因蛋白Bax的表达。

B淋巴细胞瘤-2结合抗凋亡基因1在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)结合抗凋亡基因1(Bcl-2-associated athanogene 1,BAG-1)在人脑胶质瘤中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化SP二步法,检测2009年9月至2021年9月年安徽医科大学第二附属医院的212例人脑胶质瘤标本以及10例正常脑组织标本中的BAG-1的表达,分析其与临床病理及预后的关系。结果检测到BAG-1总体的阳性表达率为61.3%,BAG-1在低级别胶质瘤(Ⅰ~Ⅱ级)和高级别胶质瘤(Ⅲ~Ⅳ级)阳性表达率分别为48.4%和71.1%(P=0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的病人的中位生存时间分别为60个月和17个月(P<0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的高级别胶质瘤病人中位生存时间分别为31个月和11个月(P<0.001)。BAG-1阴性和阳性表达的病人无进展中位生存时间分别为26个月和8个月(P=0.001)。结论BAG-1在人脑胶质瘤中高表达,与肿瘤的病理分级呈正相关,与病人生存时间呈负相关,BAG-1可能成为预测胶质瘤预后及化疗疗效的重要分子标志物。

矢车菊色素对高龄糖尿病大鼠B细胞淋巴瘤基因2及Bcl-2相关X蛋白基因表达的影响

目的了解矢车菊色素对高龄2型糖尿病大鼠(Goto-Kakizaki rats,GK大鼠)肾损害时B细胞淋巴瘤伯血病基因-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protem,Bax)基因表达的影响。方法 25周龄雄性GK大鼠24只随机分为矢车菊组和对照组,每组12只。矢车菊组饲喂含10%葡萄糖的矢车菊色素-3-葡萄糖苷溶液600 mg/L8周,对照组饲喂10%葡萄糖溶液8周。每周测量体重及空腹血糖,8周后处死。RT-qPCR检测大鼠左肾Bcl-2、Bax mRNA表达,同时检测左肾脏器指数、血清糖化血红蛋白(glycated hemoglobin A1c,GHbA1c)并观察右肾病理损害。结果矢车菊组肾Bcl-2 mRNA表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。矢车菊组Bax基因与对照组比,mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。矢车菊组GK大鼠的体重、空腹血糖、血清GHbA1c和左肾脏器指数较对照组均降低(P<0.05)。与对照组比较,矢车菊组肾脏病理损害明显减轻。结论矢车菊色素可降低GK大鼠的体重、空腹血糖和血清GHbA1c水平,减轻糖尿病的肾损伤,可能与促进Bcl-2基因表达有关。

中医药基于B细胞淋巴瘤-2/Bax基因表达对白血病细胞凋亡调控影响的研究进展

细胞凋亡调控异常是白血病发生及病情进展的重要原因之一,其中,抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/白血病蛋白和促凋亡蛋白Bax对于白血病细胞凋亡的调控起着关键作用。相对于经典的化学药物治疗,中医药治疗白血病具有不可替代的优越性,许多单味中药、中药有效成分和中药复方都有很强的抗肿瘤活性,近年来中医药对于白血病Bcl-2和Bax基因表达影响机制的探究成为了医学领域的研究热点。

藤黄酸对非小细胞肺癌A549细胞凋亡及Bcl-2、Bax、P53基因表达的影响

目的探讨藤黄酸对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞凋亡及B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、P53基因表达的影响。方法体外常规培养NSCLC A549细胞,取对数生长期的A549细胞加入不同浓度的藤黄酸进行干预,藤黄酸干预24 h后采用流式细胞术检测A549细胞凋亡率,干预24、48、72 h后采用MTT分析A549细胞生长情况;采用Western印迹实验分析藤黄酸干预对Bcl-2、Bax、P53基因表达的影响,同时分析PUMA表达情况。结果干预24 h后,A549细胞凋亡率随着藤黄酸浓度的增加而增加,均高于空白对照组(P<0.05)。不同浓度的藤黄酸对A549的生长均有一定的抑制作用,且存在剂量、时间关系,不同浓度的藤黄酸干预组A549细胞存活率均显著低于空白对照组(P<0.05);随着时间的推移,各干预组A549细胞存活率降低(P<0.05)。干预24 h后,P53、Bax、PUMA的相对表达量随着藤黄酸浓度的增加而增加,且不同浓度藤黄酸组均显著高于空白对照组(P<0.05);但Bcl-2的相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05)。结论藤黄酸可抑制NSCLC A549细胞生长,促进其凋亡,其机制可能是通过活化促凋亡基因Bax、P53、PUMA表达和抑制抗凋亡基因Bcl-2表达实现。

流感肺炎患者外周血中PDCD5与Bcl-2蛋白表达及其与淋巴细胞凋亡的关系

目的研究凋亡相关蛋白PDCD5和Bcl-2在流感肺炎患者外周血中的表达及其与淋巴细胞凋亡的关系.方法ELISA实验检测流感肺炎患者血清中凋亡相关蛋白PDCD5和Bcl-2表达,并分析其相关性;流式细胞仪检测流感肺炎患者外周血淋巴细胞凋亡;Western blot检测流感肺炎患者外周血淋巴细胞中凋亡相关蛋白PDCD5和Bcl-2表达;流式细胞仪分离检测T细胞亚群含量及凋亡变化,分析T细胞亚群凋亡与血清中凋亡相关蛋白PDCD5和Bcl-2表达的相关性.结果PDCD5在流感肺炎患者血清中表达较健康对照者表达显著增加(μg/L:19.77±8.88 vs.1.32±1.02,P<0.05),Bcl-2表达显著降低(μg/L:6.15±2.10 vs.10.25±3.56,P<0.05),且两者表达呈显著负相关(r=-0.386,P<0.05);流感肺炎患者外周血淋巴细胞凋亡率较健康对照者显著增加(%:39.68±12.15 vs.2.54±1.61,P<0.05),且淋巴细胞中PDCD5高表达(0.81±0.16 vs.0.21±0.06,P<0.05),Bcl-2低表达(0.33±0.14 vs.0.53±0.11,P<0.05);流感肺炎患者外周血CD3+T细胞及CD3+CD4+T细胞亚群和CD3+CD8+T细胞亚群的凋亡比例较健康对照者显著增多(21.19±10.67 vs.12.63±7.15、15.49±8.85 vs.10.56±5.14、15.93±7.89 vs.12.38±6.97,P<0.05),其中CD3+CD4+T细胞亚群凋亡更为显著,且与血清中PDCD5表达呈正相关(r=0.335,P<0.05),与Bcl-2表达呈负相关(r=-0.296,P<0.05);流感肺炎患者与健康对照者比较,T细胞亚群中CD3+CD4+T细胞比例下降(27.32±3.14 vs.39.49±4.41,P<0.05),CD3+CD8+T细胞比例增加(40.81±3.89 vs.28.36±2.85,P<0.05),CD4+/CD8+T细胞比值降低(0.67±0.17 vs.1.39±0.16,P<0.05).结论流感肺炎患者外周血中PDCD5高表达,Bcl-2低表达,两者呈显著负相关,T淋巴细胞凋亡可能与PDCD5和Bcl-2表达有关.

B细胞淋巴瘤-2家族蛋白与细胞凋亡

细胞凋亡是由多基因控制的细胞自主有序的死亡,以维持内环境稳定。其在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有重要意义。细胞凋亡可促进因感染、损伤所致的细胞死亡并被机体清除,临床上细胞凋亡与许多疾病有直接关系。B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)家族蛋白是参与细胞凋亡的重要调节分子,既可抑制也可促进细胞凋亡。作者概述了Bcl-2蛋白家族成员、结构特点、Bcl-2蛋白家族与细胞凋亡的关系及生物学意义。

缺血再灌注损伤与细胞凋亡及相关基因Bcl-2

缺血再灌注损伤是各种器官及组织移植过程中导致早期失去功能的最主要原因。近年来，越来越多的研究证实，细胞凋亡是造成移植物缺血再灌注损伤早期细胞死亡的主要方式。现将缺血再灌注损伤时细胞凋亡及相关基因B-细胞淋巴瘤／白血病-2原癌基因（B-cell lymphoma／leukemia-2．Bcl-2）以及其调控机制的相关研究进展综述如下。

电脉冲与恶性淋巴瘤细胞p53和bcl-2基因表达

目的 :探讨电化学疗法 (ECT)与肿瘤细胞基因表达的关系。方法 :采用Tunel法和免疫组化S -P法 ,分别检测肿瘤未治疗对照组和ECT组B细胞淋巴瘤组织的细胞凋亡率和p53、bcl- 2基因的表达。结果 :ECT组肿瘤细胞凋亡率 (5 .1 8)显著高于对照组 (1 0 5) ,p53、bcl - 2在ECT组表达分别为 80 %、2 5 % ,对照组表达分别为1 5 %、90 %。ECT组中p53表达与癌细胞凋亡率呈正相关 ,而bcl- 2则与癌细胞凋亡率呈负相关。结论 :ECT可诱导癌细胞凋亡 ,其发生可能与p53和bcl-

bcl-2基因反义寡核苷酸增强放射线诱导Raji细胞凋亡的研究

目的研究bcl-2基因反义寡核苷酸作用淋巴瘤细胞株Raji后,放射线对细胞凋亡的影响。方法bcl-2基因反义寡核苷酸作用Raji细胞后,台盼蓝拒染法计数活细胞;免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色和碘化丙啶染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线联合作用Raji细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,活细胞数分别与单用放射线组及无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P<0.05)。bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线联合作用于Raji细胞后显著抑制bcl-2蛋白表达,蛋白水平分别与单用放射线组或无义寡核苷酸联用放射线组比较,差异有显著性(P<0.05)。bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线同时作用于Raji细胞后,姬姆萨染色可见凋亡细胞,通过流式细胞仪检测的细胞凋亡率显著增加,分别与单用放射线组或无义寡核苷酸联用放射线组相比,具有显著性差异,P<0.05。结论bcl-2反义寡核苷酸能增强放射线诱导Raji细胞凋亡。

通痹方热奄包外敷对家兔退变颈椎间盘细胞凋亡相关基因Caspase-3和Bcl-2 mRNA的影响

目的:探讨通痹方热奄包外敷对家兔退变椎间盘细胞凋亡相关基因天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA表达的影响。方法:普通级新西兰大白兔18只随机均分为空白组(正常兔,不做任何干预)、模型组(颈椎病模型兔,不予任何治疗)及热敷组(颈椎病模型兔,通痹方热奄包外敷治疗),各组家兔于造模前、造模第30天及治疗结束后拍摄颈椎X线并评分;治疗15次后留取各组家兔C3-4和C4-5椎间盘,采用苏木精-伊红(HE)染色观察C3-4椎间盘组织形态学变化并评分,实时荧光定量法检测C4-5椎间盘Caspase-3和Bcl-2 mRNA相对表达量。结果:模型组和热敷组家兔造模后颈椎X线评分分别较空白组升高,热敷组家兔治疗后颈椎X线积分改善程度较模型组大,差异均有统计学意义(P<0.05);HE染色结果显示,模型组家兔C3-4椎间盘评分比空白组升高,热敷组评分比模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白组相比,模型组家兔C4-5椎间盘内Casepase-3 mRNA表达升高、Bcl-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,热敷组家兔椎间盘内Casepase-3 mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:通痹方热敷可通过上调Bcl-2 mRNA表达、抑制Casepase-3 mRNA表达减少椎间盘细胞凋亡,延缓椎间盘退变。

微小RNA-34a调节B淋巴细胞瘤-2基因引起耳蜗细胞凋亡在庆大霉素致聋大鼠中的机制研究

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-34a调节B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)引起耳蜗细胞凋亡在庆大霉素致聋大鼠中的作用机制。方法将SD大鼠分为3个组,对照组、模型组和miR-34a抑制剂组。通过肌肉注射庆大霉素建立药物中毒性聋大鼠模型,尾静脉注射miR-34a抑制剂下调miR-34a水平。比较建模前、后听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)阈值。HE染色和免疫组织化学染色分别检测大鼠耳蜗形态改变和Bcl-2水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)、免疫印迹试验(Western blot)分别检测RNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证miR-34a直接靶向作用于Bcl-2。结果注射庆大霉素后,对照组大鼠耳蜗毛细胞形态正常,排列规则,螺旋神经节结构正常;模型组耳蜗毛细胞数量显著减少,细胞排列不规则;miR-34a抑制剂组耳蜗细胞数量较模型组数量增加,细胞排列较规则。模型组大鼠躁动不安,易受惊,食欲减低,怕人怕物;miR-34a抑制剂组较模型组大鼠反应有所改善。模型组ABR(36.97±6.44)dB、miR-34a抑制剂组大鼠ABR(38.31±6.32)dB,均较对照组ABR(9.12±2.31)dB显著升高(t模型组=45.682,tmiR-34a抑制剂组=37.224,P均<0.05)。尾静脉注射溶剂或miR-34抑制剂后,miR-34a抑制剂组ABR(20.05±4.62)dB,较模型组大鼠ABR水平(35.02±6.38)dB明显降低(t=16.334,P<0.05)。模型组miR-34a水平(3.45±0.32),显著高于对照组(1.07±0.11)(t=42.397,P<0.05),Bcl-2 mRNA水平(1.74±0.20)和Bcl-2水平(0.89±0.09)显著低于对照组(3.82±0.43)和(2.96±0.32)(tBcl-2 mRNA=29.358,tBcl-2=36.445,P均<0.05),miR-34a抑制剂组的miR-34a水平(1.34±0.15)较模型组(3.45±0.32)明显降低(t=28.752,P<0.05),Bcl-2 mRNA水平(2.43±0.31)和Bcl-2水平(1.56±0.17)显著高于模型组Bcl-2 mRNA(1.74±0.20)和Bcl-2水平(0.89±0.09)(tBcl-2 mRNA=14.613,tBcl-2=24.305,P均<0.05)。双荧光素酶报告结果显示miR-34a直接靶向Bcl-2,推测人和大鼠的miR-34a靶向Bcl-2,且靶向结合位点具保守性。结论miR-34a水平升高可能与药物引起的听力受损有关,通过抑制Bcl-2可下调庆大霉素致聋大鼠miR-34a表达水平,减少耳蜗中细胞凋亡,缓解听力下降。

miR-10b通过抑制胶质瘤相关癌基因2蛋白表达对卵巢癌细胞克隆、凋亡的影响研究

目的探究miR-10b通过抑制胶质瘤相关癌基因2(GLI2)蛋白表达对卵巢癌细胞克隆、凋亡影响的作用机制。方法选取2019年3月至2021年4月于河北大学附属医院接受卵巢癌手术的60例患者的卵巢癌组织及距离病灶5cm处的癌旁组织作为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中miR-10b、GLI2 mRNA的表达;培养卵巢癌细胞,将其分为miR-10b组、GLI2蛋白组、联合组及对照组,采用克隆实验检测细胞的克隆数量,采用流式细胞仪检测细胞的凋亡,采用双荧光素酶报告基因检测miR-10b与GLI2的靶向性;选取20只裸鼠,右腋皮下接种卵巢癌细胞以建立裸鼠卵巢癌模型,建模成功后,随机分为抑制剂组和空白组,每组10只,取肿瘤组织以计算肿瘤体积。结果卵巢癌组织中miR-10b mRNA表达明显低于癌旁组织,GLI2 mRNA表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。联合组细胞克隆及侵袭数量低于miR-10b组,细胞凋亡率高于miR-10b组(P<0.05);与对照组比较,miR-10b组、GLI2蛋白组和联合组细胞克隆及侵袭数量明显减少,细胞凋亡率明显增加,且联合组细胞克隆及侵袭数量少于miR-10b组及GLI2蛋白组,细胞凋亡率高于miR-10b组及GLI2蛋白组(P<0.05);双荧光素酶报告显示,转染miR-10b后可显著降低GLI2蛋白活性(P<0.05),但对突变基因无显著影响(P>0.05),且GLI2蛋白与miR-10b呈现负相关。抑制剂组瘤体体积显著小于空白组(P<0.05)。结论miR-10b可降低卵巢癌细胞的克隆、侵袭数量,并促进其凋亡,作用机制与靶向抑制GLI2蛋白有关。