中医药调控细胞焦亡干预缺血性脑卒中的研究进展

细胞焦亡是一种促炎性程序性细胞死亡,通常经病原体感染后触发,是固有免疫的重要组成部分。细胞焦亡在缺血性脑卒中的发生发展中发挥着重要的作用。从细胞焦亡的作用机制、细胞焦亡与缺血性脑卒中的作用关系、中医药调控细胞焦亡干预缺血性脑卒中的研究进展等方面进行梳理与总结,发现细胞焦亡的关键介导因子是防治缺血性脑卒中的重要作用靶点。中药提取物、中药复方、针刺、电针疗法均能够通过抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、胱天蛋白酶-1、焦孔素-D或凋亡相关微粒蛋白等蛋白的表达,调控细胞焦亡而发挥治疗作用,为中医药防治缺血性脑卒中提供了新的思路和方向。

miR-107在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中的表达及作用

目的探讨miR-107在变应性鼻炎(AR)小鼠鼻黏膜中的表达及其作用机制。方法采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射及滴鼻建立AR模型,实验分为Sham组(腹腔注射0.9%氯化钠溶液、滴鼻处理)、AR组、AR+miR-NC组(OVA致敏后用带有miR-NC的腺病毒注射入小鼠腹腔)、AR+miR-107组(OVA致敏后用带有miR-107过表达载体的腺病毒注射入小鼠腹腔),每组10只。qRT-PCR法检测外周血、鼻黏膜组织中miR-107表达量;采用视觉模拟评分量表(VAS)评估鼻部症状;试剂盒检测血清OVA特异性免疫球蛋白E(IgE)水平;ELISA法检测IL-4、IL-5、IFN-γ水平;Western blot检测NLRP3炎性小体相关蛋白(NLPR3、ASC)表达量。结果与Sham组比较,AR组外周血、鼻黏膜组织中miR-107表达水平、IFN-γ水平降低(P<0.05),鼻部症状评分、NLPR3、ASC蛋白水平升高(P<0.05),血清OVA特异性IgE、IL-4、IL-5水平升高(P<0.05);与AR组、AR+miR-NC组比较,AR+miR-107组外周血、鼻黏膜组织中miR-107表达水平、IFN-γ水平升高(P<0.05),鼻部症状评分、NLPR3、ASC蛋白水平降低(P<0.05),血清OVA特异性IgE、IL-4、IL-5水平降低(P<0.05)。结论AR小鼠中miR-107表达下调,miR-107过表达可抑制炎性反应、调节免疫功能,其作用机制与抑制NLRP3炎性小体活化有关。

红景天苷对哮喘模型小鼠气道炎症的抑制作用及其机制

目的:探讨红景天苷(SAL)对小鼠急性哮喘气道炎症的干预作用,并阐明其作用机制。方法:将50只清洁级BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、卵清蛋白(OVA)组、低剂量SAL组、高剂量SAL组和地塞米松组,每组10只。于实验第1、7和14天,腹腔注射混合液200μL(由生理盐水、10 mg OVA和1 mg氢氧化铝组成)建立小鼠哮喘模型,第21天时,将致敏小鼠置于实验玻璃箱内,以0.1 g OVA+10 mL生理盐水雾化形式激发30 min,每日1次,共7 d。低和高剂量SAL组小鼠在每次激发免疫前1 h分别腹腔注射30和60 mg·kg^(-1)SAL治疗液,地塞米松组小鼠腹腔注射2 mg·kg^(-1)地塞米松治疗液,而对照组小鼠以同剂量生理盐水代替。检测各组小鼠增强呼吸间歇(Penh)值并评估小鼠气道反应性,HE染色法观察各组小鼠肺组织形态表现,直接计数法计算各组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数,ELISA法检测各组小鼠BALF中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)、白细胞介素17A(IL-17A)、白细胞介素18(IL-18)和白细胞介素33(IL-33)水平,Western blotting法测定各组小鼠肺组织中NOD样受体家族蛋白3(NLPR3)、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、Caspase-1、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)和IL-1β蛋白表达水平。结果:与对照组比较,OVA组小鼠Penh值明显升高(P<0.05);与OVA组比较,高剂量SAL组小鼠Penh值升高(P<0.05)。与对照组比较,OVA组小鼠气道平滑肌增厚并可见大量炎性细胞浸润;与OVA组比较,高剂量SAL组小鼠气道周围炎性细胞数减少(P<0.05)。与对照组比较,OVA组小鼠BALF中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数增加(P<0.05),IL-1β、IL-4、IL-13、IL-17A、IL-18和IL-33表达水平明显升高(P<0.05);与OVA组比较,高剂量SAL组小鼠BALF中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞以和淋巴细胞数减少(P<0.05),IL-1β、IL-4、IL-13、IL-17A、IL-18和IL-33水平降低(P<0.05)。与对照组比较,OVA组小鼠肺组织中NLPR3、ASC、Caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与OVA组比较,高剂量SAL组小鼠肺组织中NLPR3、ASC、Caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:SAL可以减轻急性哮喘小鼠气道炎症,其机制可能与下调NLRP3炎性小体的表达有关。

胃复康颗粒对Hp相关性胃炎模型小鼠ASC、IL-18、Caspase-1表达的影响

目的探讨胃复康颗粒对幽门螺旋杆菌(Hp)相关性胃炎模型小鼠凋亡相关微粒蛋白(ASC)、白介素-18(IL-18)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)表达的影响。方法80只BALB/c小鼠按相同体重均值随机分为对照组、模型组、胃复康颗粒低剂量组、胃复康颗粒高剂量组,每组20只。除对照组外,采用Hp菌液灌胃方法制模。胃复康颗粒低、高剂量组分别按0.6、3 g/d灌胃给予胃复康颗粒,对照组、模型组给予等量的生理盐水,持续给药8周。观察小鼠的一般生物学特征;HE染色观察小鼠胃黏膜组织病理学形态;qRT-PCR法检测小鼠胃黏膜组织中Hp生长及代谢相关基因以及ASC、IL-18、Caspase-1 mRNA表达;ELISA法检测小鼠血清中细胞毒素相关基因A(CagA)、细胞空泡毒素A(VacA)和炎症标志物水平;Western Blot法检测胃黏膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体通路分子蛋白水平。结果对照组小鼠胃黏膜组织结构清晰,排列整齐,细胞呈现单柱状,固有层内腺体密集排列;模型组小鼠胃黏膜病变严重,组织呈现炎症细胞浸润、胃黏膜糜烂、胃黏膜坏死、脱落。与对照组比较,模型组延胡索酸还原酶A(FrdA)、延胡索酸还原酶B(FrdB)、乙酰脲利用蛋白A(HyuA)、三甲胺N-氧化物还原酶(TorA)、ASC、IL-18、Caspase-1 mRNA相对表达,CagA、VacA、CXC趋化因子配体1(CXCL1)、C-反应蛋白(CRP)、脂多糖(LPS)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和C3水平,NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。胃复康颗粒干预后,与模型组比较,胃复康颗粒低剂量组黏膜病变情况有所缓解,胃复康颗粒高剂量组黏膜病变情况得到明显缓解,且胃复康颗粒高剂量组Hp根除率明显高于胃复康颗粒低剂量组(P<0.01)。与模型组比较,胃复康颗粒低、高剂量组中FrdA、FrdB、HyuA、TorA、ASC、IL-18、Caspase-1 mRNA相对表达、CagA、VacA、CXCL1、CRP、LPS、1L-6、TNF-α和C3水平,NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平降低(P<0.01);与胃复康颗粒低剂量组比较,胃复康颗粒高剂量组上述所有指标进一步降低(P<0.01)。结论胃复康颗粒通过NLRP3炎性小体通路影响细菌生长代谢相关基因和Hp毒力因子,以降低炎症因子和ASC、IL-18、Caspase-1表达。

肺炎克雷伯菌肺炎对小鼠NLRP3炎症通路的影响

目的建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,并探究肺炎克雷伯菌感染对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路的影响。方法给小鼠气管内接种肺炎克雷伯菌,观察小鼠死亡率;接种肺炎克雷伯菌48 h后,取小鼠肺部匀浆涂板检查菌落数;取小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)离心,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测无细胞上清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-6、趋化因子配体1(KC)的水平,迈格林华-姬姆萨染色计数细胞沉淀中的中性粒细胞数;取肺部病理切片并进行苏木精-伊红(HE)染色观察肺部病变;提取肺部总蛋白,蛋白质印迹法检测NLRP3、核因子(NF)-κB p65、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-1)、人白介素-1β前体(pro-IL-1β)表达水平。结果成功建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,小鼠在144 h内死亡率达到百分之百,肺部有大量细菌负载,肺部中性粒细胞浸润增加,支气管肺泡灌洗液中IL-1β、TNF-α、IL-6、KC分泌升高,肺组织IL-1β、p-p65表达升高。结论通过将肺炎克雷伯菌液接种到小鼠肺部的方法所建立的肺炎小鼠模型稳定性高、可重复性好,肺部NLRP3炎症通路反应强烈。

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P<0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。