凋亡相关斑点样蛋白不同表位抗体对β淀粉样蛋白聚集及神经毒性作用的研究

目的 探讨凋亡相关斑点样蛋白(ASC)不同表位抗体对β淀粉样蛋白(Aβ)聚集和神经毒性的作用。方法 SH-SY5Y-APP695细胞培养体系培育按实验目的分组:A组(25μmol/L Aβ)、B组(2μmol/L ASC)、C组(2μmol/L ASC+25μmol/L Aβ+10μg/ml AL177)、D组(2μmol/L ASC+25μmo/L Aβ+10μg/ml ab155970)、E组(25μmol/L Aβ+2μmol/L ASC)用于探讨重组ASC蛋白与Aβ蛋白结合。对照组[磷酸盐吐温缓冲液(PBST)]、Aβ组(10μmol/L Aβ)、Aβ+N端组(10μmol/L Aβ+10μg/ml AL177)、Aβ+C端组(10μmo/L Aβ+10μg/ml ab155970)用于探讨细胞炎性反应。Ⅰ组(PBST)、Ⅱ组(10μmol/L Aβ)、Ⅲ组(10μmol/L Aβ+10μg/ml AL177)、Ⅳ组(10μmol/L Aβ+10μg/ml ab155970)用于细胞毒性检测。N端组[10μg/ml AL177+10μg/ml异硫氰酸荧光素(FITC)-Aβ_(42)]、C端组(10μg/ml ab155970+10μg/ml FITC-Aβ_(42))、空白组(PBST)用于免疫荧光染色。结果与A组比较,C组细胞中Aβ聚集减少,D组Aβ聚集增多(P<0.01)。与对照组比较,Aβ+C端组Aβ引起的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1含量明显增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。噻唑蓝法检测结果显示,Ⅱ组细胞活性低于Ⅰ组,差异有统计学意义(1.12±4.25 vs 0.73±5.68,P<0.01);Ⅲ组细胞活性明显高于Ⅱ组,差异有统计学意义(1.28±2.21 vs 0.73±5.68,P<0.05)。结论 ASC蛋白N端抗体AL177抑制Aβ聚集,ASC蛋白C端抗体ab155970促进Aβ聚集,并具有时间依赖性。C端抗体刺激Aβ引起炎性反应,N端抗体拮抗对Aβ神经细胞毒性。表明ASC不同表位抗体对Aβ聚集及神经毒性具有不同作用,对阿尔茨海默病防治有一定的应用前景。

白藜芦醇诱导NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3炎性体轴致胰腺腺泡细胞凋亡的机制

目的探讨白藜芦醇对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响及对NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NOD like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性体轴的调节作用。方法将50只大鼠随机分为假手术组、模型组和白藜芦醇低、高剂量组及地塞米松组,每组10只,除假手术组大鼠外,其余组大鼠通过牛黄胆酸钠逆行胰胆管注射制备SAP模型。手术结束5 min后,白藜芦醇低、高剂量组分别腹腔注射白藜芦醇30、60 mg·kg^(-1),地塞米松组大鼠腹腔注射地塞米松2 mg·kg^(-1),每日1次,连续给药3 d,假手术组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水。检测大鼠血清中淀粉酶和脂肪酶活性,白细胞介素(IL)-1β、IL-18和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量,检测胰腺组织病理损伤并进行病理评分,胰腺腺泡细胞凋亡指数以及NLRP3、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的蛋白相对表达量。结果假手术组大鼠胰腺组织结构正常,无水肿、充血或坏死;模型组胰腺间质水肿,肺泡间隔变宽,可见大量炎性细胞浸润,实质出现点状或片状出血或坏死;白藜芦醇低、高剂量组和地塞米松组胰腺组织病变程度均减轻。与假手术组比较,模型组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,白藜芦醇低、高剂量组和地塞米松组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05);与白藜芦醇低剂量组比较,高剂量组和地塞米松组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05);与白藜芦醇高剂量组比较,地塞米松组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论白藜芦醇可减轻SAP大鼠胰腺损伤,抑制胰腺腺泡细胞凋亡,其可能是通过阻碍NLRP3炎性体轴激活发挥作用的。

全身免疫炎症指数和凋亡相关斑点样蛋白对脑卒中诊断的价值研究

目的探讨全身免疫炎症指数(SII)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)对脑卒中的诊断价值。方法选取2022年1—9月该院收治的357例脑卒中患者为病例组,同期204例表观健康的体检者为对照组。根据临床诊断将357例脑卒中患者分为脑梗死组(259例)和脑出血组(98例),根据神经功能缺损程度将其分为轻型脑卒中组(156例)和中重型脑卒中组(201例)。根据血常规结果计算SII,采用磁微粒化学免疫发光方法检测血清ASC水平。分析并比较各组ASC水平和SII,以及两指标对不同类型脑卒中的诊断价值。结果病例组ASC水平、SII明显高于对照组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果表明,SII(OR=1.002)、ASC(OR=1.780)是脑卒中发病的独立危险因素。中重型脑卒中组ASC水平、SII明显高于轻型脑卒中组,脑出血组ASC水平、SII明显高于脑梗死组(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,SII和ASC均具有良好的诊断及鉴别诊断效能(P<0.05),当两指标联合应用时,可提高对脑卒中的诊断效能(P<0.05)。结论SII和ASC可作为脑卒中诊断的参考指标,并可作为不同类型、不同严重程度脑卒中鉴别诊断的参考指标。

NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3介导的细胞焦亡对哮喘大鼠炎症水平的调控作用

目的:探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)在哮喘中炎症水平的调控作用机制。方法:从GSE40732和GSE69683数据集中分析哮喘组和对照组之间的差异表达基因(DEGs),并鉴定程序性细胞死亡在哮喘中的水平。在NLRP3敲降大鼠中建立哮喘大鼠模型,通过HE染色和Tunel染色分析肺组织的病理变化和凋亡水平,通过免疫组化检测肺组织中NLRP3的表达,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测NLRP3介导细胞焦亡相关mRNA和蛋白表达的改变。结果:哮喘组和对照组之间鉴定了926个差异表达基因(DEGs),细胞焦亡在哮喘中的水平显著高于对照组。哮喘模型中的炎症、凋亡和NLRP3水平明显高于对照组,而在NLRP3敲降后,哮喘大鼠中的炎症和凋亡水平降低。与对照组比较,NLRP3、Gasdermin D蛋白(GSDMD)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)和Caspase-8在哮喘大鼠模型中的表达升高,高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达降低(均P<0.05),这些异常表达在NLRP3敲降后得到了显著的改善(P<0.05)。结论:NLRP3通过细胞焦亡信号可能在哮喘中发挥促炎促凋亡作用,阻断该通路可能是改善哮喘炎症的潜在治疗策略。

凋亡相关斑点样蛋白和胱天蛋白酶1在皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌中的表达及意义

凋亡相关斑点样蛋白（ASC）是多种炎症小体，如NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2等所共有的接头蛋白，通过诱导胱天蛋白酶（caspase）-1自活化引起下游炎症因子的产生［1］。ASC在健康人角质形成细胞高表达。而在肿瘤组织中，ASC和caspase-1具有双重作用，即通过诱导炎症微环境而促进肿瘤和通过诱导细胞程序性死亡、维持细胞自稳态而抑制肿瘤，且这种双重作用依赖于不同的细胞类型［1，2］。我们观察了ASC和caspase-1在皮肤鳞状细胞癌（SCC）和基底细胞癌（BCC）中的表达，探讨其可能的作用和意义。

2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞凋亡相关斑点样蛋白mRNA的表达

目的:分析2型糖尿病(T2DM)合并颈动脉粥样硬化(CAS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中衔接蛋白凋亡相关斑点样蛋白(ASC)mRNA的表达及作用。方法:根据华盛顿大学CAS斑块超声分级标准将107例T2DM患者分为单纯T2DM组(n=26)、T2DM轻度斑块组(n=32)、T2DM中度斑块组(n=38)和T2DM重度斑块组(n=11)。另选非T2DM的CAS患者作为单纯CAS组(n=35),以及体检健康者作为正常对照组(n=35)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)技术检测各组PBMCs中ASC mRNA表达水平。统计分析各组差异及ASC mRNA水平与CAS斑块严重程度的关系。结果:各病例组ASC mRNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),T2DM合并CAS组ASC mRNA表达水平显著高于单纯CAS组(P<0.01);ASC mRNA表达水平轻度斑块组>中度斑块组>重度斑块组,即ASC mRNA表达水平与T2DM患者CAS斑块程度呈明显负相关(r=-0.43,P<0.05)。结论:ASC mRNA表达增加可能是T2DM合并AS的发病因素和CAS斑块活跃性的指征。

凋亡相关斑点样蛋白敲除PK-15细胞系的建立及对PRV感染的影响

本试验旨在研究凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)感染PK-15细胞的影响。以慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建猪肾上皮细胞(PK-15)ASC基因稳定敲除细胞系,通过T7核酸酶检测靶基因的敲除效率;CCK-8试剂盒检测PK-15敲除ASC基因对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测PK-15以及PK15-ASC-/-细胞感染PRV-GFP病毒的增殖差异;RT-PCR检测PRV-gB及IFN-β、ISG15、IL^-1βmRNA表达水平;Western blot检测PRV gE蛋白的表达;TCID50检测子代病毒感染力的滴定。结果表明:两对特异性sgRNA均能对ASC进行基因编辑,但经过T7核酸酶酶切检测进行基因编辑效率分析,结果表明,sgRNA2的基因编辑效率最高;CCK-8试剂盒检测细胞活力结果表明,PK-15以及PK15-ASC-/-细胞活力无影响;流式细胞仪检测结果表明PRV-GFP在PK15-ASC-/-细胞中的增殖显著低于PK-15细胞;定量RT-PCR结果表明,PRV-gB基因在PK15-ASC-/-细胞中的转录水平显著低于PK-15细胞,而IFN-β、ISG15基因在PK15-ASC-/-细胞中的转录水平显著高于PK-15细胞;Western blot结果表明,PRV的gE蛋白在PK15-ASC-/-细胞中的表达显著低于PK-15细胞;滴度测定结果表明敲除ASC基因能够显著抑制子代病毒的增殖能力。本研究成功构建了PK15-ASC-/-细胞系,并通过PRV感染试验证实敲除ASC基因可以抑制PRV在PK-15细胞中的增殖。

宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体和相关细胞因子表达及临床意义

目的探究宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和相关细胞因子的表达水平及临床意义。方法选取2021年3月至2024年3月收治的宫颈癌患者78例作为癌变组,选取同期宫颈上皮内瘤变患者78例作为癌前病变组。比较2组血清NLRP3炎症小体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)]、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关性分析血清NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-18、IL-1β的关系;分析宫颈癌患者相关细胞因子水平和临床病理特征之间的关系。结果癌变组血清IL-18、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1水平均高于癌前病变组(P<0.01);Pearson相关性分析结果显示,患者血清NLRP3、ASC、Caspase-1水平与IL-18和IL-1β水平均呈正相关(P<0.05,P<0.01)。宫颈癌患者肿瘤临床分期越高、分化程度越低,IL-18和IL-1β水平越高(P<0.01);有淋巴结转移和无淋巴结转移的宫颈癌患者IL-18和IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌患者血清IL-18、IL-1β水平和血清NLRP3炎症小体均异常升高,且其水平变化与肿瘤恶性进展有关。

与凋亡相关的斑点样蛋白在大鼠急性胰腺炎中的作用机制

目的研究大鼠发生急性胰腺炎时,与凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)在胰腺组织的表达及其与caspase-1和IL-1β的关系,为评价ASC在大鼠急性胰腺炎时的作用机制提供实验依据。方法(1)将20只健康、成年的SD大鼠随机分成2组,一组进行急性胰腺炎造模,另一组作为正常对照组。造模24 h后处死大鼠,取大鼠新鲜血清,测定血清淀粉酶活性及IL-1β含量。取大鼠胰腺组织,用免疫组化技术检测ASC和caspase-1在胰腺组织中的表达情况。(2)RT-PCR法扩增大鼠胰腺组织中ASC mRNA。结果(1)急性胰腺炎组血清淀粉酶和IL-1β水平较正常对照组水平均显著升高,两者间差异有统计学意义(P<0.01)。(2)免疫组化检测、分析发现:ASC和caspase-1在正常对照组大鼠胰腺组织中少量表达,在急性胰腺炎组表达显著增加,两组间差异有统计学意义(P<0.01)。(3)RT-PCR检测发现:急性胰腺炎组大鼠胰腺组织中ASC mRNA的含量明显多于正常对照组。结论当发生胰腺炎时,大鼠胰腺组织中ASC的表达上调并调节caspase-1的活化,导致IL-1β的分泌增加,引起炎症反应,从而证明ASC在胰腺炎的发病中起重要作用。

包含CARD的凋亡相关斑点样蛋白功能特点及其在创伤性脑损伤中的作用

创伤性脑损伤序贯触发时空动态炎症损伤,启动神经炎症反应。炎症小体作为炎症反应的重要组成部分,其过度活化与创伤性脑损伤的发展密切相关,而包含caspase募集结构域(CARD)的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)是一种参与炎症小体组装和焦亡的衔接蛋白。ASC在寡聚、聚集成丝、自我组装成斑点等时空动态演进过程中对神经炎症具有重要作用。本文就ASC结构特点及其在创伤性脑损伤中的作用机制进行综述,旨在为创伤性脑损伤的治疗提供新思路与新策略。

Nei核酸内切酶Ⅷ样蛋白1对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞凋亡与自噬的影响

目的探究Nei核酸内切酶Ⅷ样蛋白1(NEIL1)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的晶状体上皮细胞(LECs)凋亡与自噬的影响。方法以年龄相关性白内障(ARC)患者、接受透明晶状体摘除术的黄斑前膜患者的晶状体前囊膜样本和晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞为研究对象,采用RT-PCR实验检测NEIL1 mRNA表达。将SRA01/04细胞随机分为对照组、OE-Vector组和OE-NEIL1组,采用RT-PCR和Western blot检测过表达效率;将细胞随机分为对照组、H_(2)O_(2)组、OE-Vector H_(2)O_(2)组、OE-NEIL1 H_(2)O_(2)组,采用CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测自噬相关蛋白(ATG7、P62、Beclin1、LC3-I和LC3-II)和凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达,荧光染色检测细胞凋亡与线粒体膜电位情况。结果ARC患者晶状体前囊膜样本中的NEIL1 mRNA表达显著低于黄斑前膜患者,且H_(2)O_(2)组SRA01/04细胞中NEIL1 mRNA的表达同样低于对照组(均为P<0.05)。RT-PCR与Western blot检测结果显示,OE-NEIL1组SRA01/04细胞中NEIL1 mRNA和蛋白表达均显著高于OE-Vector组(均为P=0.000)。与对照组相比,H_(2)O_(2)组SRA01/04细胞中细胞活力显著降低;Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调;Mito-Tracker标记活细胞数显著减少,Annexin V-FITC标记的凋亡细胞数显著增多,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与OE-Vector H_(2)O_(2)组相比,OE-NEIL1 H_(2)O_(2)组SRA01/04细胞中细胞活力显著升高;自噬相关蛋白(ATG7、P62、Beclin1、LC3-I和LC3-II)表达均显著上调;Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调;Mito-Tracker标记的活细胞数增加,Annexin V-FITC标记的凋亡细胞数减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论在H_(2)O_(2)诱导氧化应激条件下,NEIL1可通过促进LECs的自噬,维持LECs内环境稳定,增加其细胞活力从而减少LECs凋亡,参与ARC的发生发展。

血清凋亡相关斑点样蛋白水平在儿童急性发作期支气管哮喘中的变化及意义

目的研究血清凋亡相关斑点样蛋白(ASC)在儿童急性发作期支气管哮喘中的变化及与临床意义。方法方便选择2019年6月—2020年6月收治的48例急性发作期支气管哮喘儿童作为观察组,30名同龄段健康体检儿童作为对照组,通过酶联免疫吸附法测定外周血清中ASC的水平,比较两组儿童外周血ASC的水平差异,分析ASC与血清白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)水平的相关性。比较ASC高水平和低水平急性发作期儿童治疗的效果,并通过ROC曲线预测以ASC水平作为治疗效果预测效能。结果观察组治疗前、观察组治疗后,以及对照组ASC水平分别为(46.71±19.91)、(9.76±3.79)、(7.65±2.99)pg/mL,IL-18水平分别为(230.89±76.17)、(79.97±30.78)、(13.43±8.38)pg/mL,IL-1β水平分别为(51.41±22.98)、(23.71±11.88)、(8.08±3.36)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.001)。治疗前ASC水平与IL-18、IL-1β水平显著正相关(r=0.926、0.635,P<0.001)。治疗前ASC高水平组的疗效等级平均秩次29.29,显著高于ASC低水平组患儿的疗效等级平均秩次19.17,差异有统计学意义(Z=3.736,P<0.001)。以ASC水平作为预测儿童急性发作期支气管哮喘治疗效果ROC曲线下面积(AUC)为0.855(P<0.001),95%CI为0.743-0.968。结论急性发作期支气管哮喘儿童血清ASC水平显著升高,且与临床治疗相关,可能是早期预测患儿疗效的良好指标。

miR-138靶向HIF-1α介导NLRP3炎症小体对脑卒中大鼠神经元凋亡的影响

目的探究微小RNA(miR)-138对缺氧诱导因子(HIF)-1α和Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP)3通路的调控作用及对脑卒中大鼠神经元凋亡的影响。方法收集60例脑卒中患者及20例健康体检者血清,qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-138表达。中动脉线栓阻塞法建立大鼠脑卒中模型,设置假手术组、模型组、miR-138激动剂(miR-138 agomir)组、agomir-NC组、HIF-1α激活剂组、miR-138 agomir+HIF-1α激活剂组,每组15只。改良神经功能损害程度评分(mNSS)检测神经功能缺损症状;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死面积;尼氏及TUNEL染色法检测神经元损伤及凋亡;免疫组化法检测海马组织M1型巨噬细胞极化表面标志物CD11c、NLRP3阳性表达;Western印迹检测HIF-1α、NLRP3、白细胞介素(IL)-1β、IL-18、半胱天冬蛋白酶(Caspase)-1、pro-Caspase-1蛋白表达。结果miR-138在脑卒中患者血清中表达较健康者显著降低(P<0.05)。与假手术组相比,模型组海马组织神经元损伤及凋亡加重,促炎表型的巨噬细胞浸润明显(CD11c阳性表达升高),脑梗死面积及神经功能缺损评分升高,miR-138表达降低,HIF-1α活化介导的NLRP3炎症小体活性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-138 agomir干预治疗可缓解脑卒中大鼠神经元损伤及凋亡,降低脑梗死面积及神经功能缺损评分,抑制HIF-1α活化介导的NLRP3炎症小体激活发挥的促炎作用,差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α激活剂可加重脑卒中大鼠神经元损伤及凋亡,并削弱miR-138 agomir发挥的抗HIF-1α/NLRP3活化、抗炎及抗凋亡作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-138表达,可通过抑制HIF-1α介导的NLRP3炎症小体活化,发挥抗脑卒中后神经元凋亡作用。

车叶草苷对少弱精症大鼠抗氧化应激及抗细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨车叶草苷(ASP)对少弱精症大鼠抗氧化应激及抗细胞凋亡的作用机制。方法:通过灌胃奥硝唑建立少弱精症大鼠模型,将SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、车叶草苷组(60 mg/kg)和通路抑制剂(第3周腹腔注射2 mg/kg)+车叶草苷组,每组10只。检测大鼠精子参数;酶联免疫吸附试验法检测血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;实时萤光定量聚合酶链式反应法检测睾丸组织B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bax)和核因子E2相关因子2(Nrf2)基因水平;蛋白质免疫印迹法检测睾丸组织Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、Nrf2和血红素加氧酶1(HO-1)水平。结果:与对照组比较,模型组精子活力、精子浓度、GSH-Px、GSH、SOD、Bcl-2、Keap1、Nrf2、HO-1水平下降(P<0.05),MDA和Bax水平上升(P<0.05);与模型组比较,车叶草苷组精子活力、精子浓度、GSH-Px、GSH、SOD、Bcl-2、Keap1、Nrf2、HO-1水平上升(P<0.05),MDA和Bax水平下降(P<0.05)。结论:ASP能有效改善少弱精症大鼠精子活力、精子浓度,减少睾丸组织细胞的凋亡,改善氧化应激损伤,Keap1/Nrf2信号通路的激活可能是其作用机制。

温针灸对兔膝骨关节炎软骨中ASC、Caspase-1和P2X7蛋白表达的影响

目的 观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型兔关节软骨组织中凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、嘌呤能离子通道型受体7(P2X7)表达的影响,研究温针灸治疗KOA的作用机制。方法 取40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、抑制剂组和温针灸组,每组10只。除空白组外,其余各组采用经典右后肢膝关节伸直位,用石膏管型固定4周制备兔KOA模型。造模成功后,各组给予相应干预措施。应用Lequesne MG评分量表评估兔膝关节状态改变与行为学改变,HE染色观察膝关节软骨病理形态学改变,免疫组织化学法和Western blot法检测软骨组织中ASC、Caspase-1、P2X7蛋白的表达,免疫荧光检测Caspase-1蛋白的表达。结果 造模前,各组实验兔Lequesne MG评分差异无统计学意义(P>0.05);造模后,与空白组相比,其余组Lequesne MG评分均上升(P<0.05);干预治疗后,与模型组比较,温针灸组和抑制剂组评分降低(P<0.05)。HE染色显示,空白组软骨表面结构完整,软骨细胞排列均匀;模型组软骨表面粗糙不平,软骨受损明显,软骨细胞形态大小不一,排列紊乱;抑制剂组和温针灸组软骨表面相对光滑、完整,软骨细胞分布较为均匀,软骨层结构相对清晰。与空白组比较,模型组Mankin’s评分升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组Mankin’s评分降低(P<0.05)。免疫组织化学法、免疫荧光及Western blot检测结果显示,与空白组比较,模型组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均降低(P<0.05);温针灸组和抑制剂组相比,ASC、Caspase-1、P2X7表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 温针灸可减轻兔KOA软骨损伤,其机制可能与ASC、Caspase-1、P2X7表达降低及细胞焦亡抑制有关。

调心方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元凋亡的调控作用

目的 探讨调心方的药效及作用机制。方法 原代培养大鼠海马神经元 ,Aβ 1- 42诱导神经细胞毒模型。采用 FDA与 PI双染检测神经元存活率 ,Hoechst332 5 8染色、TUNEL 判断神经元凋亡 ,免疫细胞化学研究 Caspase-3表达 ,Northern Blot、RT- PCR研究凋亡相关基因 (bcl- 2、bax、c- jun、c- fos)表达。结果 神经元经 Aβ l- 42处理后 ,活细胞数减少 ,染色质浓缩、核碎裂 ,TU NEL 染色阳性神经元增多 ,Caspase- 3表达增加 ,bcl- 2 m RNA表达减少 ,而 bax与 c- jun表达增加、c- fos的表达变化不明显。调心方可显著改善上述变化。结论 调心方对 Aβ1- 42神经细胞毒有保护作用 ,可提高细胞存活率 ,抑制凋亡。其机制可能通过提高 bcl- 2 m RAN水平 ,降低 bax和 c- jun m RAN水平 ,减少 Caspase-

ASC自身抗体及总胆固醇与阿尔茨海默病的相关性研究

目的探讨凋亡相关斑点样蛋白自身抗体(NAbs-ASC)及总胆固醇(TC)与阿尔茨海默病(AD)的相关性。方法选取2022年10月—12月陆军军医大学大坪医院神经内科门诊38例AD患者及健康管理科38例为对照组。比较两组血浆NAbs-ASC及总胆固醇水平,分析NAbs-ASC及TC与AD的相关性。结果AD组血浆的NAbs-ASC水平低于对照组(P<0.05),总胆固醇水平高于对照组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,NAbs-ASC水平与总胆固醇水平呈负相关(r_(s)=-0.290,P<0.05),认知功能水平与总胆固醇水平呈负相关(r_(s)=-0.380,P<0.05),而与血浆NAbs-ASC水平呈正相关(r_(s)=0.550,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,总胆固醇升高为AD的危险因素[OR=3.004(95%CI:1.075,8.396)],NAbs-ASC升高为AD的保护因素[OR=0.998(95%CI:0.997,0.999)]。结论NAbs-ASC降低、总胆固醇升高与AD有相关性,并与认知功能水平下降有关。

脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察App17肽对脑室注射链脲佐菌素的大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响,探讨胰岛素信号转导通路障碍对神经元存活的作用。方法脑室注射链脲佐菌素(STZ)制作大鼠痴呆模型。3周后,皮下注射App17肽。4周后取脑组织做Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色及Western blotting半定量分析。结果模型组大鼠海马内Bax、CytoC阳性反应神经元细胞数目多,胞质深染,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P<0.01);模型组大鼠海马内Bcl-2阳性细胞数目少,胞质染色淡,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P<0.01)。Western blotting半定量分析可见、Bcl-2、Bax、CytoC出现清晰的条带,组间可见较明显的差异(P<0.01)。结论脑室注射STZ的大鼠海马内促进凋亡的Bax、CytoC表达增加;抑制凋亡的Bcl-2表达降低。App17肽可影响上述蛋白的表达,使之接近正常。胰岛素信号转导通路对神经元存活有一定作用。

凋亡相关斑点样蛋白在阿尔茨海默病中介导β淀粉样蛋白和tau蛋白的作用机制研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种进行性神经退行性疾病,其主要病理特征包括β淀粉样蛋白(Aβ)聚集、过度磷酸化tau蛋白和神经炎症,等。半胱氨酸蛋白酶募集域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)是炎症小体的重要接头蛋白。研究发现ASC与AD的发生发展密切相关,ASC可通过激活炎症反应,加速Aβ聚集,促进神经元凋亡,加重AD病理发展。此外,ASC介导tau蛋白的炎症反应通路参与AD的病理过程。文中将从ASC的结构和功能出发,详细阐述ASC在AD发病机制中与Aβ和tau蛋白的作用,旨在为AD的治疗提供新的靶点。

常用麻醉药诱导细胞凋亡和产生Alzheimer’S相关蛋白的新发现

波士顿，2007年2月6日：一项新的研究发现，一种非常常用的麻醉药物可以使脑产生AlZheimer’s病样的改变。先前的研究已经发现，应用吸入麻醉药异氟醚培养细胞可以引起β-淀粉样蛋白（在AlZheimer’s病患者脑中发现的老年斑块的主要成分）产生，以及细胞凋亡过程。