牛蒡子苷元对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用及其机制

目的观察牛蒡子苷元(ATG)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用,并探讨其机制。方法将30只Wistar大鼠随机分为3组各10只,实验组和模型组均采用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂混合而成的抗原乳剂诱导制备EAE模型,正常组皮下注射等量生理盐水与完全弗氏佐剂制备而成的空白乳剂。皮下注射后当日起,实验组大鼠每日腹腔注射3 mg/kg的ATG溶液,共14 d;正常组与模型组注射等量生理盐水。皮下注射后当日至第14 d,每日采用神经功能学评分法评价大鼠神经功能。皮下注射第14 d处死大鼠,HE染色观察脑和脊髓组织组织病理学,免疫荧光染色检测脊髓组织抗离子钙接头蛋白分子1(Iba1)相对荧光强度,RT-PCR法检测脊髓组织IL-1β、IL-6、TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA,Western blotting法检测脊髓组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、血红素氧合酶-1(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白,分光光度法检测脊髓组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)。结果与模型组比较,实验组大鼠神经功能评分降低(P<0.05)。与模型组比较,实验组脑、脊髓组织中炎症细胞浸润明显减少,活化的小胶质细胞数量降低(P均<0.05)。与模型组比较,实验组脊髓组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1 mRNA相对表达量降低,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量降低,MDA含量降低,GSH含量升高,Nrf2、HO-1相对表达量升高(P均<0.05)。结论ATG对大鼠EAE有治疗作用,机制可能与降低NLRP3/ASC/Caspase-1炎症体通路介导的神经炎症,活化Nrf2/HO-1信号通路介导的抗氧化作用有关。

NLRP3炎症小体通路在慢性阻塞性肺病发展中的作用研究

目的探讨平常固有免疫中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路在慢性阻塞性肺病(COPD)发展中的作用。方法选取94例COPD患者为研究对象,中度、重度、极重度分别31、33和30例。采集急性加重期和稳定期的外周血标本,采用荧光定量PCR检测外周血NLRP3、接头蛋白凋亡相关点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平,采用ELISA法测定血清细胞因子IL-1β、IL-18浓度;并在稳定期测定肺功能,分析稳定期外周血炎症小体成分及下游分子mRNA表达水平与肺功能指标的相关性。结果不论是稳定期或急性加重期,重度、极重度组外周血NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平均明显高于中度组(均P<0.05),极重度组又明显高于重度组(均P<0.05);与稳定期比较,3组患者急性加重期均明显升高(均P<0.05)。不论是稳定期或急性加重期,重度、极重度组血清IL-1β、IL-18浓度均明显高于中度组(均P<0.05),极重度组又明显高于重度组(均P<0.05);与稳定期比较,3组患者急性加重期均明显升高(均P<0.05)。稳定期COPD患者外周血炎症小体成分及下游分子mRNA表达水平与FEV_1占预计值、FEV_1/FVC均呈负相关(均P<0.01)。结论 NLRP3炎症小体通路可能参与COPD反复急性加重、肺功能进行性下降的过程,与COPD进展密切相关。

青葙皂苷对小鼠心肌梗死的保护作用及机制研究

目的研究青葙皂苷对小鼠心肌梗死的保护作用,并探讨其作用机制。方法将100只C57/B6小鼠随机分为正常对照组(5%西黄蓍胶溶液)、模型对照组(5%西黄蓍胶溶液)、青葙皂苷小剂量(10mg·kg^-1·d^-1)、中剂量组(30mg·kg^-1·d^-1)和大剂量组(90mg·kg^-1·d^-1)。除正常对照组外其他4组小鼠均结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型。各组C57/B6小鼠造模前1周开始给药,造模后继续给药4周,采用Vevo2100系统检查小鼠心功能,酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18、心肌肌钙蛋白T(cT-nT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,心脏切片经2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色后测定心脏梗死面积,Western blot检测心肌组织核转录因子-κBp65(NF-κBp65)、隐热蛋白(NLRP3)、凋亡相关点样蛋白(ASC)和Caspase-1p45蛋白的表达。结果(1)青葙皂苷可呈剂量依赖性降低心肌梗死小鼠左室收缩末期内径(LVESD)和左室舒张末期内径(LVEDD),升高左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS),差异均有统计学意义(P<0.05);(2)青葙皂苷可呈剂量依赖性降低心肌梗死小鼠血清cT-nT、CK-MB和LDH水平(P<0.05);(3)青葙皂苷可呈剂量依赖性降低心肌梗死小鼠血清IL-1β和IL-18水平(P<0.05);(4)青葙皂苷可呈剂量依赖性抑制心肌梗死小鼠的心肌梗死面积(P<0.05);(5)青葙皂苷可呈剂量依赖性抑制心肌梗死小鼠心肌NF-κBp65、NLRP3、ASC和Caspase-1 p45蛋白表达(P<0.05)。结论青葙皂苷对心肌梗死具有保护作用,其作用可能与其调控NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路有关。