FK506对大鼠弥漫性轴索损伤后神经元凋亡及轴突再生相关蛋白表达的影响

目的研究FK506对大鼠弥漫性轴索损伤后神经元凋亡及轴突再生相关蛋白神经丝蛋白200(NF200)、神经生长相关蛋白43(GAP-43)、凋亡相关蛋白激酶1(DAPK1)表达的影响。方法通过头颅瞬间旋转损伤装置建立大鼠弥漫性轴索损伤模型,90只SD成年雄性大鼠随机分为假手术组、DAI模型组、FK506干预组(各组又分为6h、1d、7d亚组,各组n=10);各组于预定时间点采用mNSS法评估神经功能,免疫组化染色法检测DAPK1、NF200的表达变化,Western blot法检测GAP-43的表达变化、TUNEL检测神经元凋亡,实验数据以均数±标准差记录,使用统计学SPSS 18.0软件进行单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 FK506干预组较DAI组损伤后的NF200标记轴索病理改变显示,形成轴索肿胀、轴索球数目明显降低;FK506干预组较DAI组各时间点DAPK1蛋白表达明显降低,神经元凋亡数目明显减少,GAP-43、NF200蛋白表达明显升高。结论 FK506能够在DAI后减少神经元细胞凋亡与轴索病理改变,减轻神经组织损伤;FK506能够加速神经元再生,促进脑组织损伤的修复。

凋亡相关蛋白激酶样蛋白1低甲基化对表皮生长因子受体19外显子缺失突变型肺癌患者预后的影响

目的探讨凋亡相关蛋白激酶样蛋白1(DAPL1)低甲基化对表皮生长因子受体19外显子(EGFR Del19)缺失突变型肺癌患者预后的影响。方法收集基因组数据共享(GDC)TCGA肺腺癌、TCGA肺腺癌、TCGA肺癌数据库中肺癌患者的临床病理资料,分析DAPL1甲基化水平对EGFR Del19缺失突变患者预后的影响。相关性分析采用线性回归模型,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,两组间生存曲线的差异采用Log rank检验。结果GDC TCGA肺腺癌、TCGA肺腺癌和TCGA肺癌数据库中,DAPL1高表达肺癌患者的5年生存率(分别为31.9%、27.5%和33.0%)高于DAPL1低表达者(分别为11.0%、11.6%和13.8%),差异均有统计学意义(P值分别为0.006、0.028和0.025);EGFR Del19缺失突变亚型肺癌患者的DAPL1中位表达水平(分别为12.8、2.75和2.9)高于EGFR其他亚型突变者(分别为11.6、1.75和1.8,均P<0.05)。TCGA肺腺癌和TCGA肺癌数据库中,DAPL1甲基化水平较低的肺癌患者5年生存率(分别为22.4%和16.4%)高于DAPL1甲基化水平较高的肺癌患者(分别为15.1%和14.2%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。DAPL1表达水平与EGFR突变亚型呈正相关(r=0.909,P<0.05),与DNA甲基化呈负相关(r=-0.891,P<0.05)。肺癌患者DAPL1的表达受DNA甲基化调控,进而影响肺癌患者的预后。结论DAPL1的高表达或低甲基化与肺癌EGFR Del19缺失突变亚型有关,DAPL1低甲基化肺癌患者的总生存时间更长。

肺癌患者支气管肺泡灌洗液中DAPL1和MLH1基因甲基化水平检测及其临床意义研究

目的检测肺癌患者支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中凋亡相关蛋白激酶样蛋白1(death-associated protein kinase like 1,DAPL1)和错配修复基因(Mut L homologue l,MLH1)甲基化水平,进一步研究基因甲基化对早期肺癌的诊断价值及其与临床病理特征的关系。方法回顾性选取2022年1月~2024年1月蒙城县第二人民医院收治的疑似早期肺癌患者142例,根据最终病理学结果分为肺癌组(n=82)和肺部良性病变组(n=60)。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组BALF样本中DAPL1和MLH1甲基化水平;分析DAPL1和MLH1甲基化对早期肺癌的临床诊断价值及其与肺癌患者临床病理特征的关系。结果肺癌组患者BALF中DAPL1和MLH1基因甲基化水平分别为53.66%(44/82),56.10%(46/82),明显高于良性病变组的11.67%(7/60)和18.33%(11/60),差异具有统计学意义(χ^(2)=56.544,20.565,均P<0.05)。DAPL1和MLH1基因甲基化诊断早期肺癌的敏感度分别为53.66%(44/82)和56.10%(46/82),特异度分别为88.33%(53/60)和81.67%(49/60),准确度分别为68.31%(97/142)和66.90%(95/142);DAPL1甲基化联合MLH1甲基化诊断早期肺癌的敏感度和准确度分别为86.59%(71/82),85.92%(122/142),均高于单一指标(Z=24.411,16.450,均P<0.05)。肺癌患者BALF中DAPL1和MLH1基因甲基化水平与临床分期、吸烟史及淋巴结转移密切相关(χ^(2)=5.493,13.083;8.167,6.946;9.303,4.523,均P<0.05)。Spearman相关性显示,DAPL1和MLH1基因甲基化与肺癌患者临床分期、吸烟史及淋巴结转移均呈正相关(r=0.523,0.602;0.548,0.498;0.630,0.524,均P<0.05)。结论BALF中DAPL1和MLH1基因甲基化检测对于早期肺癌具有较高的临床诊断价值,且两者基因甲基化水平与肺癌患者病情进展及吸烟史有关。

复方麝香注射液联合神经节苷脂对弥散性轴索损伤大鼠神经元凋亡的影响

目的:探讨复方麝香注射液联合神经节苷脂对弥散性轴索损伤(DAI)大鼠神经元凋亡及神经丝蛋白200(NF200)、生长相关蛋白43(GAP-43)、凋亡相关蛋白激酶1(DAPK1)表达的影响。方法:采用大鼠头颅瞬间旋转损伤装置建立DAI大鼠模型。将成功建立的45只DAI大鼠随机分为模型组、实验组和联合组,每组15只;另选择15只正常大鼠作为对照组。实验组大鼠腹腔注射单唾液酸四己糖神经节苷脂钠[30 mg/(kg·d)],联合组大鼠腹腔注射单唾液酸四己糖神经节苷脂钠[30 mg/(kg·d)]+复方麝香注射液[2 mL/(kg·d)],对照组与模型组腹腔注射等量生理盐水,连续干预7 d。采用改良神经功能缺损评分(mNSS)法评估各组大鼠的神经功能缺损情况;采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化;采用TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测各组大鼠神经元凋亡情况;采用蛋白质免疫印迹(Wb)法检测大鼠脑组织NF200、GAP-43与DAPK1蛋白表达。结果:干预第1~7天,模型组、联合组与实验组大鼠mNSS评分均逐渐降低;与对照组比较,模型组大鼠第1~7天的mNSS评分均明显升高,但联合组与实验组低于模型组,联合组低于实验组(P<0.05);与对照组比较,模型组大鼠神经元凋亡指数及脑组织DAPK1蛋白相对表达量均明显升高,且联合组与实验组低于模型组,联合组低于实验组(P<0.05);NF200、GAP-43蛋白相对表达量明显降低,且联合组与实验组高于模型组,联合组高于实验组(P<0.05)。结论:复方麝香注射液联合神经节苷脂治疗DAI可改善大鼠神经功能缺损情况,抑制神经元凋亡,改善神经功能,其作用机制可能与上调脑组织NF200、GAP-43蛋白表达,下调DAPK1蛋白表达相关,且两药联合使用效果更佳。

5-氮胞苷对宫颈癌细胞系DAPK1异常甲基化的影响

目的 观察宫颈癌细胞系SiHa及HeLa中凋亡相关蛋白激酶 1(DAPK1)的表达与甲基化修饰之间的相关性,以及5 氮胞苷对细胞DAPK1表达和生长的影响。方法 应用甲基化特异性PCR法分析细胞中DAPK1的甲基化状态;采用RT- PCR及免疫组化SABC法检测不同浓度 5- 氮胞苷干预对宫颈癌细胞 DAPK1 mRNA及蛋白表达的影响;MTT法观察5 -氮胞苷对细胞增殖的影响。结果 DAPK1基因在宫颈癌细胞 SiHa中有甲基化修饰,5- 氮胞苷干预能使其甲基化的DAPK1基因重新表达并抑制细胞生长。结论 DAPK1 的甲基化修饰是宫颈癌发生重要机制之一,5 -氮胞苷能使甲基化的DAPK1去除甲基化修饰,重新表达并恢复抑癌作用。

胞二磷胆碱对大鼠弥漫性轴索损伤后神经元保护作用的研究

目的探讨胞二磷胆碱对大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后脑细胞功能变化的影响,评估药物的治疗价值。方法采用大鼠头部瞬间旋转损伤装置制备DAI模型,通过胞二磷胆碱及神经元凋亡通路抑制剂辛伐他汀干预控制,对比观察胞二磷胆碱对DAI大鼠神经修复的作用,于术后24、48、72 h及7d提取脑组织标本,western blot法检测SDF-1和神经元凋亡及死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)的表达变化,并检测β-APP的表达来指示轴突的损伤程度,用免疫荧光染色指示Rh OA和NOGO-A表达的相关性。结果 DAI模型组24 h后均出现明显的神经细胞坏死和轴突变性等病理改变;大脑皮层Rh OA、NOGO-A、SDF-1和DAPK1随着DAI后时间的延长而增加,经免疫荧光双染色显示两者在脑内的表达有显著的同一性;胞二磷胆碱及辛伐他汀能明显降低SDF-1和DAPK1的表达,胞二磷胆碱作用更加显著。结论胞二磷胆碱可明显改善DAI后神经功能并减轻轴突损伤。

DAPK1、hTERT在口腔鳞癌中的表达及其临床意义研究

目的:探讨凋亡相关蛋白激酶1(DAPK1)、端粒酶催化亚单位(hTERT)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达,并探讨其临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测DAPK1、hTERT在93例OSCC组织及10例癌旁正常组织中的表达,并分析其与OSCC临床病理参数之间的关系及其在OSCC浸润前沿中的作用。结果:癌旁正常组织中DAPK1的表达显著高于OSCC组织中DAPK1的表达,且高、中、低分化OSCC组织中DAPK1的表达比较均有显著差异(P<0.05),OSCC浸润前沿组织中DAPK1的表达低于非前沿部分(P<0.05),而DAPK1的表达与OSCC浸润前沿的IFG总分无显著相关性(P>0.05)。癌旁正常组织中hTERT的表达显著低于OSCC组织中hTERT的表达(P<0.05),且高、中、低分化OSCC组织中hTERT的表达比较均有显著差异(P<0.05);OSCC浸润前沿组织中hTERT的表达高于非前沿部分(P<0.05),且与OSCC浸润前沿的IFG总分有关(P<0.05)。DAPK1、hTERT的表达均与OSCC患者的性别、年龄、淋巴结转移无显著相关性(P>0.05)。结论:口腔鳞状细胞癌组织,特别是其前沿组织中DAPK1的表达显著下调和hTERT的表达明显上调,可能通过阻碍口腔鳞状细胞癌细胞凋亡,共同促进口腔鳞状细胞癌的生长、分化和浸润。