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凋亡素原核表达载体的构建、表达与抗体制备
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作者 王健生 张明鑫 +3 位作者 段小艺 莫非 王全颖 杨广笑 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1405-1407,共3页
目的构建凋亡素基因的原核表达载体,进行表达并制备表达蛋白的多克隆抗体。方法构建凋亡素pGEM-T/Apoptin载体,并将凋亡素基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,将该质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)受体菌中,以IPTG对其进行诱导表达... 目的构建凋亡素基因的原核表达载体,进行表达并制备表达蛋白的多克隆抗体。方法构建凋亡素pGEM-T/Apoptin载体,并将凋亡素基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,将该质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)受体菌中,以IPTG对其进行诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。用表达蛋白常规免疫Balb/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中抗体的滴度。结果凋亡素基因被成功的克隆至pET-28a(+),表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子量约17000的位置出现目的蛋白条带,大小与预期结果一致,Balb/c小鼠经5次免疫后,得到了滴度为1:5×105血清抗体。结论凋亡素原核表达载体的成功构建和多克隆抗体的制备为进一步研究凋亡素的功能和凋亡素的应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 凋亡素蛋白 原核表达 抗体制备
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凋亡素原核表达载体构建及活性测定 被引量:2
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作者 张艳玲 徐霞 +1 位作者 江露含 杜晶春 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第18期2928-2932,共5页
背景:体外合成或通过基因工程表达的凋亡素Apoptin是一种可以特异性地诱导肿瘤细胞凋亡,而对人体正常细胞无毒性和转化活性的蛋白,为抑制肿瘤的生长提供可能。目的:构建凋亡素基因的原核表达载体,优化诱导蛋白表达的相关条件,检测纯化... 背景:体外合成或通过基因工程表达的凋亡素Apoptin是一种可以特异性地诱导肿瘤细胞凋亡,而对人体正常细胞无毒性和转化活性的蛋白,为抑制肿瘤的生长提供可能。目的:构建凋亡素基因的原核表达载体,优化诱导蛋白表达的相关条件,检测纯化所得目的蛋白的活性。方法:将已构建好的凋亡素基因亚克隆至原核表达载体p ET-28b(+)中,将该质粒转化至大肠杆菌E.coli宿主菌中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对其进行诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析目的蛋白,并检测所表达的目的蛋白对肿瘤细胞的增殖抑制作用。结果与结论:凋亡素基因被成功的克隆至p ET-28b(+),在26℃、IPTG 0.5 mmol/L诱导8 h的情况下,Apoptin为包涵体表达,表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约15 000的位置出现目的蛋白条带,大小与预期结果一致,经变复性和亲和层析纯化后,获得高纯度目的蛋白,进一步检测发现其对肺癌细胞H460及H1299具有一定的促凋亡作用。实验成功构建了凋亡素原核表达载体PET-28b-Apoptin,获得了具有一定生物活性的目的蛋白,为进一步研究凋亡素的功能和开发其应用价值研究奠定了基础。 展开更多
关键词 细胞 肺癌 实验动物 基因病毒载体及相关因子模型 凋亡素蛋白 原核表达 纯化 活性测定
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PTD融合蛋白的原核表达及其抗体制备
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作者 张慧瑛 张玉静 +3 位作者 胡薇 明宇 张蕾 郝军元 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第4期20-22,共3页
目的:为制备凋亡素重组蛋白抗体,首先获得凋亡素重组蛋白融合基因LTA,而且通过原核表达系统表达重组蛋白并制备其抗体,为进一步利用凋亡素重组蛋白导向治疗肿瘤的检测奠定基础。方法:应用重叠延伸的基因融合技术将LHRH(黄体生成激素释... 目的:为制备凋亡素重组蛋白抗体,首先获得凋亡素重组蛋白融合基因LTA,而且通过原核表达系统表达重组蛋白并制备其抗体,为进一步利用凋亡素重组蛋白导向治疗肿瘤的检测奠定基础。方法:应用重叠延伸的基因融合技术将LHRH(黄体生成激素释放激素)基因、TAT(HIV-1反式转录激活因子)基因和凋亡素基因重组,构建成凋亡素重组蛋白原核表达载体pET-28a-LTA,随后将表达质粒转入BL21菌株,经IPTG诱导表达重组融合蛋白,将已表达的重组蛋白通过Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化,并制备LTA凋亡素重组蛋白抗体。结果:表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,LTA蛋白融合基因获得高效表达,凝胶薄层扫描分析表明表达蛋白占菌体蛋白12.6%。LTA蛋白经Ni-NTA亲和色谱柱柱纯化,以纯化蛋白为抗原免疫獭兔制备凋亡素重组蛋白抗血清。结果表明抗体的效价为1:12800。结论:应用重叠延伸的基因融合技术获得凋亡素重组蛋白融合基因LTA,通过原核表达系统表达重组蛋白并制备其抗体。 展开更多
关键词 融合蛋白 TAT 原核表达 抗体
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外周血ctDNA及Survivin预测NSCLC预后的临床研究 被引量:8
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作者 齐艳梅 李瑞杰 汪领 《临床肺科杂志》 2022年第1期83-87,共5页
目的探讨外周血中循环肿瘤DNA(ctDNA)与凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)预测非小细胞肺癌(NSCLC)预后的临床应用价值。方法以138例NSCLC患者为研究组,以56例健康志愿者为对照组,根据受试者工作特征(ROC)曲线,判定ctDNA及Survivin mRNA的... 目的探讨外周血中循环肿瘤DNA(ctDNA)与凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)预测非小细胞肺癌(NSCLC)预后的临床应用价值。方法以138例NSCLC患者为研究组,以56例健康志愿者为对照组,根据受试者工作特征(ROC)曲线,判定ctDNA及Survivin mRNA的界限值,分析外周血ctDNA、Survivin表达对NSCLC预后的预测作用。结果研究组ctDNA与Survivin mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05)。ctDNA和Survivin mRNA的最佳截点分别为17.23 ng/mL、5.34×10^(5) copies/mL。术后是否化疗、p-TNM分期、ctDNA与Survivin mRNA表达水平均与患者生存时间有关。ctDNA≥17.23 ng/mL、Survivin mRNA≥5.34×10^(5) copies/mL患者与ctDNA<17.23 ng/mL、Survivin mRNA<5.34×10^(5) copies/mL患者生存曲线差异有显著性(P<0.05)。p-TNM分期、ctDNA与Survivin mRNA表达情况均是影响NSCLC预后的独立指标(P<0.05)。结论NSCLC患者外周血ctDNA及Survivin表达水平较高,是影响NSCLC患者预后的危险因素,可作为预后预测的分子标志物。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 循环肿瘤DNA 抑制蛋白存活 预后
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晚期非小细胞肺癌Survivin的表达与铂类耐药性及预后的研究
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作者 徐慧敏 黄文锋 +3 位作者 湛永滋 黄剑锋 王湘萍 黄昌杰 《广西医学》 CAS 2013年第11期1447-1449,共3页
目的探讨凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)在晚期非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与含铂类方案化疗疗效之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测82例应用含铂类方案化疗的晚期NSCLC患者癌组织中Survivin蛋白的表达,并结合临床病理指标... 目的探讨凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)在晚期非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与含铂类方案化疗疗效之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测82例应用含铂类方案化疗的晚期NSCLC患者癌组织中Survivin蛋白的表达,并结合临床病理指标等进行分析。结果 82例患者中Survivin阳性表达65例(79.3%);Survivin表达与性别、年龄、病理类型、临床分期、化疗有效率、中位生存期无关(P>0.05)。Survivin阳性者1年生存率为23.1%,低于Survivin阴性者的52.9%(P<0.05)。结论 Survivin表达阴性的NSCLC患者应用含铂类方案化疗可能获得生存受益。Survivin表达阳性可能存在铂类药物耐药,Survivin的表达可能成为NSCLC个体化治疗的分子预测指标。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 抑制蛋白存活 铂类耐药 预后
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胃癌患者血清p53、PDCD-5、survivin表达水平及其联合应用的价值 被引量:9
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作者 符白玉 林怡徐 +1 位作者 琪张 杰伟 《分子诊断与治疗杂志》 2021年第4期615-618,622,共5页
目的探讨胃癌患者血清p53、程序性细胞死亡分子-5(PDCD-5)、细胞凋亡抑制蛋白存活素(survivin)表达水平及其联合应用的价值。方法选择2012年9月到2015年9月在本院被确诊的108例胃癌患者,收集同期同年龄阶段健康体检者的54例血清样本作... 目的探讨胃癌患者血清p53、程序性细胞死亡分子-5(PDCD-5)、细胞凋亡抑制蛋白存活素(survivin)表达水平及其联合应用的价值。方法选择2012年9月到2015年9月在本院被确诊的108例胃癌患者,收集同期同年龄阶段健康体检者的54例血清样本作为对照组。分析胃癌患者的一般资料,包括年龄、性别、TNM分期、肿瘤大小、肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度以及有无淋巴结转移;采用ELISA检测血清样品中p53、PDCD-5和survivin表达水平;治疗后随访患者的生存时间;采用单因素生存分析Kaplan-Meier绘制生存曲线。结果与对照组相比,胃癌患者血清中PDCD-5的表达水平显著下降(P<0.05),p53和survivin的表达水平显著升高(P<0.05);胃癌组患者血清p53、PDCD-5和survivin的表达水平与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、TNM分期以及是否合并淋巴结转移有关(P<0.05);生存分析显示,胃癌患者血清中p53、survivin高表达患者3年总生存率和无病生存率显著低于p53、survivin低表达患者(P<0.05);PDCD-5、survivin高表达患者3年总生存率和无病生存率显著高于PDCD-5、survivin低表达患者(P<0.05)。结论胃癌患者血清p53、survivin低表达且PDCD-5高表达可以提高其3年总生存率和无病生存率,临床有望作为其预后标识物。 展开更多
关键词 胃癌 P53 程序性细胞死分子-5 细胞抑制蛋白存活
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Activation of transcription factors NF-kappaB and AP-1 and their relations with apoptosis-associated proteins in hepatocellular carcinoma 被引量:4
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作者 Lin-LangGuo ShaXiao YingGuo 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第25期3860-3865,共6页
AIM: To study the distribution pattern of transcription factors NF-kB and AP-1 and their relations with the expression of apoptosis associated-proteins Fas/FasL and ICH-1L/S in human hepatocellular carcinoma (HCC). ME... AIM: To study the distribution pattern of transcription factors NF-kB and AP-1 and their relations with the expression of apoptosis associated-proteins Fas/FasL and ICH-1L/S in human hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: We performed in situ hybridization and immunohistochemical techniques for NF-kB, AP-1, Fas/FasL and ICH-1 in 40 cases of human HCC along with corresponding nontumoral tissues and 7 cases of normal liver tissues. RESULTS: Twenty-two (55%) and 25 (62.5%) of 40 cases for NF-κB and AP-1 were presented for nuclear or both nuclear and cytoplastic staining respectively, while less cases were presented for only cytoplastic staining for NF-κB (18%) and AP-1 (10%) in adjacent nontumoral tissues and negative staining in normal liver tissues. There was no statistically significant difference of NF-κB or AP-1 activation between well differentiated tumors and poorly differentiated tumors (P>0.05). NF-κkB activity is positively corresponded to AP-1 activation. The expression of ICH-1L/S was associated with the activation of NF-κB and AP-1 (P<0.05), but no significant relationship was found between Fas/FasL and NF-κB or AP-l(P>0.05). CONCLUSION: Activation of both NF-κB and AP-1 may be required for ICH-1L/S-induced apoptosis in HCC, but not for Fas/FasL-mediated apoptosis. NF-κB and AP-1 may play important roles in the pathogenesis of human HCC. 展开更多
关键词 Hepatocellular carcinoma (HCC) Transcription factors APOPTOSIS Protein
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血清DKK1、Survivin水平与难治性多发性骨髓瘤患者FVAD方案化疗疗效的关系 被引量:4
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作者 赵建强 倪增峰 +1 位作者 贾文华 马李洁 《中国煤炭工业医学杂志》 2021年第5期526-529,共4页
目的探讨血清Wnt通路抑制抑制因子Dickkopf-1(DKK1)、凋亡抑制蛋白生存素(Survivin)与难治性多发性骨髓患者FVAD方案(氟达拉滨、长春新碱、表阿霉素和地塞米松)化疗疗效的关系。方法选取2017年1月—2019年1月在西安医学院第一附属医院... 目的探讨血清Wnt通路抑制抑制因子Dickkopf-1(DKK1)、凋亡抑制蛋白生存素(Survivin)与难治性多发性骨髓患者FVAD方案(氟达拉滨、长春新碱、表阿霉素和地塞米松)化疗疗效的关系。方法选取2017年1月—2019年1月在西安医学院第一附属医院治疗的难治性多发性骨髓瘤患者81例,均给予FVAD方案化疗,观察治疗效果,检测血清DKK1、Survivin水平。结果达到完全缓解(CR)患者23例,部分缓解(PR)患者31例,疾病稳定(SD)患者17例,疾病进展(PD)患者10例,治疗有效率为66.67%;治疗有效患者治疗后血清KK1、Survivin水平分别为(3.54±0.97)ng/ml和(81.46±5.57)ng/L,明显低于治疗无效患者,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前后血清DKK1、Survivin水平变化值预测患者治疗有效的ROC曲线下面积分别为0.733和0.693,差异有统计学意义(P<0.05),截断值分别为4.03ng/ml和26.54ng/L,灵敏性分别为77.80%和88.00%,特异性分别为63.00%和48.10%。结论在难治性多发性骨髓瘤患者中,FVAD方案化疗有效者治疗后DKK1、Survivin水平明显降低,治疗前后变化值在预测治疗疗效中有一定应用价值。 展开更多
关键词 Wnt通路抑制抑制因子Dickkopf-1 抑制蛋白生存 难治性多发性骨髓瘤 FVAD方案
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贲门癌中survivin表达的临床意义
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作者 刘祖宏 陈少湖 +1 位作者 谢丽霞 许文兵 《肿瘤研究与临床》 CAS 2006年第9期628-629,共2页
目的探讨凋亡抑制基因生存素蛋白(survivin)在贲门癌组织中的表达及其与各临床病理因素的关系。方法采用二步法免疫组化技术(Envision),检测66例贲门癌组织中survivin的表达情况,分析survivin与各临床病理因素间的关系。结果肿瘤组织及... 目的探讨凋亡抑制基因生存素蛋白(survivin)在贲门癌组织中的表达及其与各临床病理因素的关系。方法采用二步法免疫组化技术(Envision),检测66例贲门癌组织中survivin的表达情况,分析survivin与各临床病理因素间的关系。结果肿瘤组织及癌旁组织survivin阳性表达率分别为62.1%、24.2%,正常胃黏膜无survivin表达,三者之间阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。survivin蛋白在低分化贲门癌中的表达为73.8%,高、中分化癌的表达为41.7%,在伴有淋巴结转移者表达为73.3%,无淋巴结转移者表达为38.1%,伴有浆膜层浸润者表达为74.4%,无浆膜层浸润者表达为44.4%,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。TNM分期Ⅲ期的贲门癌survivin表达阳性率(95%)显著高于Ⅰ,Ⅱ期患者(47.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。survivin基因表达与贲门癌的年龄、性别及肿瘤大小无显著相关性。结论凋亡抑制基因survivin与贲门癌发生、发展有一定联系,检测其表达对于判断贲门癌的恶性程度及病情进展有一定的价值。 展开更多
关键词 抑制基因生存蛋白 贲门癌
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Survivin与非小细胞肺癌预后的相关性研究
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作者 刘孝民 王红岩 +2 位作者 陈建民 李志娟 董建堂 《中国综合临床》 北大核心 2006年第9期822-825,共4页
目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中细胞凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)的表达与其预后的关系。方法应用免疫组织化学技术对100例手术标本Survivin的表达状态进行检测。结果100例NSCLC石蜡标本中Survivin阳性率为63%,在不同TNM分期、淋... 目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中细胞凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)的表达与其预后的关系。方法应用免疫组织化学技术对100例手术标本Survivin的表达状态进行检测。结果100例NSCLC石蜡标本中Survivin阳性率为63%,在不同TNM分期、淋巴结转移的NSCLC组织中,Survivin阳性率的差异有显著性(P<0.05),而与组织学类型和分化程度无关。多因素COX回归显示:Survivin是NSCLC患者预后的独立预测因子。Survivin阳性患者手术后死亡的相对危险度是Survivin阴性患者的1.86倍;(似然比检验,P<0.05)。结论Survivin表达状态是NSCLC患者预后的独立预测因子,Survivin阳性表达的肺癌患者预后不良。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 细胞抑制蛋白存活
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替吉奥治疗中晚期胃癌患者的临床疗效及对血清sICAM-1、Survivin、CEA、CA199的影响 被引量:4
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作者 常英英 郭克锋 +3 位作者 王坤 刘红丽 薛艳萍 高慧芳 《中国中西医结合消化杂志》 CAS 2018年第8期691-694,共4页
[目的]探讨替吉奥治疗中晚期胃癌患者的临床疗效,检测血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、细胞凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)水平的变化,分析其作用机制和临床意义。[方法]选择我院2016年1月~201... [目的]探讨替吉奥治疗中晚期胃癌患者的临床疗效,检测血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、细胞凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)水平的变化,分析其作用机制和临床意义。[方法]选择我院2016年1月~2017年9月中晚期胃癌患者76例,随机分为对照组和研究组,各38例,对照组进行常规治疗,研究组应用替吉奥治疗。观察临床疗效及不良反应,并检测治疗前后血清sICAM-1、Survivin、CEA、CA199水平。[结果]研究组患者肿瘤控制率为97.37%(37/38),高于对照组86.84%(33/38),差异有统计学意义(P<0.05);研究组患者不良反应总发生率为42.11%(16/38),低于对照组57.89%(24/38),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后研究组患者血清Survivin、sICAM-1、CEA和CA199分别为(306.48±36.79)pg/ml、(429.56±48.90)ng/ml、(26.42±3.88)ng/ml、(51.34±8.15)U/L,均低于对照组(412.75±35.83)pg/ml、(608.44±52.65)ng/ml、(32.53±4.51)ng/ml、(60.24±8.05)U/L,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]替吉奥治疗中晚期胃癌患者的临床疗效较好,能够显著降低不良反应,血清Survivin、sVCAM-1、CEA和CA199水平显著下调。 展开更多
关键词 替吉奥 胃癌 临床疗效 可溶性细胞间黏附分子-1 细胞抑制蛋白存活 癌胚抗原 糖类抗原199
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Effect of quercetin on the expression of Bcl-2/Bax apoptotic proteins in endometrial cells of lipopolysaccharide-induced-abortion mice 被引量:9
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作者 Wang Xiaodan Yan Yongping +2 位作者 Yang Liu Li Mu Zhong Xiuhui 《Journal of Traditional Chinese Medicine》 SCIE CAS CSCD 2016年第6期737-742,共6页
OBJECTIVE: To explore the effect of quercetin on the expressions of Bcl-2/Bax apoptotic proteins in endometrial cells in mice with abortion induced by lipopolysaccharide.METHODS: For in vivo experiment, twenty five Ku... OBJECTIVE: To explore the effect of quercetin on the expressions of Bcl-2/Bax apoptotic proteins in endometrial cells in mice with abortion induced by lipopolysaccharide.METHODS: For in vivo experiment, twenty five Kunming mice were randomly divided into five groups at day 4 of pregnancy, with 5 mice per group. The mice were treated with lipopolysaccharide(LPS)through tail vein intravenous injection at day 4 of pregnancy, followed by different concentrations of quercetin by oral gavage consecutively at days 5 to6 of pregnancy. On day 7 of gestation, the mice were sacrificed and the histopathological changes of the uterus tissues were observed. Immunohistochemical staining was applied to the detection of Bcl-2/Bax apoptotic proteins in the endometrial cells. For in vitro experiment, the primary endometrial cells werecultured using a uterus tissue mass culturing method sampled at day 4.5 of pregnancy. The cells were treated with LPS with or without different dosages of quercetin, respectively, for 12 h after 80% confluence. The expression of Bcl-2/Bax apoptotic proteins were detected by western blotting.RESULTS: Both the in vivo and in vitro experiments showed decreased expression of Bcl-2 and enhanced expression of Bax after LPS treatment, leading to a decreased Bcl-2/Bax ratio. The expression of Bcl-2 significantly increased while the expression of Bax was significantly elevated, in the LPS plus quercetin group compared to the LPS only group.CONCLUSION: These results suggest that quercetin has protective effect by partially regulating the expression of Bcl-2/Bax proteins, which in turn inhibits endometrial cell apoptosis and benefits the embryo implantation. 展开更多
关键词 QUERCETIN LIPOPOLYSACCHARIDES Abortion spontaneous ENDOMETRIUM Bcl2 protein mouse Bcl-2-associated X protein
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