原位缺口末端标记法检测人胚胎脊髓发育过程中细胞凋亡的表达及意义

目的探讨人胚胎发育早期脊髓内细胞凋亡的变化规律。方法应用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测和图像分析(NIS-DR)软件测量第2、3、4三个月龄段,人胚胎脊髓组织中凋亡细胞的积分光密度(IOD)值,数据的组间比较采用单因素方差分析。结果第2、3、4三个月胎龄段,人胚胎脊髓中央管、前角和后角处均有凋亡细胞存在。2个月胎龄组脊髓组织中,TUNEL阳性细胞的IOD值为134.9954±10.5326(n=4),3个月组IOD值为149.0331±5.6619(n=5),4个月组IOD值为140.7892±7.6532(n=5),可见IOD值有先升高后降低的趋势,三组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论细胞凋亡在人胚胎脊髓的生长发育过程中起重要的调节作用。

原位末端标记法对白癜风皮肤凋亡细胞的检测

目的：探讨白癜风表皮细胞凋亡与细胞坏死组织形态特点。方法：应用原位末端标记（ＩＳＥＬ）方法。结果：细胞凋亡基本特征是ＤＮＡ断裂。结论：ＤＮＡ断裂是细胞凋亡的主要标志，此可区别于坏死细胞。

原位末端标记法检测喹乙醇诱导的鲤鱼肝细胞凋亡

方法:采用200 mg/kg饲料的喹乙醇拌料连续饲喂实验鱼,分别于染毒后的第7、14、20、25和30 d剖杀4尾鱼取肝脏用TdT介导的原位末端标记法检测其细胞凋亡。结果:在组织切片中观察到了含棕色或棕黑色颗粒的凋亡细胞。结论:喹乙醇可诱导鲤鱼肝脏细胞凋亡。且检出率随时间的延长而升高,对照组在整个实验过程中保持一个相对恒定很低的检出率。

原位末端标记法观察钉螺细胞凋亡的研究

目的使用原位末端标记法观察钉螺细胞凋亡,探讨其在钉螺研究上使用效果和前景。方法经苦楝叶浸提液处理的钉螺和对照钉螺去壳后连续冰冻切片,使用原位末端标记法(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)和苏木素-伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色观察其细胞凋亡。结果诱导组钉螺细胞凋亡发生在消化腺、足部表皮和足部肌肉纤维之间等部位,对照组凋亡则发生在消化腺和足部表皮部位,两组细胞凋亡值有显著差异(P<0.05);TUNEL法观察和HE染色观察钉螺细胞凋亡,两组凋亡值没有显著差异(P>0.05)。结论 TUNEL法可以运用于钉螺细胞凋亡原位检测。

原位末端标记方法的改进及其在检测骨髓造血细胞凋亡中 …

细胞凋亡是细胞死亡的一种形式，又称程序性细胞死亡。在实际研究工作中，特别是检测骨髓和含血细胞较多的组织过程中，由于内源性过氧化物酶含量较多，使用ＤＡＢ底物显色将会产物不可避免的背景着色，影响检测效果。因此，为了不影响检测结果（防止假阳性），探索性地将亲和素－辣根过氧化物酶改为碱性酸酶标记的抗生蛋白链菌素（ＡＰ－ＳＡ）；显色剂由ＤＡＢ改为坚固红。阳性结果为玫瑰红色，核复染后呈蓝色，反差明显。

基于氧化应激探讨疏肝补肾法对卵巢早衰大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的:探讨疏肝补肾法对卵巢早衰大鼠颗粒细胞凋亡的作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、柴胡疏肝散合左归饮低剂量组、柴胡疏肝散合左归饮中剂量组、柴胡疏肝散合左归饮高剂量组、雌激素组,每组8只。除正常组外,其余大鼠腹腔注射环磷酰胺连续15 d建立卵巢早衰大鼠模型,同时采用慢性不可预知温和应激方式建立肝郁证模型,连续21 d。造模成功后,柴胡疏肝散合左归饮低、中、高剂量组分别灌服柴胡疏肝散合左归饮混悬液3.39 g·kg^(-1)、6.77 g·kg^(-1)、13.55 g·kg^(-1),雌激素组灌胃戊酸雌二醇(补佳乐)0.105 mg·kg^(-1),正常组和模型组灌胃等体积的灭菌水,连续干预3周。采集阴道脱落细胞监测大鼠动情周期变化,行为学检测肝郁证造模情况,HE染色观察卵巢组织病理学情况,ELISA法检测血清雌二醇(E_(2))、促卵泡激素(FSH)、抗缪勒管激素(AMH)、抑制素B(INHB)含量,TUNEL法检测卵巢颗粒细胞凋亡指数,q-PCR和Western Blot法检测卵巢组织Bcl-2、Bax、活性氧(ROS)、SOD-2 mRNA和蛋白表达量。结果:与正常组相比,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢组织结构不清晰,颗粒细胞层明显变薄,旷场实验移动总距离和蔗糖水消耗率降低(P<0.05,P<0.01),血清FSH水平升高,E_(2)、AMH、INHB水平显著降低(P<0.01),颗粒细胞凋亡指数升高(P<0.01),Bcl-2、SOD-2的mRNA和蛋白表达量降低,Bax的mRNA和蛋白表达量升高,ROS的mRNA表达量升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,各给药组卵巢组织病理形态和行为学实验结果有所改善,血清FSH水平降低,E_(2)、INHB水平升高(P<0.05,P<0.01),Bax、ROS的mRNA表达水平降低,柴胡疏肝散合左归饮中、高剂量组和雌激素组颗粒细胞凋亡指数降低(P<0.01)、Bcl-2蛋白表达水平升高,柴胡疏肝散合左归饮高剂量组和雌激素组Bax蛋白表达降低、SOD-2和Bcl-2的mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。与柴胡疏肝散合左归饮低剂量组相比,中剂量组INHB水平升高,高剂量组FSH降低、E_(2)升高、SOD-2的蛋白表达升高,中、高剂量组颗粒细胞凋亡指数降低(P<0.05,P<0.01)。与柴胡疏肝散合左归饮中剂量组相比,高剂量组E_(2)水平升高、Bax的mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论:疏肝补肾法可能通过减轻氧化应激而降低颗粒细胞凋亡率,进而改善卵巢功能,且以高剂量组作用最佳。

不同制动时相兔骨骼肌萎缩与细胞凋亡的实验研究—原位缺口末端标记法(TUNEL)的观察检测

探讨制动后骨骼肌萎缩的发生机制与骨骼肌细胞凋亡的关系。按照 Sievanen法制备不同时相的制动实验组 ,2 4只实验兔随机分为 4组 ,每组 6只 ,实验侧用管形石膏固定 ,自身未固定侧做对照组。在制动后 3、7、14和 2 8d取材 ,应用末端转移酶介导的 U TP缺口末端标记法 (Td T— mediated d UTP nick end labeling,TUNEL )检测萎缩骨骼肌中有无凋亡的骨骼肌细胞 ,并与形态学的观察结果相对照。对各组的数据进行统计学处理。结果表明不同制动时相所致的萎缩骨骼肌中均可发现有程度不一的骨骼肌细胞发生凋亡 ,以 14 d组最为显著。不同时相凋亡的肌细胞在空间的分布上呈不一致性。制动所致萎缩的骨骼肌中有时可见呈假阳性 TU NEL染色 ,但与凋亡的肌细胞的表现是不同的。我们认为 (1)制动后骨骼肌萎缩有骨骼肌细胞凋亡的参与。 (2 )骨骼肌细胞凋亡的多少与制动时相密切相关 ,以制动后 14 d最为明显。 (3)凋亡的骨骼肌细胞在空间分布上随制动时相不同而不同 ,呈不一致性。 (4 )制动后骨骼肌萎缩的程度与肌细胞凋亡的程度密切相关。

原位凋亡(Apoptosis)细胞末端标记测定TUNEL法

凋亡是单个细胞受其内在基因编程的调节，通过主动的生化过程而自杀死亡的现象。我们应用非放射性原位末端标记技术，进行凋亡细胞的原位检测。这一方法具有操作简单，结果特异性强、重复性好，特别对于低水平凋亡检测更敏感。

肝细胞癌凋亡病变的原位末端标记显示

原位末端标记（ＩＳＥＬ）是显示凋亡的新技术。按Ｇａｖｒｉｅｌｉ法对４６例未接受过化疗与放疗的人肝细胞癌（ＨＣＣ）作回顾性（ＩＳＥＬ）研究，结果显示在对照系列中阴性与阳性均与理论相符，４６例ＨＣＣＩＳＥＬ（＋）可分为：①单个细胞（＋）；②点状（＋）；③小片状（＋）；④大片（＋）．Ⅰ级ＨＣＣ以单细胞（＋）较多；Ⅱ、Ⅲ级以小片状（＋）较多（Ｐ＜０．０５）．单个细胞（＋）为凋亡经典概念，而片状（＋）报道还不多。本文小片状（＋）很普遍，常位于癌巢中央，其ＨＥ形态以核浓缩为主，此结果表明，通常ＨＣＣ所见小片状＂变性坏死样改变＂可能为凋亡而非坏死。

原位末端转移酶地高辛标记法检测凋亡细胞

采用地高辛原位末端标记法（ＩｎＳｉｔｕＥｎｄＬａｂｅｌｉｎｇ，ＩＳＥＬ），建立了Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ细胞的原位检测体系。结果显示：小鼠胸腺细胞在体外培养８ｈ时，台盼兰拒染率为９４％～９５％，地塞米松刺激的胸腺细胞ＤＮＡ电泳呈典型的“梯形条带（Ｌａｄｄｅｒｐａｔｅｒｎ）”，ＩＳＥＬ标记的细胞阳性率为７４．４％，未经地塞米松刺激和未经培养直接标记的胸腺细胞阳性率分别为２８．６％和１０．２％。

应用缺口末端标记法(TUNEL)分析犬瘟热病毒(CDV)诱导的细胞凋亡

利用犬瘟热病毒 (caninedistempervirus,CDV)弱毒标准株OP CDV感染敏感细胞系非洲绿猴肾细胞 (Vero) ,应用缺口末端标记法 (TdT mediateddUTPnickendlabeling ,TUNEL)分析感染细胞的凋亡。结果在感染后 48h的Vero细胞中检出了凋亡阳性细胞 ,而对照细胞内未检测到凋亡细胞。感染后 2 4h的细胞尚未出现细胞病变 ,这一时期的细胞内也未检测到凋亡细胞。表明CDV能诱导细胞调亡 ,且凋亡细胞的检出时间与细胞病变的出现时间呈正向相关。

原位末端标记检测实验性变态反应性神经炎胸腺细胞的凋亡

目的为了探讨地塞米松对实验性变态反应性神经炎（ＥＡＮ）小鼠胸腺细胞的影响。方法应用原位末端标记法和电镜检测ＥＡＮ小鼠胸腺细胞的凋亡。结果以上两种方法均发现地塞米松处理组胸腺细胞凋亡率明显高于自然病程组和正常对照组。结论地塞米松可明显增强ＥＡＮ小鼠胸腺细胞凋亡。

肝内肝管细胞癌凋亡的原位末端标记研究

肝内胆管细胞癌(ICC)是肝内胆管上皮发生的癌,属于原发性肝癌的一种亚型,目前细胞凋亡及其调变因素在ICC发病中的作用和地位尚不清楚,ICC调亡的原位末端标记研究国内外尚未见报道.我们参照Wijsman[J Histochem Cytochem,1993;41(1):7]的原位末端标记法,检测了21例ICC的调亡状况,为进一步研究ICC的凋亡与凋变奠定了基础.

末端转移酶原位标记法检测细胞凋亡

建立一种用末端转移酶标记对凋亡的细胞进行原位检测的方法。方法：在末端转移酶催化下，将地高辛修饰的核苷酸掺入凋亡细胞中的ＤＮＡ断裂缺刻，再用显色法检测被标记的ＤＮＡ，从而检出凋亡细胞。结果：本实验建立了一种灵敏、特异、有效的凋亡检测方法。结论：末端转移酶介导的原位标记法是研究凋亡的一个非常有用的工具。

DNA末端标记法检测番荔枝内酯诱导人乳癌细胞凋亡

目的：用ＤＮＡ末端标记法（ＴＵＮＥＬ法）研究番荔枝内酯凋亡诱导作用，以及ＴＵＮＥＬ法用于凋亡检测和抗癌药所致凋亡的探讨。方法：用台盼蓝拒染法，ＴＵＮＥＬ法，ＤＮＡ凝胶电泳，电镜等技术，研究番荔枝内酯对具有多药抗药性的耐阿霉素的人乳癌ＭＣＦ７／ＡＤＲ细胞的生长抑制作用及凋亡诱导。结果：电镜下观察到细胞染色质浓缩，聚集核膜下，核碎裂等典型的凋亡细胞形态学改变。凝胶电泳可见明显的ＤＮＡ梯形条带。ＴＵＮＥＬ法检测的凋亡细胞明显多于形态学改变的凋亡细胞。结论：番荔枝内酯对人乳癌ＭＣＦ７／ＡＤＲ细胞具有明显生长抑制作用，半数抑制浓度（ＩＣ５０）为１０．５ｍｇ／Ｌ，并诱导其凋亡。ＴＵＮＥＬ法可配合其他方法用于检测抗癌药诱导的人癌细胞凋亡及抗癌药的评价。

原位末端标记技术检测咖啡酸锗对小鼠宫颈癌U14瘤的凋亡诱导作用

目的应用脱氧核苷酸转移酶介导的原位末端标记技术(TUNEL),检测咖啡酸锗对小鼠宫颈癌U14瘤的凋亡诱导作用。方法建立小鼠宫颈癌U14移植瘤动物模型,观察抑瘤率,并应用TUNEL检测各组瘤细胞凋亡阳性率。结果咖啡酸锗对小鼠有明显抑制作用,其高、中、低剂量分别为45.47%、57.86%、55.83%,差异有统计学意义(P<0.01),TUNEL显示咖啡酸锗低剂量组细胞凋亡阳性率最高,达80.00%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论咖啡酸锗对小鼠U14瘤有明显的抑制作用,可诱导U14移植瘤细胞凋亡,可能是其抑癌机制之一。