血管平滑肌细胞凋亡中c-Fos蛋白的持续性表达

血管平滑肌细胞凋亡中ｃ－Ｆｏｓ蛋白的持续性表达戴云张兵（第一军医大学组胚教研室）血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的调亡可能参与血管的发生、重塑及某些心血管疾病的病理过程。本文以低血清条件诱导体外培养ＶＳＭＣ的调亡，初步探讨了其与ｃ－Ｆｏｓ蛋白表达的关系。酶...

乳腺癌耐药细胞中c-fos抗凋亡作用的研究

背景与目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,且患者死亡率居高不下,其中乳腺癌耐药是导致临床化疗失败的主要原因。该课题组采用已建立的乳腺癌耐药细胞模型MCF-7/ADR及其敏感株MCF-7,旨在探讨c-fos在乳腺癌耐药细胞中的详细作用机制。方法:MTT检测上述细胞对多柔比星的敏感性,并通过实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)检测上述细胞中mdr-1及c-fos的mRNA表达情况;3μmol多柔比星分别处理MCF-7细胞12、24、36 h后采用RT-PCR检测细胞中c-fos mRNA的表达,以监测化疗药物处理过程中乳腺癌细胞c-fos的表达变化过程;构建相应载体得到了c-fos稳定干扰细胞株及其对照细胞株:MCF-7/ADR/si-fos-8B、MCF-7/ADR/si-fos-3D和MCF-7/ADR/siNC,采用MTT检测干扰c-fos后对5-FU及顺铂的敏感性变化;流式细胞术检测上述药物及γ射线照射处理后细胞凋亡的情况;罗丹明123检测乳腺癌耐药细胞的外排能力;RT-PCR及蛋白质印迹法(Western blot)分别检测c-fos干扰后,凋亡相关基因bax、bcl-2、puma、p53及mdr-1等的表达。结果:与敏感细胞MCF-7相比,MCF-7/ADR细胞中c-fos及mdr-1的表达显著升高,且对多柔比星的耐药倍数为敏感株的近40倍;在3μmol多柔比星处理MCF-7之后c-fos的表达逐渐升高,结果显示,c-fos在乳腺癌的耐药表型形成早期即开始发挥作用;干扰c-fos后,细胞对药物(5-FU、顺铂)的敏感性增高,且经药物处理及γ射线照射后稳定干扰细胞株的凋亡率显著升高,说明干扰c-fos后乳腺癌耐药细胞在受到外界刺激后,更易于发生凋亡;RT-PCR及Western blot检测结果显示,干扰c-fos后,bax、puma、p53的表达明显升高,而bcl-2及mdr-1的表达显著降低。结论:在乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR中发现,c-fos呈异常高表达,其可能通过调节乳腺癌细胞凋亡信号通路蛋白的变化抑制乳腺癌细胞的凋亡,促进了乳腺癌耐药表型的形成。由此,c-fos可作为克服乳腺癌耐药治疗的一个潜在靶点用于今后的药物开发。

电针对缺血性中风兴奋性氨基酸、C-fos及细胞凋亡影响

为了探讨针灸治疗缺血性中风的早期作用机制 ,本文观察了电针对缺血性中风兴奋性氨基酸、C-fos及胞凋亡影响 ,结果表明 :( 1 )电针能明显降低脑缺血后异常升高的脑组织 Glu、Asp含量 ,从而降低兴奋性氨基酸 ( EAAs)神经毒性 ,在一定程度上减轻了细胞凋亡的诱因。 ( 2 )电针对脑局部缺血后 c-fos蛋白的表达有明显抑制作用 ,其机理可能与电针降低了兴奋性氨酸的神经毒性 ,在一定程度上减轻了细胞凋亡的诱因有关。电针可能通过了抑制 c-fos蛋白的表达进而调控其后发的凋亡相关基因 。

川芎嗪对再灌注大鼠心肌细胞c-fos基因表达及凋亡的影响

目的 :观察川芎嗪 (TMP)对心肌缺血再灌注 (MIR)大鼠心肌 c- fos基因表达及凋亡细胞的作用。方法 :应用免疫组化法检测 MIR不同时期心肌 FOS蛋白的表达 ,并采用末端标记技术对心肌细胞凋亡数进行检测。结果 :1对照组心肌无 FOS蛋白表达 ,亦未见凋亡细胞出现。 2与 MIR组相比 ,TMP干预组心肌 FOS蛋白的表达明显减弱 (6 0 min分别为 5 7± 44个 /片和 6 .4± 3.2个 /片 ,90 m in分别为 46 7± 45 0个 /片和 171± 16 0个 /片 ,12 0 min分别为 2 46± 16 0个 /片和 130± 12 1个 /片 ,均 P<0 .0 5 ) ,TUNEL阳性细胞数均明显减少 (6 0 m in分别为 36 .3± 8.7个 /片和 2 4.7± 7.2个 /片 ,P<0 .0 5 ;12 0 m in分别为 48.0± 2 3.8个 /片和 10 .0± 8.1个 /片 ,P<0 .0 1)。结论 :MIR可诱导终末分化的心肌细胞高表达 FOS蛋白及发生细胞凋亡 ;应用 TMP可使缺血心肌细胞 c-

甲基汞对脑神经胶质细胞凋亡及c-fos表达的影响

为探讨氯化甲基汞 (MMC)所致脑发育损伤及其与c fos表达的关系 ,采用光镜、电镜等形态学方法 ,观察了MMC对体外培养的大鼠脑神经胶质细胞的损害作用 ,并应用免疫细胞化学方法 (SP法 )观察MMC对培养神经胶质细胞c fos表达的影响。结果表明 ,体外培养的胶质细胞接触MMC后 ,出现胞浆浓缩、轴突回缩、染色质边聚、固缩等现象 ,呈凋亡的典型形态。MMC 0 0 2mmol L作用于神经胶质细胞 10min后 ,c Fos蛋白阳性细胞百分率随其后的培养时间而变化 :c Fos蛋白阳性细胞率 0 5h开始增高 ,2h达高峰 ,4～ 6h又逐渐减少。MMC 0 0 0 12 5、0 0 0 5、0 0 2、0 0 8和 0 32mmol L作用 10min后 ,0 32mmol L组的阳性率显著高于除0 0 8mmol L组外的其他各组 (P <0 0 1)。提示MMC可诱导体外培养大鼠脑神经胶质细胞c fos表达 ,并诱发其凋亡。MMC诱发神经细胞凋亡可能与c fos介导有关。

葛根素对脑缺血-再灌注时海马CA1区细胞凋亡和c-fos蛋白表达的影响

目的 :从细胞凋亡角度研究葛根素治疗脑复苏的机制。方法 :对实验大鼠于缺血再灌注前应用葛根素注射液 10 0 mg/ kg腹腔内注射 ,然后采用原位末端标记法、免疫组织化学法检测脑缺血再灌注不同时间内海马 CA1区神经细胞凋亡数及 c fos蛋白表达的变化。结果 :葛根素能减少细胞凋亡 ,下调 c fos蛋白的表达。结论 :葛根素具有神经保护作用。

胶质瘤细胞c-fos基因表达水平对其增殖和凋亡的影响

目的原癌基因c-fos属快反应即刻早期应答基因,其编码蛋白是真核细胞内重要的转录因子,可诱导下游报道基因mRNA的转录和蛋白表达,参与细胞增殖和凋亡的调控,当其表达异常增加时可干扰细胞增殖和凋亡的动态平衡,诱导细胞转化和肿瘤形成。通过检测胶质瘤c-fos基因的表达水平观察c-fos基因与肿瘤恶性程度的关系以及对胶质瘤细胞增殖活性和凋亡程度的影响。方法用原位杂交、原位细胞凋亡检测和免疫组织化学染色方法观察73例不同级别人胶质瘤组织标本。结果73例胶质瘤均不同程度地表达c-fos mRNA和c-Fos蛋白(100%),这两种阳性肿瘤细胞密度均随肿瘤恶性程度的升高而相应增加,Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ级组及Ⅳ级组间比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。73例胶质瘤标本的增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞和凋亡肿瘤细胞的检出率均为100%,增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞密度随肿瘤恶性程度的升高而相应增加,Ⅰ～Ⅱ级组低于Ⅲ级组,Ⅲ级组低于Ⅳ级组,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);凋亡肿瘤细胞密度随肿瘤恶性程度的升高而相应减低,Ⅰ～Ⅱ级组高于Ⅲ级组,Ⅲ级组高于Ⅳ级组,3组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。直线相关分析证实,c-fos mRNA阳性肿瘤细胞密度、c-Fos蛋白阳性肿瘤细胞密度及增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞密度彼此间均呈显著性正相关(r=0.648～0.917,P<0.001),这3种阳性肿瘤细胞的密度均与凋亡肿瘤细胞密度呈显著性负相关(r=%0.727～%0.775,P<0.001)。结论c-fos基因表达水平对评价胶质瘤生物学行为有重要参考价值。胶质瘤细胞c-fos基因表达异常增加可能是促进肿瘤细胞增殖和抑制其凋亡的重要因素,并在胶质瘤发生及恶性进展过程中起重要作用。

大鼠宫内缺血缺氧后c-fos的表达与神经细胞凋亡的关系

目的：探讨大鼠围产期缺血缺氧脑损伤发病机制。方法：结扎Ｗｉｓｔａｒ孕鼠子宫血管，建立胎鼠缺血缺氧脑损伤模型。用原位杂交及原位末端标记法检测剖宫产后存活不同时间鼠大脑ｃｆｏｓｍＲＮＡ的表达及神经元凋亡的情况。结果：缺血后即刻大脑皮层和海马出现ｃｆｏｓｍＲＮＡ的表达，缺血后１～２ｈ和２４ｈｃｆｏｓｍＲＮＡ出现两次高表达；而对照组仅在生后１ｈ海马有较少量的表达。缺血后２ｄ神经细胞凋亡数明显多于对照组。结论：缺血缺氧引起了ｃｆｏｓｍＲＮＡ的表达增强，ｃｆｏｓ的改变可能导致其后续与细胞凋亡相关基因的转录，从而使细胞发生凋亡。

黄芪对大鼠脑缺血再灌注损伤c-fos和Bcl-2表达及细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡和凋亡基因c-fos、Bcl-2表达的影响。方法 40只Wistar大鼠,体质量180～220 g,随机分为黄芪组、缺血4 h再灌注1 h组(Ⅰ组)、缺血4 h再灌注12 h组(Ⅱ组)、缺血4 h再灌注24 h组(Ⅲ组)和对照组。线栓法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型。切片分别行HE染色,应用免疫组织化学染色检测神经细胞凋亡基因c-fos、Bcl-2蛋白表达。结果对照组、Ⅰ组脑细胞未见明显变化,Ⅱ组轻度脑细胞水肿,Ⅲ组脑细胞明显水肿,黄芪组损伤区范围变小,肿胀减轻。与对照组比较,其余各组脑细胞c-fos和Bcl-2阳性表达率增高(P<0.01);黄芪组c-fos和Bcl-2阳性表达率较Ⅱ、Ⅲ组降低(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和黄芪组细胞凋亡指数较对照组明显增加(P<0.01);黄芪组较Ⅱ、Ⅲ组明显降低(P<0.01)。结论黄芪在脑缺血再灌注损伤后可抑制c-fos表达、增加Bcl-2表达,减轻脑细胞凋亡。

硒对大鼠肝细胞凋亡和原癌基因c-myc、c-fos和c-jun表达的影响

目的 研究亚硒酸钠对大鼠肝细胞凋亡和原癌基因c myc、c fos和c jun表达的影响。方法 选用大鼠 ,每组 5只 ,用 5、10和 2 0 μmol/kg亚硒酸钠腹腔注射染毒。用末端标记法 (TUNEL)、流式细胞术检测细胞凋亡 ,用Northern斑点杂交方法研究原癌基因c myc、c fos和c jun的表达。结果 5、10和 2 0 μmol/kg的亚硒酸钠染毒大鼠 ,不仅能诱导大鼠肝细胞凋亡 ,细胞凋亡率均较对照组 ( 2 2 2± 0 43 ) %显著增高 ,分别为 ( 3 72± 1 76) % (P <0 0 5 )、( 5 82± 1 42 ) % (P <0 0 1)和 ( 11 76± 1 87) % (P <0 0 1) ,而且还存在着明显的剂量 反应关系。 5、10和 2 0 μmol/kg的亚硒酸钠也能引起大鼠肝细胞c myc、c fos和c junmRNA明显增多 ,免疫组化分析可以检测到表达产物c Myc ,c Fos和c Jun蛋白 ,说明这 3种原癌基因表达增强。结论 一定剂量的亚硒酸钠可以诱导大鼠肝细胞凋亡和原癌基因c myc、c fos和c

脊髓损伤对下丘脑c-Fos表达及神经细胞凋亡的影响

目的探讨脊髓损伤后下丘脑神经细胞凋亡情况,确认脊髓损伤导致大脑损害的特点及其在相关并发症发生发展中的可能机制。方法18只SD大鼠随机分为两组:假模组(Sham组)和脊髓损伤组(SCI组),以改良的Allen’s撞击法制作脊髓损伤动物模型,常规饲养,分别于8周取大鼠下丘脑组织,应用免疫荧光染色法观察脊髓损伤大鼠下丘脑组织c-Fos表达,TUNEL法观察两组下丘脑神经细胞凋亡情况,应用ELISA法检测两组大鼠下丘脑炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达。结果脊髓损伤后8周,SCI组较Sham组下丘脑c-Fos表达明显增加(P<0.05),同时下丘脑可见明显凋亡细胞,主要表现为胞浆减少,细胞核深染、固缩在一边;SCI组TUNEL阳性细胞数比Sham组明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);SCI组大鼠下丘脑包括TNF-α、IL-1β、IL-6等多种炎症因子水平较Sham组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论脊髓损伤可对下丘脑造成损害,表现为下丘脑神经细胞凋亡及炎症反应明显增加,其可能与c-Fos表达有关,脊髓损伤后对下丘脑的损害可能是某些并发症发生发展的发病机制。

丙泊酚对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤c-fos、c-jun蛋白及细胞凋亡的影响

目的通过研究丙泊酚对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤时c-fos、c-jun蛋白的影响,进一步探讨丙泊酚对肝脏缺血-再灌注损伤的保护机制。方法36只健康SD大鼠(雌雄不限)随机分为三组,每组12只。肝脏缺血-再灌注组(A组):肝缺血前30min经微量泵持续输注生理盐水10ml.kg-1.h-1至再灌注后1h;肝脏缺血-再灌注加丙泊酚组(B组):肝缺血前经微量泵持续输注丙泊酚30ml.kg-1.h-1至再灌注后1h;假手术组(C组):未予缺血处理,经微量泵持续输注生理盐水10ml.kg-1.h-1共1.5h。各组大鼠取肝脏右叶标本,免疫组化染色,显微镜下观察c-fos、c-jun蛋白的表达并进行图像分析,电镜下观察细胞凋亡情况。结果免疫组化结果显示c-fos、c-jun蛋白在B组的表达较A组明显减少(P<0.05)。图像分析结果表明积分光密度(IOD)值三组差异有统计学意义(P<0.05)。电镜结果显示B组细胞凋亡不显著,明显少于A组。结论丙泊酚对肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用与c-fos、c-jun蛋白密切相关,可明显减少两者的表达,并且显著减轻肝脏缺血-再灌注损伤所引起的细胞凋亡。

c-fos反义寡聚核苷酸对癫癎发作后细胞凋亡的影响

目的探讨c-fos基因在戊四氮(PTZ)致大鼠模型中表达及其与细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学法检测致模型大鼠海马神经细胞Fos表达;TUNEL及流式细胞仪检测细胞凋亡;c-fos反义寡聚核苷酸侧脑室注射干预,观察其在抗凋亡中作用。结果PTZ致后大鼠可引起Fos在脑内一过性高表达,1 h达高峰(P<0.001),而神经细胞凋亡在24 h达峰值(P<0.001);c-fos反义寡聚核苷酸部分抑制Fos表达,并显著减少神经细胞凋亡。结论癫发作后Fos早期表达可能与后期神经细胞凋亡有关;c-fos反义寡聚核苷酸能抑制脑内Fos表达,对癫造成脑损伤起一定保护作用。

创伤性脑损伤后肠黏膜细胞凋亡和c-fos基因表达

目的:研究创伤性脑损伤(TB I)后小肠黏膜细胞凋亡及c-fos基因表达,探讨肠黏膜上皮细胞凋亡在破坏肠黏膜屏障中的作用及c-fos基因表达与凋亡的关系。方法:雄性W istar大鼠,随机分为假手术(对照)组和脑创伤后3 h、12 h、24 h、72 h和7 d组,采用自由落体撞击致重型颅脑损伤。在各时相点取空肠近端,应用TUNEL法观测小肠黏膜细胞凋亡,应用免疫组化法观察c-fos基因的表达。结果:①凋亡细胞以肠黏膜上皮细胞为主;②脑损伤后3 h肠黏膜上皮即出现明显凋亡,凋亡细胞的数量以伤后72 h最多,分布于绒毛顶端,后延伸至绒毛中下部;③脑损伤后肠黏膜上皮细胞的c-fos基因表达逐渐增强,主要出现在上皮细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞,伤后24 h、72h和7d的表达明显升高。结论:创伤性脑损伤可引起大鼠小肠黏膜细胞明显凋亡和c-fos基因的显著表达。

脑出血家兔模型血肿周围脑组织细胞凋亡与c-fos表达水平的关系

目的探讨血肿周围脑组织细胞凋亡与c-fos mRNA及c-fos蛋白表达的关系及脑出血后继发性损伤的机制。方法健康家兔42只,随机分为正常组6只,出血模型组36只,采用多种方法检测血肿周围组织中的凋亡细胞、c-fos mRNA、c-fos蛋白的表达。结果与对照组相比,实验组出血后0.5 h内可见凋亡细胞,逐渐增多,48 h到高峰;c-fos mRNA在脑出血后0.5 h达到高峰,依次递减,24 h后就基本消失;c-fos蛋白表达则延后,在脑出血后半小时表达比较明显,2 h达高峰,6 h仍然较明显,随后递减。结论脑出血后血肿周围的脑组织中细胞凋亡与c-fos相关,即早基因之一的c-fos可能对其具有调节作用。

西酞普兰对应激大鼠额叶皮质神经细胞PCNA、C-fos表达及凋亡的影响

目的:研究西酞普兰对慢性应激大鼠额叶皮质神经细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、原癌基因蛋白(C-fos)表达及凋亡的影响。方法:将24只健康雄性SD大鼠随机分为3组(n=8):对照组(不做任何处理)、应激组(应激+生理盐水灌胃)、实验组(应激+西酞普兰灌胃),采用强迫游泳建立慢性应激模型,用免疫组化法检测PCNA、C-fos蛋白表达水平;TUNEL法检测细胞凋亡情况;尼康图像分析软件测量各指标阳性细胞数量。结果:应激组与对照组比较,可见少量PCNA表达阳性细胞、大量C-fos表达阳性细胞,阳性细胞的体积明显缩小。实验组与应激组比较,可见PCNA表达阳性细胞增多、C-fos表达阳性细胞明显减少,TUNEL阳性细胞数量减少,核浓缩现象较应激组明显减轻,染色也明显变淡,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性应激可影响大鼠额叶皮质神经细胞PCNA、C-fos蛋白表达水平,促进细胞凋亡,西酞普兰可调控额叶皮质神经细胞PCNA、C-fos蛋白表达水平,拮抗细胞凋亡,这可能是西酞普兰预防和治疗慢性应激引起的精神心理疾病的机制之一。

应激致高血压大鼠神经核团c-fos蛋白表达及细胞凋亡的研究

为探讨应激性高血压大鼠发病中血管紧张素II(AII)的作用,通过足底电击结合噪声刺激制备了应激性高血压大鼠,对急性应激大鼠不同时间血浆中的AII含量进行了测定.结果表明:应激刺激导致的高血压与血浆AII浓度增加有关,并与c-fos蛋白表达和细胞凋亡有关.中枢缰核、下丘脑外侧核、杏仁中央核、岛叶神经元等参与了此过程.

通心络对犬血管成形术后细胞凋亡及C-MYC和C-FOS基因表达的影响

目的观察通心络对犬血管成形术后细胞凋亡及C-MYC和C-FOS基因表达的影响。方法24只犬建立股动脉血管成形术后血管内膜损伤模型,随机分成单纯手术对照组、通心络治疗组,每组12只,再按取材时间不同(14d和30d),随机分成2个亚组,每组6只,取损伤后血管进行光镜观察、原位细胞凋亡标记实验(TUNEL)以及C-MYC、C-FOSmRNA原位杂交实验。结果光镜下显示血管内膜增生,治疗组管腔狭窄程度明显小于对照组;TUNEL显示,治疗组凋亡细胞阳性表达强于对照组(P<0.05),以14d最为显著;C-MYC、C-FOSmRNA原位杂交实验亦显示,对照组的细胞阳性表达强于治疗组(P<0.05),以14d最为显著。结论C-MYC、C-FOS基因参与了对血管内膜细胞的调节;通心络具有促进内膜细胞凋亡及下调C-MYC、C-FOS基因表达的作用,可减轻再狭窄程度。

大鼠肝缺血/再灌注损伤时c-fos、Bcl-2在肝组织的表达及与肝细胞凋亡的关系

目的:观察大鼠肝缺血/再灌注损伤时c-fos、Bcl-2在肝组织中的表达及与肝细胞凋亡的关系,并探讨可能的机制。方法:选健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为对照组、缺血30min组(I组)、缺血30min即刻再灌注组(I/R组)、缺血30min再灌注1h组(I/R1h组)、缺血30min再灌注2h组(I/R2h组)、缺血30min再灌注后4h组(I/R4h组),每组8只。应用免疫组化法分别测定各组大鼠肝组织c-fos、Bcl-2的表达,应用原位细胞凋亡法测定肝细胞凋亡的情况,同时观察肝脏组织病理变化。结果:肝脏I/R可出现肝细胞明显损伤、肝细胞水肿、炎性细胞浸润,甚至有细胞坏死。与对照组比较,cfos在I组表达就有增高(P<0.01),I/R4h组达到高峰。I/R组与I组、I/R4h组与I/R2h组相比差异有统计学意义(P<0.01)。肝组织Bcl2在I组表达增高(P<0.01),I/R2～4h达到高峰。I/R4h组与I/R2h组相比差异无统计学意义(P>0.01)。细胞凋亡指数:I组、I/R组与对照组比较明显增加(P<0.01),随着时间的延长细胞凋亡指数逐渐增加。c-fos与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.889,P<0.01),Bcl-2与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.901,P<0.01)。结论:肝缺血/再灌注损伤可引起肝组织的损伤及肝细胞凋亡。肝细胞凋亡与cfos的表达有关。Bcl2在缺血期发挥了其抑凋亡作用,随着再灌注时间的延长。