凋亡蛋白酶活化因子-1和星形细胞上调基因-1在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和星形细胞上调基因-1(AEG-1)在胃癌中的表达及临床意义。方法选取2015年9月至2017年12月于新余市人民医院行胃癌切除术及病理证实的50例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法测定胃癌及癌旁组织中Apaf-1、AEG-1表达水平,分析Apaf-1、AEG-1表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系及Apaf-1与AEG-1表达水平的相关性。结果癌旁组织中Apaf-1阳性表达率(78.00%)高于胃癌组织(20.00%),胃癌组织中AEG-1阳性表达率(82.00%)明显高于癌旁组织(26.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中Apaf-1、AEG-1表达水平均与肿瘤分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无关;经Spearman相关性分析结果显示,胃癌组织中Apaf-1表达水平与AEG-1表达水平呈显著负相关(r<0,P<0.05)。结论胃癌组织中AEG-1呈高表达,Apaf-1呈低表达,二者与胃癌的疾病进展密切相关,Apaf-1和AEG-1的肿瘤基因检测可能成为治疗胃癌的新靶点,具有较高的研究价值。

凋亡蛋白酶活化因子-1基因在贲门腺癌中的甲基化状态及其临床意义

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptosis protease activatingfactor-1,Apaf-1)基因启动子区甲基化状态及其与果蝇zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白表达之间的相关性。方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1基因甲基化状态,应用免疫组织化学法检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1和EZH2蛋白的表达情况。结果:GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于癌旁组织[49.6%(62/125)vs 4.0%(5/125),P<0.01],Ⅲ期和Ⅳ期GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期(58.8%vs 38.6%,P<0.05),但GCA组织中Apaf-1基因甲基化率与GCA的组织学分化程度无关(P>0.05)。GCA组织中Apaf-1蛋白表达阳性率显著低于相应癌旁组织(39.2%vs 96.0%,P<0.01),且与Apaf-1基因甲基化状态相关。GCA组织中EZH2蛋白表达阳性率显著高于相应癌旁组织(74.4%vs 11.2%,P<0.01),且与Apaf-1蛋白的表达呈负相关。结论:GCA组织中Apaf-1基因启动子区呈高甲基化,Apaf-1和EZH2蛋白可能共同参与了GCA的发展。

凋亡蛋白酶活化因子1基因在脂肪细胞诱导分化中表达及肿瘤坏死因子-α对其调节作用

目的观察3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中（0～10d）凋亡蛋白酶活化因子1（APAF1）基因表达水平的变化趋势，探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对成熟脂肪细胞中APAF1基因表达水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1脂肪前体细胞，通过油红O染色鉴定其分化成熟的基础上，应用人重组TNF-α．1．0ng·mL^-1干预分化成熟的脂肪细胞，抽提脂肪细胞总RNA和总蛋白后，采用RT-PCR及Westernblot技术检测诱导分化不同时段及TNF-α干预后不同时间（2、6、12和24h）脂肪细胞中APAF1基因的表达水平。结果①3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化过程中（0～10d），APAF1基因表达水平呈现逐渐减低的趋势；②人重组TNF-α对成熟脂肪细胞中APAF1基因的表达具有显著的增强作用，且TNF-α对APAF1基因表达的上调作用呈现随刺激时间延长而明显增强的总体趋势。结论①在3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中，APAF1基因的表达逐渐下调可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚；②APAF1基因在人重组TNF-α刺激成熟脂肪细胞过程中呈明显上调趋势，这种上调可能具有协同TNF-α促进成熟脂肪细胞去分化的作用。

活血清下中药对大鼠缺血-再灌注小肠凋亡蛋白酶活化因子-1表达的影响

目的:利用小肠缺血-再灌注动物模型,观察中药对小肠黏膜细胞凋亡的干预作用及对肠屏障的影响。方法:选用健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组、模型组、承气合剂治疗组、复方丹参合剂治疗组、活血承气合剂(承气合剂+复方丹参合剂)治疗组。对动物模型再灌注6h、24h、72h时血浆内毒素、小肠黏膜上皮细胞凋亡情况、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)的表达分别进行检测和观察。结果:与模型组比较,各治疗组对于肠黏膜上皮细胞凋亡均有不同程度的抑制作用,其中活血承气治疗组各观察指标降低明显(P<0.01),效果最佳。结论:小肠缺血-再灌注早期肠黏膜上皮细胞凋亡是造成血中内毒素明显升高、肠屏障功能损伤的主要原因之一。活血清下法可以通过抑制Apaf-1表达来减弱肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而达到降低内毒素水平,保护肠屏障功能的作用。

染锰大鼠生精细胞凋亡中caspase-3 mRNA、凋亡蛋白酶活化因子-1及多聚ADP核糖聚合酶的表达变化

目的:研究染锰诱导的大鼠生精细胞凋亡过程中,天冬氨酸特异性半胱氨酸酶-3(caspase-3)mRNA和凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达及其关系,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠,设立空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学法检测生精细胞caspase-3 mRNA、Apaf-1和PARP的表达。结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)和caspase-3mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI和caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与Apaf-1和PARP阳性细胞率呈负相关。结论:锰可影响大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进Apaf-1和PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应。

凋亡蛋白酶活化因子-1与肿瘤相关性的研究进展

凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)作为细胞凋亡的核心因子,在线粒体凋亡途径中起着极其关键的作用.Apaf-1启动子甲基化和杂合性缺失是肿瘤发生的最主要因素,Apaf-1表达下调与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关,其表达情况可作为肿瘤浸润深度、淋巴结转移及肿瘤分化不良等预后不佳的标志物,Apaf-1也可作为抗癌治疗和判断预后的靶分子.对其深入研究将有助于对抗肿瘤药物的研制.本文就Apaf-1的生化结构和功能、信号转导通路以及近年来关于Apaf-1在多种肿瘤中的表达、肿瘤的发生机制及其在肿瘤的耐药与治疗中的作用等方面的最新研究进展作一综述.

表达谱基因芯片技术研究膦甲酸钠上调细胞凋亡蛋白酶激活因子-1基因的表达

目的:了解膦甲酸钠(PFA)与细胞凋亡蛋白酶激活因子-1(APAF-1)基因启动子的关系,为PFA的作用机制提供理论依据。方法:应用基因表达谱芯片技术对于膦甲酸钠刺激Jurkat细胞之后的基因表达谱进行研究。聚合酶链反应(PCR)扩增APAF-1基因启动子,命名为APAF-P。以T-A克隆法,将APAF-P基因片段连入栽体pGEM-T。将获得的质粒pT-APAF-P,与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnⅠ和NheⅠ双酶切后构建APAF-1启动子报告基因表达载体pCAT3-APAF-P,以重组表达质粒pCAT3-APAF-P瞬时转染Jurkat细胞,以转染pCAT3 basic的Jurkat细胞为阴性对照,PFA刺激后24小时收获细胞。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果:表达谱基因芯片研究结果表明,PFA可上调APAF-1基因表达水平达2.815倍。构建的报告载体pCAT3-APAF-P经过序列分析和酶切鉴定正确。pCAT3-APAF-P和PFA瞬时转染的Jurkat细胞的CAT表达活性是CAT3空载体的4.9倍,pCAT3-Weep的2.9倍。结论:PFA可以上调APAF-1启动子的活性,进而上调APAE-1基因的表达。为深入了解PFA的免疫调节作用及其在病毒的清除过程中的作用机制提供新的理论依据。

口腔鳞状细胞癌中凋亡蛋白酶活化因子甲基化的研究

目的:探讨凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)基因的启动子区甲基化状态与口腔鳞状细胞癌(OSCC)的关系。方法:采用甲基特异性PCR的方法分别检测23例正常口腔黏膜组织和53例OSCC组织中APAF1基因的启动子区甲基化情况。结果:23例正常口腔黏膜组织中无1例检测到APAF1基因启动子区的甲基化,53例OSCC组织中有41例(77.36%)APAF1基因启动子区完全甲基化,5例(9.43%)APAF1基因部分甲基化,总甲基化率为86.79%(46/53),与正常口腔黏膜组织甲基化率比较差异有显著性(P<0.01)。APAF1基因的甲基化与病理分级、年龄、性别无关。结论:APAF1基因启动子区的甲基化是该基因在OSCC组织中表达降低的机制之一,基因甲基化引起的基因功能静默可能与OSCC的发生有关。

半定量PCR检测口腔鳞状细胞癌凋亡蛋白酶活化因子的表达

目的:探讨凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)基因的表达与口腔鳞状细胞癌(OSCC)的关系。方法:用半定量RT-PCR的方法检测18例正常口腔黏膜组织和32例OSCC组织中APAF1的表达情况。结果:OSCC组织中APAF1的表达显著低于正常口腔黏膜(P<0.01)。结论:APAF1基因可能与OSCC的发生、发展有关,可作为OSCC诊断的检测指标。

miR-23a和APAF-1在子宫内膜癌中的表达及意义

目的观察子宫内膜癌组织中微小RNA-23a(miR-23a)与凋亡蛋白酶活化因子-1(APAF-1)的表达变化并分析其临床意义。方法选取2018年5月至2020年5月于我院进行子宫内膜癌切除手术的123例标本为子宫内膜癌组,另选取其癌旁组织为正常组。检测子宫内膜组织中miR-23a与APAF-1的表达情况;分析miR-23a和APAF-1与患者临床病理的关系及二者的相关性,Kaplan-Meier法分析两指标对患者的生存情况的影响。结果与正常组相比,子宫内膜癌组miR-23a的表达升高,APAF-1 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05);miR-23a、APAF-1均与临床分期、组织分化程度及肌层浸润显著相关(P<0.05);miR-23a与APAF-1呈显著负相关(P<0.05);Kaplan-Meier曲线显示miR-23a低表达组与APAF-1阳性表达组中的PFS、OS显著高于miR-23a高表达组和APAF-1阴性表达组(P<0.05)。结论子宫内膜癌中miR-23a表达升高,APAF-1降低,二者与子宫内膜癌的发展及患者预后相关,有望成为临床上评估早期患者疾病进展及预后的生物标记物。

NF-κB Apaf-1蛋白在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨核转录因子-κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)和凋亡蛋白酶活化因1(Apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)在胃癌组织中的表达及意义,为胃癌的临床治疗开辟新思路。方法:收集50例胃癌患者的胃癌组织及其癌旁正常组织,采用免疫组化SP法检测NF-κB和Apaf-1蛋白的表达情况,分析二者与临床病理特征的关系和二者间相关性。结果:NF-κB蛋白在胃癌组织中的表达高于癌旁正常组织,而Apaf-1蛋白的表达低于癌旁组织,二者蛋白表达变化与分化程度、TNM分期、浸润深度及淋巴转移均有关(P<0.05)。相关性分析显示胃癌组织中NF-κB蛋白和Apaf-1蛋白表达为负相关(rs=-0.36,P<0.05)。结论:胃癌组织中NF-κB蛋白和Apaf-1蛋白表达异常,参与了胃癌的发生、发展,有望为胃癌的诊断及治疗提供参考。

人脑胶质瘤中Apaf-1基因启动子区甲基化的研究

目的探讨凋亡蛋白酶活化因子1(Apaf-1)基因启动子区甲基化在脑胶质瘤中的表达及发生中的作用。方法应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR分析方法分析37例脑胶质瘤及9例瘤旁非肿瘤脑组织中Apaf-1基因表达及启动子区甲基化情况。结果37例胶质瘤中23例Apaf-1mRNA表达下调,而瘤旁脑组织未发现Apaf-1mRNA表达明显下调或者上调;在Apaf-1基因表达明显下调的23例胶质瘤中15例出现甲基化,表达水平无明显下调的14例胶质瘤中仅4例出现甲基化,而瘤旁非肿瘤的9例脑组织中未检测到Apaf-1基因启动子甲基化。结论Apaf-1基因与脑胶质瘤的发生、发展相关,启动子区甲基化是该基因失活的重要机制。

凋亡蛋白酶活化因子-1基因甲基化在骨肉瘤细胞株中的作用

目的检测骨肉瘤细胞株中凋亡蛋白酶活化因子（APAF）-1基因启动子区域甲基化状态及该基因mRNA表达，观察APAF-1基因对骨肉瘤形成的影响。方法以骨肉瘤细胞株MG63和Hs888T为研究对象，提取DNA，经重亚硫酸钠处理后，采用限制性酶切图谱分析（COBRA）检测APAF-1基因CpG岛的甲基化情况，使用不同浓度（0、1×10^-7、3×10^-7moL／L）的DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂2′-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）处理骨肉瘤细胞株4、10、20d，采用实时定量聚合酶链反应（QT-PCR）检测Apaf-1 mRNA表达水平的变化。结果在Hs888T细胞株中APAF-1基因存在CpG岛甲基化并且随着5-Aza—CdR浓度的增加Apaf-1 mRNA表达水平也在增加。3×10^-7moL／L的5-Aza—CdR处理Hs888T细胞株20d与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Hs888T细胞株中APAF-1基因异常表达与APAF-1基因启动子区域CpG岛甲基化有关，提示APAF-1基因甲基化可能参与某些骨肉瘤的发生。

X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

Apaf-1、Mfn2、Caspase-10在慢性阻塞性肺疾病小鼠模型肺组织中的表达

目的观察小鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)动物模型肺组织中的凋亡蛋白:凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、半胱氨酸蛋白酶-10(Caspase-10)的表达,探讨COPD细胞凋亡的机制。方法健康SPF级、6周龄C57BL/6J雄性小鼠30只,适应性饲养2周后,按照随机数字表法分为两组:COPD组采用自制香烟烟雾暴露箱行香烟(含尼古丁0.9 mg,焦油12 mg)烟雾暴露;健康对照组放入另一相同的烟雾发生器中,不燃烧香烟,自由呼吸新鲜空气,自由饮食饮水。两组小鼠均于第91天处死。取肺组织行常规石蜡包埋,运用HE染色、电镜对肺组织形态学进行观察;用免疫组化检测两组小鼠肺组织Apaf-1、Mfn2、Caspase-10蛋白表达水平;用原位检测法测定两组小鼠肺组织内细胞凋亡率。结果 COPD组小鼠形态学结果符合COPD临床病理形态学改变,肺功能提示存在气流受限;COPD组凋亡蛋白Apaf-1、Mfn2、Caspase-10均较健康对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05);COPD组肺组织内皮细胞凋亡率较健康对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论凋亡蛋白Apaf-1、Mfn2、Caspase-10可能通过多种凋亡途径共同促进了COPD细胞凋亡的发生。

循经针刺联合非手术脊柱减压对腰椎间盘突出症腰椎功能及血清TFAR19、Apaf-1的影响

目的探讨循经针刺联合非手术脊柱减压对腰椎间盘突出症腰椎功能及血清TF-1细胞凋亡相关基因19(TFAR19)、凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)的影响。方法选取2018年6月—2020年7月该院收治的94例腰椎间盘突出症患者,随机分为对照组与观察组,各47例。对照组给予非手术脊柱减压治疗,观察组在对照组基础上另给予循经针刺治疗。对比治疗前、治疗3个月后腰椎功能[日本骨科协会腰椎功能(JOA)评分、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分]及治疗前、治疗1个月、治疗3个月的腰腿疼痛评分[视觉模拟评分法(VAS)],并比较临床疗效及治疗前、治疗1个月、治疗3个月的椎旁肌肉肌电变化情况,另比较治疗前、治疗3个月后血清TFAR19、Apaf-1水平变化情况及治疗期间不良事件发生情况。结果两组治疗3个月后JOA评分均高于治疗前(P<0.05),观察组治疗3个月后高于对照组(P<0.05);两组治疗3个月后ODI评分均低于治疗前(P<0.05),观察组治疗3个月后低于对照组(P<0.05);两组治疗1个月、3个月的VAS评分均低于治疗前(P<0.05),治疗3个月的VAS评分均低于治疗1个月(P<0.05);观察组治疗1个月、3个月的VAS评分均低于对照组(P<0.05);观察组总有效率高于对照组(P<0.05);两组治疗1个月、3个月的竖脊肌及多裂肌积分肌电值(IEMG)、平均振幅、平均频率斜率均高于治疗前(P<0.05),治疗3个月均高于治疗1个月(P<0.05);观察组治疗1个月、3个月的竖脊肌及多裂肌IEMG、平均振幅、平均频率斜率均高于对照组(P<0.05);两组治疗3个月后血清TFAR19、Apaf-1水平均低于治疗前(P<0.05),观察组治疗3个月后血清TFAR19、Apaf-1水平均低于对照组(P<0.05);两组治疗期间不良事件发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论循经针刺联合非手术脊柱减压治疗腰椎间盘突出症患者,可明显减轻患者腰腿疼痛感,改善腰椎功能及椎旁肌肉肌力,提升椎旁肌群稳定性,降低血清TFAR19、Apaf-1水平,提高临床疗效,且安全性良好。

环境高温促进猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达

高温热应激条件下,凋亡蛋白表达量升高,生殖细胞凋亡增加。凋亡蛋白酶活化因子1（apoptosis protease activating factor 1,Apaf-1）和凋亡蛋白酶活化起始者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9,（cysteine aspartic acid specific protease 9,Caspase-9）是细胞凋亡内源途径中的重要调节蛋白,热应激条件下猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达未见报道。本研究发现,夏季畜舍高温使Apaf-1和Caspase-9表达量升高。qRT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组（正常舍温20℃）相比,短时热应激组（40-42℃,1 h/d,7 d）和长时热应激组（40-42℃,1 h/d,42 d）,Apaf-1和Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量均显著升高。免疫组织化学研究发现,Apaf-1在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞。热应激处理导致精母细胞和精子细胞Apaf-1表达量升高。在各实验猪睾丸组织中,Caspase-9定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中。与对照组相比,热应激处理导致减数分裂以后的生精细胞和支持细胞Caspase-9表达量升高。上述结果表明,高温热应激促进Apaf-1和Caspase-9的表达,提示Apaf-1和Caspase-9表达的变化可能与猪舍高温导致的猪精液品质下降存在关联。