大鼠缺氧缺血后海马神经元凋亡及凋亡抑制蛋白XIAP表达的变化

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马CA1区神经元凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的变化规律。方法选择48例新生Wistar大鼠为HIBD组,并选择12只新生大鼠分为假手术组(n=6)和正常对照组(n=6)。HIBD制模后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d、14 d处死取材,每次处死6只,采用流式细胞技术检测3组大鼠海马神经元的凋亡率,并应用免疫组织化学染色方法检测各组海马CA1区XIAP的表达变化情况。结果与假手术组相比,HIBD组缺氧缺血后3 h海马神经元凋亡率即开始升高,但差异无统计学意义(P>0.05);于缺氧缺血后12 h凋亡率显著升高(P<0.05),48 h时达高峰,72 h时开始下降,7 d时明显低于高峰水平(P<0.05),而与假手术组无显著差异,14 d时基本恢复至假手术组水平。正常对照组和假手术组海马CA1区有极少量XIAP阳性表达细胞。HIBD组于缺氧缺血3 h时XIAP阳性表达显著升高(P<0.05),之后逐渐升高,在48 h时达到高峰,72 h时开始逐渐下降,7 d时已明显低于高峰水平(P<0.05),但仍明显高于正常对照组和假手术组水平,在14 d时略高于正常对照组和假手术组,但差异无统计学意义(P>0.05)。XIAP蛋白表达与HIBD后各时间点阳性凋亡细胞出现呈负相关(r=-0.564,P<0.05)。结论 XIAP蛋白的过度表达在脑缺氧缺血后细胞凋亡的调控过程中起着重要作用,对HIBD损伤的脑神经细胞具有保护作用。

凋亡抑制蛋白XIAP研究进展

X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)是哺乳动物中具有抑制细胞凋亡作用的蛋白,是IAPs家族的一员。XIAP通过杆状病毒IAP重复序列(BIR)直接与起始以及效应caspases结合,抑制了细胞凋亡的线粒体途径,也可以通过NF-kB途径抑制细胞表面受体介导的凋亡。XIAP具有不同于Bcl-2的作用机制,是IAPs家族中最具有抑制活性的一个。XIAP的作用受到线粒体释放的蛋白Smac的拮抗,以及受到自身具有泛素连接酶E3活性的RING指结构域的调节。阐述XIAP抑制caspase以及Smac等拮抗XIAP的机理对于治疗肿瘤以及过度凋亡疾病具有重要的意义。

X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1抑制肝癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的研究X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1(XAF1)基因对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠荷瘤模型,每组5只裸鼠分别在瘤内分3点注射相同感染滴度的重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、Ad5/F35-Null对照空病毒及等体积的磷酸缓冲液(PBS),隔天注射1次,疗程2周。每3天测量各组裸鼠移植瘤的体积,观察Ad5/F35-XAF1组移植瘤的生长与其他两组的差异。原位末端标记TUNEL法检测移植瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中XAF1蛋白表达和微血管密度(MVD)。结果与PBS组和Ad5/F35-Null组比较,瘤内注射Ad5/F35-XAF1组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小(P<0.05或P<0.01),而移植瘤细胞的凋亡指数和XAF1蛋白的表达率均明显增高(P<0.01)。结论腺病毒介导XAF1基因可抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导肝癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关。

X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1诱导细胞凋亡的研究进展

肿瘤是一种多基因疾病，其发生、发展涉及多条信号通路中多种基因的调控。细胞凋亡异常是肿瘤形成及耐药的重要机制，而诱导凋亡已成为治疗肿瘤的主要方法之一。凋亡抑制蛋白家族（inhibitor of apototic proteins，IAPs）是近年来受到普遍关注的蛋白因子，且都具有高度保守的杆状病毒凋亡抑制因子重复序列的结构域，可作用于凋亡信号通路中重要的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白（Caspases）级联反应的起始或效应阶段，调节Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9功能．从而明显抑制细胞凋亡。

CCCTC结合因子在HeLa细胞中调控X染色体连锁的凋亡抑制蛋白的表达

目的:确定HeLa细胞的CCCTC结合因子(CTCF)表达水平是否与细胞的抗凋亡能力相关,并研究其具体分子机制。方法:用顺铂和阿糖胞苷分别诱导HeLa细胞和CTCF敲降的HeLa-CTCF-II-11细胞凋亡,比较两者的凋亡率;用基因表达芯片检测CTCF敲降后HeLa细胞的表达谱变化,寻找并验证受CTCF调控的与凋亡相关的蛋白。结果:用顺铂和阿糖胞苷诱导后,HeLa-CTCF-II-11细胞的凋亡率显著高于HeLa细胞;HeLa细胞的CTCF敲降后,X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达显著下降。结论:CTCF敲降使HeLa细胞的抗凋亡能力下降,CTCF对XIAP基因的表达调控在这个过程中起了重要作用。

X连锁凋亡抑制蛋白及其相关因子1在慢性粒细胞白血病中的表达研究

目的观察X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及XIAP相关因子1(XAF1)在慢性粒细胞白血病(CML)中的表达情况,评估其在CML诊断及预后分析中的应用价值。方法选取CML患者42例,其中慢性期24例(CML慢性期组),进展期18例(CML进展期组,其中加速期7例,急变期11例)。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者骨髓细胞XIAP及XAF1 mRNA表达水平。对照组为非恶性血液病患者21例(非恶性血液病组)及急性白血病(AL)患者28例(AL组)。结果 CML进展期组患者骨髓中XIAP mRNA表达水平高于CML慢性期组(P<0.01)和非恶性血液病组(P<0.01);而CML进展期患者骨髓中XAF1 mRNA表达水平低于CML慢性期(P<0.05)和非恶性血液病组(P<0.01);化疗后获得骨髓缓解的CML患者骨髓中XIAP mRNA的表达水平显著低于化疗前,而XAF1 mRNA的表达水平显著高于化疗前;XIAP mRNA及XAF1 mRNA表达水平之间呈负相关。结论 CML患者进展期XIAP及XAF1的联合检测及动态观察可作为CML临床辅助诊断、分期及预后判断的指标之一。

慢性粒细胞白血病中X连锁凋亡抑制蛋白及其相关因子1的表达及临床意义的初步研究

目的初步研究慢性粒细胞白血病（CML）中X连锁凋亡抑制蛋白及其相关因子1的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（RQ-PCR）检测35例慢性粒细胞白血病患者[慢性期19例，进展期16例（包括加速期5例，急变期11例）]和17例非恶性血液病组为对照组的骨髓标本中X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）及其相关因子1（XAF1）的mRNA表达水平，采用SPSS16．0统计学软件进行数据分析处理。结果XIAP mRNA表达水平在进展期组患者骨髓中高于慢性期组（t=4．438，P〈0．01）和非恶性血液病组（t=10．93，P〈0．01），而XAF1mRNA表达水平则低于慢性期（t=2．61，P〈0．05）和非恶性血液病组（t=10．013，P〈0．05）；XIAPmRNA的表达水平在化疗后获得骨髓缓解的CML患者骨髓中显著低于化疗前（t=4．109，P〈0．01），而XAF1mRNA的表达水平则显著高于化疗前（t=5．995，P〈0．01）。结论XIAP及XAF1的联合检测及动态观察可作为CML临床辅助诊断、分期及预后判断的指标之一。

缺氧诱导因子-1α与X染色体连锁凋亡抑制蛋白在人卵巢癌中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在人卵巢癌中的表达及意义。方法用免疫组织化学技术法检测人正常卵巢组织标本10例、良性卵巢肿瘤标本10例、交界性卵巢肿瘤标本10例及恶性卵巢癌组织标本30例中HIF-1α和XIAP的表达情况;培养人卵巢癌细胞系SKOV3,向细胞培养瓶中加入HIF-1α激动剂和抑制剂,提取细胞总RNA,用RT-PCR技术观察XIAP和HIF-1α基因表达变化。结果XIAP、HIF-1α在恶性上皮性卵巢癌组及交界性肿瘤组表达率均明显高于良性卵巢肿瘤组(P<0.05)。恶性上皮性卵巢癌组织中HIF-1α与XIAP在临床分期晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)组的阳性表达率明显高于临床分期早期(Ⅰ期和Ⅱ期)组(P<0.05),与患者年龄、病理分型和淋巴结转移无关(P>0.05)。在恶性上皮性卵巢癌中HIF-1α与XIAP呈正相关(P<0.05)。随缺氧时间延长,SKOV3细胞系中HIF-1αmRNA表达量渐增;低氧24 h时HIF-1αmRNA表达量达高峰,36 h时HIF-1αmRNA表达量有所回落;添加HIF-1α抑制剂雷帕酶素后,HIF-1αmRNA表达量明显减少,XIAPmRNA亦减少。SKOV3细胞系中XIAP mRNA随HIF-1αmRNA而变化。结论HIF-1α和XIAP可能参与了恶性卵巢肿瘤的发生;HIF-1α和XIAP的高表达可能提示预后不良;HIF-1α对XIAP可能存在调控作用,两者可能协同促进卵巢癌的发生。

X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

凋亡蛋白抑制因子Survivin的研究进展

凋亡抑制蛋白（the inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族有8位成员,包括X染色体连锁的凋亡抑制剂（X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP）,cIAP1,cIAP2,NLR家族（NAIP）,livin,IAP相似蛋白2（ILP2）,BRUCE和survivin。Survivin是IAP家族中抗凋亡作用最强的成员,于1997年首次被发现。Survivin在正常组织、癌前组织、各种癌症中的表达率均不同,即survivin表达具有特异性,因此,它在肿瘤诊断、预后判断等方面成为核心。

X连锁凋亡抑制蛋白与卵巢癌化疗耐药的研究

X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)属于凋亡抑制蛋白超家族,具有特殊的杆状病毒IAP重复区和环状锌指结构,可以通过结合天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)以及影响信号传导通路,抑制凋亡的发生。研究表明XIAP对卵巢癌化疗耐药的产生有一定的关联,目前已经开始应用于肿瘤的靶向治疗。

X连锁凋亡抑制蛋白在Wilson病中的研究进展

XIAP属凋亡抑制蛋白（inhibitors of apoptosis，IAPs）家族中的1员。XIAP几乎在所有的成年和胚胎组织中均有表达。主要由3个杆状病毒IAP重复序列区（bacubviral inhibtor of apoptosis repeat，BIR）和1个RNG锌指结构域（RNG Zn finger domain）组成，BIR结构域一般由80个氨基酸残基组成，

凋亡蛋白抑制因子家族与白血病关系的研究进展

凋亡蛋白抑制因子(IAP)家族可以抑制凋亡的进行,与白血病发生发展及治疗有密切关系。该家族由多个成员组成,它们在各种白血病中的表达、调节及抗凋亡途径备有特点。IAP家族与白血病关系的深入研究,为白血病的临床诊断、判断预后和治疗提供了有力的依据。

左旋棉酚通过下调X连锁凋亡抑制蛋白增强表柔比星抑制肝细胞癌的体外作用

目的探讨左旋棉酚增强表柔比星杀伤肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞的作用及可能机制。方法将HCC细胞(Hep3B及HuH7)分为溶剂对照组、左旋棉酚处理组、表柔比星处理组、联合用药组、对照siRNA+表柔比星组、沉默X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)+表柔比星处理组、对照质粒+联合用药组、过表达XIAP+联合用药组,采用CCK-8方法检测各组细胞存活情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测剪切型聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶[cleaved poly(ADP-ribose)polymerase,Cle-PARP]水平、XIAP水平及真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)磷酸化水平。结果与溶剂对照相比,低浓度的左旋棉酚(5μmol/L)单独处理对HCC细胞存活无明显抑制作用(P>0.05),而将左旋棉酚与表柔比星联合使用后可显著增强表柔比星对HCC细胞的杀伤(P<0.05)、促进HCC细胞的凋亡及对剪切型PARP的诱导,同时还能抑制表柔比星诱导的XIAP上调及eIF4E磷酸化。此外,表柔比星抑制HCC细胞存活及升高剪切型PARP的能力能被沉默XIAP所增强,而被过表达XIAP所抑制。结论左旋棉酚可增强表柔比星抑制HCC细胞存活促进细胞凋亡的能力,其机制可能与抑制XIAP上调和eIF4E磷酸化有关,提示左旋棉酚可作为表柔比星治疗HCC的潜在增敏剂。

X连锁凋亡抑制蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在口腔鳞癌中的表达及其与患者预后之间的关系。方法:运用免疫组化技术检测52例口腔鳞癌组织标本中XIAP蛋白的表达情况,评价其表达水平和患者各临床病理参数及患者预后之间的关系。结果:纳入研究的52例临床标本中XIAP阳性表达14例(27%)。XIAP表达水平与病理分级相关,并且和患者预后显著相关。结论:XIAP蛋白可能参与了口腔鳞癌的发生发展,并且与患者预后密切相关。

Bax抑制因子1过表达对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨过表达B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)抑制因子1(BI-1)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:60只大鼠随机分为假手术组、模型组、空载腺病毒(Ad-NC)组和BI-1腺病毒(Ad-BI-1)组,每组15只。除假手术组外,其他各组大鼠均采用冠状动脉左前降支结扎法建立AMI大鼠模型,Ad-NC组和Ad-BI-1组大鼠分别于心肌梗死区域注射腺病毒包装的空载质粒和BI-1过表达质粒。术后72 h,检测各组大鼠心功能参数左室射血分数(LVEF)、左室缩短分数(LVFS)、左室舒张末期内径(LVEDD)和左室收缩末期内径(LVESD),TTC染色法检测各组大鼠心肌梗死面积百分率,TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡率,比色法检测各组大鼠心肌组织中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠心肌组织中BI-1 mRNA表达水平,Westernblotting法检测大鼠心肌组织中BI-1、Bcl-2、Bax和内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇依赖酶1(IRE1)、磷酸化IRE1(p-IRE1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平,并计算p-IRE1/IRE1和p-JNK/JNK比值。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVEF和LVFS明显降低(P<0.05),LVEDD、LVESD、心肌梗死面积百分率、心肌组织中Caspase-3活性和心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),心肌组织中BI-1 mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),心肌组织中Bax、GRP78蛋白表达水平和p-IRE1/IRE1及p-JNK/JNK比值明显升高(P<0.05);与模型组比较,Ad-BI-1组大鼠LVEF和LVFS明显升高(P<0.05),LVEDD和LVESD明显降低(P<0.05),心肌梗死面积百分率、心肌细胞凋亡率和心肌组织中Caspase-3活性明显降低(P<0.05),心肌组织中BI-1 mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),心肌组织中Bax、GRP78蛋白表达水平和p-IRE1/IRE1及p-JNK/JNK比值明显降低(P<0.05),Ad-NC组大鼠上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达BI-1通过抑制内质网应激途径降低心肌细胞凋亡水平,从而改善AMI大鼠心功能。

丹参酮Ⅱ_A下调XIAP及GRP78促进Eca109细胞凋亡

目的:探讨丹参酮Ⅱ_A促食管癌细胞系Eca109细胞凋亡的可能机制。方法:Eca109细胞应用不同浓度(2、4、8μg/mL)丹参酮Ⅱ_A处理48 h后,应用荧光定量实时PCR及Western blotting分析凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、GRP78、XIAP mRNA及蛋白的表达。结果:丹参酮Ⅱ_A可促进Eca109细胞凋亡,抑制Bcl-2、XIAP、GRP78 mRNA及蛋白表达,促进BAX、Caspase-9、Caspase-3 mRNA及蛋白表达,其作用呈浓度依赖性。结论:丹参酮Ⅱ_A可能通过调节凋亡相关蛋白表达促进Eca109细胞凋亡。

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。

XIAP siRNA对TRAIL诱导结肠癌细胞SW620凋亡能力的影响

目的研究XIAP siRNA对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-relatedApoptosis-Inducing Ligand,TRAIL)诱导结肠癌细胞SW620凋亡的影响。方法 SW620细胞分为转染XIAP siRNA组、空转染对照组或者siRNA阴性对照组,然后给予TRAIL处理。XIAP表达水平的变化、细胞增殖抑制、Caspase-3活性分别由Western blot、MTT法和Caspase-3荧光测定来检测。切割PARP的表达水平由Western blot来测定。结果 XIAP siRNA转染以后显著下调XIAP蛋白表达水平。和空转染对照组、siRNA阴性对照组相比,XIAP siRNA显著增强10、100、1 000 ng/ml等浓度的TRAIL作用以后SW620细胞的增殖抑制、Caspase-3活性和激活PARP。结论 XIAP siRNA能显著增强TRAIL诱导结肠癌细胞SW620的凋亡。

Sulfone通过抑制ERK途径上调XAF1表达诱导结肠癌细胞凋亡

目的:探讨化学预防药物Sulfone是否通过转录调节XAF1的表达诱导结肠癌细胞凋亡。方法:采用Hoechst 33258染色法检测人结肠癌细胞株HCT116(p53野生型)和SW480(p53突变型)经Sulfone处理后的细胞凋亡率。运用Western印迹法检测上述细胞经Sulfone处理前后XAF1、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和ERK1/2总蛋白质的表达量变化。通过双重荧光素酶报告基因检测Sulfone对XAF1启动子转录活性的调节作用。结果:Sulfone能诱导HCT116和SW480细胞凋亡,其效应随剂量的增加和时程的延长而更明显。Sulfone能有效抑制上述两种细胞中ERK1/2蛋白的磷酸化(抑制率分别为74%和57%,P<0.05),但上调XAF1蛋白的表达(2.2倍和3.1倍,P<0.05)。经Sulfone处理后,XAF1启动子的转录活性在HCT116和SW480细胞分别提高了3.3倍(P<0.01)和2.6倍(P<0.05)。结论:Sulfone通过抑制ERK途径,在转录水平显著上调XAF1的表达进而诱导细胞凋亡,且这种作用的强弱与肿瘤细胞的p53分型有关。