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用酵母双杂交系统分离一个新的人类细胞凋亡诱发基因 被引量:8
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作者 齐兵 齐义鹏 +1 位作者 M.Yutsudo 刘青珍 《中国科学(C辑)》 CSCD 2000年第2期113-122,共10页
asy基因是最近发现的一个新的凋亡诱发基因,但其诱发凋亡的机制仍不清楚. 采用酵母双杂交系统,从人肺细胞系(WI-38)cDNA文库中克隆了一个asx相互作用蛋白 基因asyip(asy interacting prot... asy基因是最近发现的一个新的凋亡诱发基因,但其诱发凋亡的机制仍不清楚. 采用酵母双杂交系统,从人肺细胞系(WI-38)cDNA文库中克隆了一个asx相互作用蛋白 基因asyip(asy interacting protein). asyip在人的各种组织内均能组成型转录合成 1.8和 2.7 kb两种 mRNA转录本,但转录水平有明显差异,在脑组织中转录水平最高.而且, 脑组织中 2.7 kb mRNA转录水平大大高于 1.8 kb的转录本.序列分析表明两种转录本起 始于一个共同的 5’端,但 3’端加 poly(A)位点不同.两者共享一个大的可读框,编码 26 ku的蛋白ASYIP.推论的氨基酸一级结构表明,ASYIP含有两个大的强疏水区、两个蛋 白激酶C磷酸化位点和两个酪蛋白激酶磷酸化位点.C端具有一个内质网捕获信号 (Lys-Lys-Lys-Ala-Glu).免疫沉淀试验进一步验证ASYIP和ASY在哺乳动物细胞中可 以相互结合.与asy基因一样,asyip基因的大量表达能抑制肿瘤细胞Saos-2的生长,诱 发细胞凋亡,但效率比asy低. 展开更多
关键词 asy基因 细胞凋亡诱发基因 分离 酵母双杂交系统
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一个新的调控人类细胞死亡基因的发现
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作者 齐兵 齐义鹏 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 1999年第4期513-514,共2页
A novel asy interacting protein gene (asyip) was isolated from human lung cell line(WI 38) cDNA library with yeast two hybrid system. The asyip gene is constitutively expressed as two mRNA transcripts with the size of... A novel asy interacting protein gene (asyip) was isolated from human lung cell line(WI 38) cDNA library with yeast two hybrid system. The asyip gene is constitutively expressed as two mRNA transcripts with the size of 1.8 kb and 2.7 kb in various human tissues at differential level. Putative ASYIP protein contains two large high hydrophobic regions, two protein kinase C phosphorylation sites and two casein kinase Ⅱ phosphorylation sites. A endoplasmic reticulum retrieval signal (Lys Lys Lys Ala Glu) is present at the C terminal of ASYIP protein. Interaction of ASYIP and ASY in mammalian cell was further identified by co immunoprecipitation assay. Like asy gene, overexpression of asyip gene can inhibit growth of tumor cell Saos 2 and induce cell apoptosis, but the efficiency is lower than that of asy gene. 展开更多
关键词 asy基因 asyip基因 细胞 凋亡诱发基因
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两种新的凋亡诱发蛋白的聚合作用及其对细胞凋亡的调控 被引量:1
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作者 刘青珍 甘淼 +2 位作者 齐义鹏 李凌云 齐兵 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2003年第2期160-168,共9页
Asy(apoptosis/saibousi Yutsudo)是日本Yutsudo小组于1999年发现的一个新的人类细胞凋亡诱发基因。2000年齐兵等人通过酵母双杂交系统从人肺细胞系(W1-38)cDNA文库中克隆出一个能与ASY蛋白相互作用的蛋白的新基因haP(homologue ofasy p... Asy(apoptosis/saibousi Yutsudo)是日本Yutsudo小组于1999年发现的一个新的人类细胞凋亡诱发基因。2000年齐兵等人通过酵母双杂交系统从人肺细胞系(W1-38)cDNA文库中克隆出一个能与ASY蛋白相互作用的蛋白的新基因haP(homologue ofasy protein)、已经证明ASY能在酵母细胞和哺乳动物细胞中形成同源二聚体,ASY与HAP能在酵母细胞中形成异源二聚体,ASY和HAP均能诱发肿瘤细胞Saos2和CGL4凋亡。通过酵母双杂交系统证明HAP能在酵母细胞中形成同源二聚体;通过交叉免疫沉淀证明HAP与ASY能在人类细胞中形成异源二聚体。通过AnnexinV,TUNEL,DNALadder和流式细胞计数等检测凋亡的技术,对asy,hap单独转染或共转染的人类正常细胞或肿瘤细胞的凋亡进行定性或定量检测,证明ASY和HAP不仅诱发人类肿瘤细胞凋亡,而且能诱发人类正常细胞凋亡,并且证明由ASY与HAP形成的异源二聚体可降低由ASY和HAP各自形成的同源二聚体诱发细胞凋亡的活性,揭示ASY与HAP形成同源或异源二聚体是调控人类细胞凋亡的重要机制。 展开更多
关键词 人类细胞凋亡诱发基因 诱发蛋白 asp基因 hap基因 聚合作用 调控机制 细胞调控
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