肿瘤特异性凋亡基因对人黑素瘤细胞凋亡诱导作用的机制研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin gene)在诱导人黑素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用,用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、蛋白印迹法(western blot)、锥虫蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间对人黑素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果表明,apoptin基因瞬间转染的人黑素瘤细胞A375可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin的转染时间有关;凋亡细胞内磷酸化型JNK蛋白随凋亡细胞数量的增加而增多,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论:JNK信号通路的活化可能在apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。

姜黄素对MPP^+诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其与iNOS的关系

【目的】观察姜黄素(curcumin,Cur)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,并且探讨其与iNOS关系。【方法】采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,间接免疫荧光FCM检测PC12细胞iNOS的表达。【结果】PC12细胞自然凋亡率为(1.5±0.1)%,0.5mmol·L-1MPP+作用24h后,PC12细胞凋亡率为(59.5±2.7)%;20μmol·L-1Cur和0.1mmol·L-1特异性iNOS抑制剂氨基胍(aminoguanidine,AG)对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但分别使0.5mmol·L-1MPP+处理组细胞凋亡率由(59.5±2.7)%下降到(15.9±5.3)%和(39.7±8.7)%(P<0.01);PC12细胞经0.5mmol·L-1MPP+处理24h后,其iNOS表达率由正常对照的(13.5±1.5)%增加到(71.9±4.0)%(P<0.01),加入20μmol·L-1Cur同时处理24h后,其iNOS蛋白表达率由(71.9±4.0)%下降到(40.0±3.0)%(P<0.01)。【结论】Cur可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制之一可能与抑制iNOS高表达有关。

桦褐孔菌提取物对胃癌MGC-803细胞株的抗增殖与诱导凋亡作用

探讨了桦褐孔菌提取物对胃癌MGC - 80 3细胞株的抗增殖、诱导凋亡作用及对凋亡相关基因表达的影响。MTT比色法结果显示 ,桦褐孔菌提取物在 0 .5～ 16 0 μg/mL范围内 (其IC50 为 4 μg/mL)对胃癌MGC- 80 3细胞株均有抑制作用 ,并表现出浓度依赖性关系 ;凋亡形态学观察结果 ,药物浓度 2 μg/mL ,作用时间 12～ 2 4h后 ,细胞核染色质固缩并凝结成块 ,聚集在核膜周边 ,凋亡小体形成 ;TUNEL法检测结果 ,不同浓度药物均诱导胃癌MGC - 80 3细胞株凋亡 ,细胞凋亡率随药物浓度增加而上升 ,显示明显的量效关系。Ki- 6 7抗原检测结果 ,不同浓度药物均抑制胃癌MGC - 80 3细胞株增殖 ,表现出浓度、时间依赖性关系 ;2μg/mL桦褐孔菌提取物作用胃癌MGC - 80 3细胞株 4 8h之后 ,明显下调Bcl - 2基因蛋白表达。因此 ,通过此项研究可得出 ,桦褐孔菌提取物对胃癌MGC - 80 3细胞株有抗增殖作用和诱导凋亡作用 ,其凋亡的分子生物学机制可能与下调凋亡抑制基因Bcl 2表达有一定关系。

虎杖中有效成分白藜芦醇对HeP-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用初探

目的：对白藜芦醇的体外抗肿瘤作用进行研究，探讨其作用机制。方法：用体外细胞培养，采用MTT法，并用流式细胞仪观察不同浓度白藜芦醇对HeP-2细胞生长的影响。结果：一定浓度白藜芦醇能抑制HeP-2细胞的恶性增殖，诱导HeP-2细胞出现凋亡峰，使HeP-2G0／G1期细胞增加，S期细胞减少，呈现G0／G1期阻滞现象。同时，不影响正常小鼠成纤维3T3细胞的生长。结论：一定浓度白藜芦醇可以抑制HeP-2生长，诱导HeP-2细胞发生凋亡，具一定的时间—剂量依赖性，且对正常细胞是无害的。

丹参酮ⅡA对NCI-H460肺癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的:本研究拟探讨丹参酮ⅡA对肺癌细胞株NCI- H460的增殖抑制作用及其作用机理。方法:应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对NCI- H460细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对NCI- H460细胞周期的影响,应用RT- PCR法检测用药后bcl 2和C myc基因mRNA表达水平。结果:丹参酮ⅡA对NCI H460细胞增殖抑制作用成剂量依赖性。细胞周期分析显示:用0 5μg/ml丹参酮ⅡA作用NCI H460细胞24、48、72h后,凋亡细胞分别占细胞总数1 .2%、3 .4%、7. 7%;用1 0μg/ml丹参酮ⅡA作用24、48、72h,凋亡细胞分别占细胞总数2 .6%、5. 9%、13 .4%;用2 0μg/ml丹参酮ⅡA作用24、48、72h,凋亡细胞分别占细胞总数4 .1%、8 .7%、37. 6%,说明丹参酮ⅡA能促使NCI H460细胞发生凋亡,且此作用呈剂量依赖性。用药48h后bcl- 2和C -myc基因mRNA表达明显降低。结论:丹参酮ⅡA对NCI H460细胞的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用。关键词 丹参酮ⅡA;NCI H460细胞株;细胞周期;

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胶质瘤细胞的诱导凋亡作用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosisfactor related apoptosis-inducingligand,TRAIL）可以诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,并且对正常细胞没有明显的毒性作用,因此在美国已进入临床Ⅱ期药物开发阶段。

AG 1478对GRC-1细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的:探讨表皮生长因子受体阻滞剂TyrophostinAG1478对肾癌GRC-1细胞的诱导凋亡作用及其机制,为肾癌的生物学特征研究和药物治疗提供理论依据。方法:将不同浓度的AG1478作用于体外培养的肾癌GRC-1细胞,以研究表皮生长因子受体信号转导阻滞剂对细胞增殖和细胞周期分布的影响。结果:AG1478抑制肾癌GRC-1细胞的增殖,诱导细胞周期停留在G1期,诱导肾癌GRC-1细胞凋亡。结论:表皮生长因子受体特异性阻滞剂可抑制肾肿瘤细胞的增殖,有望成为抗肾脏恶性肿瘤药物。

DADS对人白血病细胞和淋巴瘤细胞诱导凋亡作用比较研究

大蒜及其烯丙基硫化物的抗肿瘤作用正日益受到关注[1-2].我们的前期研究显示,DADS对人白血病HL60细胞具有双效作用,小剂量DADS（〈1.25mg·L^-1）诱导人白血病细胞分化,而中等剂量DADS（〉1.25mg·L^-1）可诱导人白血病细胞凋亡[3-4].我们的前期研究表明,Rac2与DADS诱导人白血病细胞凋亡相关[5],且DADS通过活性氧介导的JNK信号通路诱导HL-60细胞的凋亡,且NADPH氧化酶的活化是DADS诱导HL-60细胞凋亡过程ROS的主要来源[6-7].本研究在前期工作基础上.

BI2536对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/阿霉素增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

乳腺癌是威胁人类健康的一大疾病，2007年全世界新发病例为130万，死亡病例为46．5万人。阿霉素自问世以来，在治疗乳腺癌方面取得了好的疗效，但随着阿霉素（ADM）的广泛应用，临床上常出现不敏感、耐药等现象，进而导致治疗的失败。因此，急需寻找新的治疗方案。PLK1是一种多功能丝氨酸，苏氨酸激酶，对细胞周期的正常进行、中心体复制、胞质分裂以及肿瘤发生均有重要作用。在细胞增殖与凋亡的平衡机制中起重要作用。特异性抑制PLK1的活性，可以诱导细胞凋亡，B12536正是通过这一机制研发的抗癌药物。本实验探讨了B12536对乳腺癌ADM耐药株MCF-7／ADM细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用，为耐药乳腺癌寻求有效的药物提供了实验依据。

EGFR抑制剂PD153035对人卵巢癌A2780细胞生长抑制及诱导凋亡作用研究

目的：观察EGFR抑制剂PD153035在体内外对A2780细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法1，MTT和SRB法检测PD153035对A2780细胞的生长抑制或杀伤作用；2．集落形成实验观察PD153035对A2780细胞集落形成的影响；3．AO—EB染色法观察不同浓度PD153035作用48小时对A2780细胞凋亡的影响；4．流式细胞光度分析术（FCM）检测凋亡细胞百分率的变化；5．Western blot方法检测PD153035对A2780细胞作用48小时EGFR、P—EGFR、Erk1／2、P—Erk1／2、JNK、P—JNK表达及Bel-2、P53表达的变化；

合成紫花茄皂苷诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的:探讨合成紫花茄皂苷对BEL-7402细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:采用酸性磷酸酶(APA)法、吖啶橙荧光染色法和流式细胞术检测合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞增殖的影响以及诱导细胞凋亡的作用。利用蛋白印迹法检测药物作用后凋亡相关蛋白PARP的表达水平。结果:合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,其72h的IC50为4.2μg/ml。荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡形态。流式细胞术分析发现,细胞经皂苷作用6h、12h和24h后,凋亡率显著增加。蛋白印迹检测结果显示,合成紫花茄皂苷作用后肿瘤细胞内的PARP蛋白被剪切,Bcl-2蛋白的表达量下调。结论:合成紫花茄皂苷对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,且这一作用可能与Bcl-2表达下调有关。

氨基葡萄糖硫酸盐诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法 采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后,利用细胞计数、电镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色、DNA梯状电泳、流式细胞仪等方法来观察GS对K 5 62细胞的抑制效应和促凋亡作用。并用Westernblot检测活化的caspase 3和bcl- 2基因的表达。结果 0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS对K 5 62细胞的生长有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P <0 .0 1)。采用光镜、电镜和AO /EB染色法发现5mmol/LGS作用K 5 62细胞后,出现典型的凋亡形态学改变。AnnexinV染色后流式细胞仪能检测到早期凋亡细胞,细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期比例减低,并有凋亡峰。有明显的梯状DNA。同时GS诱导K 5 62细胞凋亡后出现活化的Caspase 3 ,而Bcl- 2蛋白表达减弱,甚至消失。结论 GS能诱导白血病K- 5 62细胞凋亡,该过程伴有Caspase- 3的活化和Bcl- 2蛋白表达降低。

熊果酸诱导人白血病HL-60细胞凋亡作用

熊果酸（Ursolic acid,UA）,又名乌索酸,乌苏酸,是存在多种天然植物中的五环三萜类化合物,如白花蛇香草、山楂、女子贞、夏枯草等,熊果酸具有保护肝脏、降血脂、调节机体免疫、抗氧化和抗肿瘤等多种生物学活性,研究表明熊果酸可通过诱导细胞凋亡抑制多种肿瘤细胞的生长,如人乳腺癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤等。关于熊果酸对人白血病HL-60细胞的增殖抑制作用、诱导凋亡作用及相关机制尚未见报道，本研究以HL-60细胞为研究对象，观察熊果酸对HL-60细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用，并采用流式细胞术、Westernblot技术研究熊果酸诱导HL-60细胞凋亡的分子机制，为熊果酸的开发利用提供实验基础和理论依据。

槲皮素对人肝癌SMMC-7721细胞生长抑制及诱导凋亡作用

肝癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，多数肝癌发现时已为晚期，进展快，预后差［1］，从天然植物中寻找高效低毒的抗肝癌药物的一直是研究热点［2］。槲皮素（1，3，4，5，7-五羟基黄酮，Quercetin）是存在于多种植物的果实和花中的天然黄酮类物质，槲皮素具有抗炎、抗过敏、抗氧化、抗病毒、调节免疫、降血脂、抗氧化，抗癌等多种生物学活性，研究表明槲皮素体外可以抑制结肠癌、胃癌、卵巢癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞凋亡［3-8］。本研究体外观察槲皮素对人肝癌 SMMC-7721细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用，为其进一步应用于临床治疗肝癌提供理论依据。

小檗碱对人胃癌细胞株BGC-823诱导凋亡的研究

目的:研究小檗碱对人胃癌BGC- 82 3细胞诱导凋亡的作用。方法:应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪和TUNEL染色研究小檗碱对人胃癌BGC- 82 3细胞诱导凋亡的作用。结果:小檗碱作用人胃癌BGC -82 3细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化,细胞核固缩、染色质凝集成新月状紧贴于核膜周边,核碎裂、染色质片断化、凋亡小体形成等。流式细胞仪上出现典型的亚二倍体凋亡峰。TUNEL染色显示,随小檗碱浓度增加和作用时间延长,细胞凋亡率增加。结论:小檗碱对人胃癌BGC- 82 3细胞有诱导凋亡作用。

辐射诱导多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM凋亡的实验研究

目的研究联合应用放、化疗对多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM凋亡的影响并探讨诱导凋的机制.方法比较放化疗、单纯放疗、单纯化疗的诱导凋亡作用,将HepG2/ADM分为6组,比较各组凋亡率;应用RT-PCR法检测各组HepG2/ADM细胞p53、bcl-2和bax的表达.结果经处理因素作用后,组1～6HepG2/ADM细胞凋亡率分别为2.8±0.3%,5.2±0.5%,10.9±2.3%,31.7±4.1%,11.7±2.8%,35.2±4.5%.放化疗与单纯化疗相比诱导HepG2/ADM凋亡率明显增高(P＜0.05).RT-PCR检测组1～6 p53表达分别为:0.22±0.04、0.23±0.02、0.31±0.04、0.55±0.02、0.35±0.04、0.57±0.05;bcl-2表达分别为:0.34±0.03、0.3l±0.04、0.25±0.02、0.14±0.02、0.26±0.03、0.10±0.03;bax表达分别为:0.21±0.02、0.25±0.02、0.29±0.03、0.38±0.03、0.29±0.03、0.41±0.06.结论放化疗联合应用能够显著增加耐药细胞HepG2/ADM凋亡率,这种作用与p53、bax、bcl-2表达调节有关.

丹参酮ⅡA对人A549／CDDP细胞凋亡和耐药蛋白表达的作用

观察单体丹参酮ⅡA（TanⅡA）对人耐药非小细胞肺癌细胞（A549／CDDP）的诱导凋亡作用，并对其分子机制作初步探讨。方法常规体外培养A549／CDDP细胞；采用光镜，HE染色，荧光染色H33258观察TanⅡA作用A549／CDDP72h时细胞凋亡形态变化；

塞来昔布诱导人骨肉瘤细胞株SAOS-2凋亡的实验研究

目的研究塞来昔布(celecoxib)对人骨肉瘤细胞株SAOS2生长和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,以确定塞来昔布对SAOS2的有效剂量;应用高效液相色谱(HPLC)检测前列腺素E2(PGE2)含量;光镜形态学观察;流式细胞仪测定细胞周期。结果塞来昔布抑制SAOS2的增殖,效应呈剂量依赖性;塞来昔布能够诱导SAOS2细胞凋亡,当浓度为100μmol/L时,凋亡率增加了44.3%,但是塞来昔布的这种抑制SAOS2生长和诱导凋亡作用不能被PGE2所拮抗。结论塞来昔布对于人类骨肉瘤可能是一种有效的化学治疗和化学预防药物,塞来昔布并非通过前列腺素E2(PGE2)途径抑制SAOS2生长和诱导凋亡。