基于线粒体凋亡途径介导的骨骼肌细胞凋亡探究参芪复方对糖尿病骨骼肌病变的干预机制

目的 探讨参芪复方通过调控线粒体凋亡途径介导的骨骼肌细胞凋亡对糖尿病骨骼肌病变的作用。方法 以含5.56 mmol/L葡萄糖(Glucose, Glu)培养基及含25 mmol/L Glu的培养基分别培养L6细胞,模拟正常及糖尿病的生理环境。实验设置6组,为空白组、模型组、参芪复方低剂量组、参芪复方中剂量组、参芪复方高剂量组、罗格列酮组,分别给予含5.56 mmol/L Glu培养基稀释的10%空白血清、含25 mmol/L Glu培养基稀释的10%空白血清、5%参芪复方含药血清、10%参芪复方含药血清、15%参芪复方含药血清、300 ng/mL罗格列酮混悬液进行干预。药物干预24 h后收集细胞,以流式细胞术检测各组细胞凋亡率,以RT-qPCR和Western blot检测各组细胞内B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-xl基因(Bcl-xl)、Bcl-2同源拮抗剂/杀伤剂(Bak)、Bcl-xl/Bcl-2相关死亡启动因子(Bad)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt c)、第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活剂/低等电点IAP直接结合蛋白(Smac/Diablo)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的基因与蛋白表达水平。结果 与空白组相比,模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),细胞内Bak、Bax、Cyt c、Smac/Diablo、AIF、Caspase-3、Caspase-9的基因与蛋白表达显著增加(P<0.05),Bad蛋白表达显著增加(P<0.05),Bcl-2的基因与蛋白表达显著降低(P<0.05),Bcl-xl基因表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,参芪复方组Bak、Bax、Caspase-9、Caspase-3的基因与蛋白表达显著降低(P<0.05),Bad、Cyt c、Smac/Diablo的蛋白表达显著降低,Bcl-2、Bcl-xl的基因与蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 参芪复方糖尿病骨骼肌病变的干预作用可能是通过调控线粒体凋亡途径,降低高糖环境下骨骼肌细胞凋亡率来实现的。

异乌药内酯通过ROS介导的线粒体凋亡途径诱导A549细胞凋亡的研究

为探究异乌药内酯诱导细胞内活性氧的产生在介导线粒体凋亡途径中的作用及对肺癌A549细胞凋亡的影响,将A549细胞分为对照组(DMSO)、异乌药内酯处理组(15μmol/L)、抗氧化剂NAC组(3 mmol/L)和异乌药内酯联合NAC处理组(Isolinderalactone 15μmol/L+NAC 3 mmol/L)进行实验。采用CCK-8方法检测细胞活性,通过流式细胞术检测细胞凋亡情况,DCFH-DA法检测A549细胞内活性氧水平变化,JC-1染色后流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位,Western blot方法检测细胞内线粒体凋亡通路相关关键蛋白表达的变化。结果表明:异乌药内酯能抑制肺癌A549细胞生长并诱导细胞凋亡,促进ROS积累,线粒体膜显著去极化,上调促凋亡蛋白Bax表达水平而下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平。抗氧化剂NAC与异乌药内酯联合作用后,与异乌药内酯单独处理组相比,以上各方面的变化水平都呈现出不同程度的下降。异乌药内酯能通过诱导细胞内活性氧积累,激活线粒体凋亡途径从而促进A549细胞发生凋亡。

肿瘤细胞的凋亡途径、非凋亡途径死亡的特征及新治疗策略

细胞死亡途径存在缺陷是肿瘤的特征之一。肿瘤发展与细胞凋亡的抗性密切相关,但肿瘤细胞也通过非凋亡机制发生死亡,例如坏死、衰老、自吞噬(autophagy)及丝裂灾变(mitoticcatastro phe)等。借助药物对凋亡途径和非凋亡途径的调控有可能发展新的肿瘤治疗手段,非凋亡分子机制的研究可能揭示抗癌药物新的作用机制,发现新的靶标以至新的抗癌药物,因而日渐受到关注。

猪冷冻精子的细胞凋亡及凋亡途径初步研究

旨在研究低温冷冻解冻对精子细胞凋亡的影响,并探讨凋亡发生的可能相关途径。采用流式细胞仪检测解冻后精子内的ROS水平和TUNEL染色后的细胞凋亡情况,使用酶标仪检测精子内ATP含量,利用相对荧光定量PCR技术检测不同凋亡途径中相关基因的表达量变化。结果表明:冷冻后精子活力、顶体和质膜完整率显著下降(P<0.05);冷冻精子TUNEL染色后的凋亡率(80.4%)与新鲜组(9.7%)相比显著升高(P<0.05);冷冻组精子内ROS绿色荧光比率(58.2%)亦显著高于新鲜组(P<0.05);与新鲜组0.926μmol·L-1的ATP浓度相比,冷冻组精子的ATP浓度(0.247μmol·L-1)则显著下降(P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,冷冻组中TNF-α、Fas、Caspase家族、P53和Bax基因相对表达量升高,其中Fas、P53、TNF-α、Caspase-8和Caspase-9等相对表达量显著升高(P<0.05);BCL-2、BIRC-5、MnSOD、CuZnSOD和SURVIVN基因相对表达量降低,其中BIRC-5、MnSOD、SURVIVN显著降低(P<0.05)。结果表明:低温冷冻解冻会使猪精子细胞发生严重的凋亡,死亡受体外源性凋亡途径和线粒体内源性凋亡途径均可能介导了冷冻后精子的凋亡。

凋亡途径与肿瘤治疗

经典的凋亡途径是指死亡受体途径和线粒体途径,其调控可通过死亡受体、线粒体、凋亡抑制蛋白和Caspase酶等多个水平实现,也受相关传导通路信号的调节.凋亡与肿瘤的发生、发展和治疗密切相关,利用有关的凋亡诱导和调控机制诱导肿瘤细胞凋亡已经成为治疗肿瘤的一个重要途径,我们即对该方面的研究进展进行综述.

当归补血汤对内质网应激特有Caspase-12凋亡途径影响

目的：研究当归补血汤对内质网应激特有的Caspase-12凋亡途径的影响,探讨当归补血汤对肾脏的保护机制。方法：60只SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）结合高脂高糖饮食建立大鼠糖尿病肾病模型（DN）,喂养8周后,观察大鼠的毛色、精神状态等一般状态;酶偶联比色法检测尿蛋白、BUN、尿肌酐等反应肾功能的相关指标;光镜观察其肾脏病理变化;RT-PCR、western Blot及免疫组化检测GRP78、Caspase-12的蛋白及m RNA表达水平;TUNEL检测肾组织细胞凋亡情况。结果：DN组大鼠空腹血糖、尿蛋白、BUN等明显升高,肾功能受损严重,肾脏组织GRP78、Caspase-12的蛋白及m RNA含量增加,光镜下肾脏结构病变明显,肾组织细胞凋亡率增高;当归补血汤治疗后肾功能损伤减轻,GRP78、Caspase-12的蛋白及m RNA含量降低,光镜下肾组织病变改善,大鼠肾组织凋亡率降低。结论：当归补血汤能抑制内质网应激特有Caspase-12凋亡途径,改善糖尿病肾病大鼠肾功能,减少肾组织过度凋亡。

白术多糖通过调控线粒体凋亡途径诱导人子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡

目的:探讨白术多糖(PAM)对人子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:预实验选取梯度浓度(0、7.5、15、30、60、120、240 mg/ml)的PAM作用于RL95-2细胞,MTT比色法检测细胞增殖活性,Bliss法计算24 h、48 h和72 h的半数抑制浓度(IC50)。正式实验中将RL95-2细胞分为空白对照组和不同浓度(15、30、60 mg/ml)PAM处理组。共培养48 h后,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测细胞线粒体和细胞质中细胞色素C(Cyt C)蛋白水平差异;分光光度法检测细胞中半胱天冬酶9(Caspase9)活性;Western blot检测线粒体凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和cleaved-Caspase3)表达水平。结果:PAM可降低RL95-2细胞的增殖率,与药物浓度和作用时间有关。与空白对照组相比,PAM处理组细胞凋亡率显著增加(均P<0.01);线粒体膜电位及Cyt C蛋白表达显著降低(均P<0.05),但细胞质中Cyt C蛋白表达显著增加(P<0.01);细胞中Caspase9活性显著增强(均P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(均P<0.05),而Bax和cleaved-Caspase3蛋白水平显著提高(均P<0.01)。结论:白术多糖可能通过激活线粒体凋亡途径促进RL95-2细胞凋亡。

Survivin抑制剂YM155对视网膜母细胞瘤Y79细胞线粒体凋亡途径的影响

目的:探讨人生存素(survivin)抑制剂YM155{4,9-二氢-1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(2-吡嗪甲基)-1H-萘并[2,3-d]咪唑鎓溴化物}对视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡、线粒体膜电位(△ψ_m)和细胞色素C(Cyt C)的影响,探讨其诱导Y79细胞凋亡的线粒体机制。方法:体外培养Y79细胞,分别以0、0.5、1、2、4、8nmol/L的YM155进行处理,采用CCK-8法和溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)掺入标记法检测YM155对Y79细胞增殖的抑制作用。Y79细胞随机分为4组:对照组、阳性对照组[加入10nmol/L拓扑替康(topotecan)]和低剂量(1 nmol/L)、高剂量(2 nmol/L)YM155组。每组设3个复孔,处理24h。分别采用TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡的情况;采用JC-1活细胞染色检测△ψ_m的变化;采用免疫荧光分析检测Cyt C的分布;采用Western blot法检测survivin和线粒体内Cyt C的蛋白表达。结果:与对照组比较,YM155对Y79细胞增殖具有明显抑制作用,并诱导Y79细胞凋亡(P<0.05);YM155显著降低Y79细胞的△ψ_m,促进Cyt C由线粒体释放至胞浆,降低线粒体内Cyt C的水平(P<0.05)。结论:YM155对Y79细胞增殖具有抑制作用,并诱导细胞凋亡其机制可能是通过线粒体介导的细胞凋亡途径实现的。

基于线粒体凋亡途径探讨纳达合剂的胃黏膜保护作用机制

目的:本实验旨在观察纳达合剂对胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜保护作用的分子机制。方法:利用大鼠胆汁反流性胃炎模型,将60只大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、纳达低、中、高剂量组和麦滋林组各10只。通过HE染色观察大鼠胃黏膜病理变化,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,化学发光法检测胃黏膜ATP含量变化,Tunel法检测胃黏膜上皮细胞凋亡情况,Western blotting方法检测胃黏膜Bax、p-Bcl-2、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleaved-caspase-9片段的表达。结果:纳达合剂可显著保护大鼠胃黏膜受损,并能显著提高胃黏膜ATP含量,虽能使线粒体膜电位水平有所升高,但差异无统计学意义。纳达合剂能够显著减少胃黏膜上皮细胞凋亡率,提高胃黏膜p-Bcl-2的表达,降低Bax、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9的表达,且p-Bcl-2/Bax比值显著增加。结论:纳达合剂保护胃黏膜的作用可能与其抑制线粒体凋亡途径有关。

冬虫夏草对糖尿病对比剂肾病大鼠肾细胞中线粒体凋亡途径的影响

目的:探讨冬虫夏草对糖尿病对比剂肾病(contrast-induced nephropathy, CIN)大鼠肾细胞中线粒体凋亡途径的影响。方法:大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,各组大鼠分别给予相应剂量冬虫夏草和生理盐水灌胃连续7 d,第8天大鼠经尾静脉注射碘克沙醇建立CIN模型,收集标本测定BUN、Scr、NGAL、KIM-1、NO、SOD、MDA和T-AOC,荧光定量PCR和WB法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2基因和蛋白水平,Tunel法检测肾细胞凋亡情况,HE染色法观察肾组织病理变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠BUN、Scr、NGAL、KIM-1和MDA水平升高、NO、SOD和T-AOC水平降低,Caspase-3、9和Bax表达升高、Bcl-2及Bcl-2/Bax比值降低,肾凋亡细胞明显增多;肾细胞出现空泡、坏死等表现。与模型组比较,低剂量组Scr和MDA含量降低,Caspase-3和Bax表达降低,而Bcl-2和Bcl-2/Bax比值升高,中、高剂量组Scr、BUN、NGAL、KIM-1和MDA水平降低、NO和SOD含量升高,Caspase-3、9和Bax表达降低、Bcl-2与Bcl-2/Bax比值均升高,高剂量组大鼠肾凋亡细胞明显减少,且肾小管病理性改变减少。结论:冬虫夏草可增强糖尿病CIN大鼠抗氧化应激能力,调控线粒体凋亡途径,减少肾细胞凋亡,保护肾损伤,高剂量冬虫夏草疗效更佳。

黄芩素通过抑制线粒体凋亡途径和p38MAPK通路保护人黑素细胞抵抗H_2O_2诱导的细胞凋亡

应用抗氧化剂清除体内过多的H202已被证实对白癜风患者治疗有益。黄芩素作为一种具有抗氧化活性的中药单体已经应用于白癜风的中医治疗中。我们的实验明确了黄芩素在保护人黑素细胞抵抗H202诱导的细胞凋亡中的保护效果并探讨了其潜在的作用机制。

鱼蛇逍遥汤对宫颈癌Hela细胞Fas凋亡途径相关信号分子的影响

目的探讨鱼蛇逍遥汤对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响及其分子机制。方法不同浓度的鱼蛇逍遥汤(0、2、5、10、20μM)处理人宫颈癌Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot、RT-PCR检测Fas、FasL的蛋白和mRNA表达。结果鱼蛇逍遥汤处理后凋亡率增加,Fas、FasL的蛋白和mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论鱼蛇逍遥汤可以诱导人类宫颈癌Hela细胞凋亡,其可能是通过Fas/FasL介导外源性途径来实现的。

Fas凋亡途径在椎间盘退变中的研究进展

随着人们工作、生活节奏的加快,下腰痛(Low back pain,LBP)已成为危害人类健康的重要原因之一。目前认为,椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是导致下腰痛的重要病理变化。关于IDD的研究主要集中在发病的分子机制上,然而具体机制尚未阐明。近期的研究表明,Fas凋亡途径在椎间盘退变的发生发展中发挥了一定作用。本文主要就Fas凋亡途径在椎间盘退变中的相关研究作一综述。

谷氨酰胺对急性肝衰竭大鼠肠上皮细胞线粒体凋亡途径的调控作用

目的:探讨谷氨酰胺对急性肝衰竭大鼠肠上皮细胞线粒体凋亡途径的影响及其机制。方法:雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、模型组、谷氨酰胺组。于造模前3d对谷氨酰胺组大鼠给予L-谷氨酰胺0.5g/(kg·d)灌胃,第4天模型组和谷氨酰胺组大鼠给予腹腔注射D-氨基半乳糖(400 mg/kg)和脂多糖(100 g/kg)制备急性肝衰竭模型。造模后48 h,观察各组大鼠生存情况,处死大鼠并收集血、小肠组织标本,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBil)水平;观察小肠组织病理学变化;Tunel联合DAPI染色检测肠上皮细胞凋亡情况;Western Blot检测小肠组织Bcl-2、Bax及Cyt-c蛋白表达量。结果:谷氨酰胺组大鼠的存活率(80.0%)高于模型组(46.7%);模型组大鼠血清ALT、AST和TBil水平分别为(5 345.9±287.3)U/L、(2 936.7±35.6)U/L和(93.5±1.6)μmol/L,均显著高于正常组大鼠(48.3±6.4)U/L、(128.6±14.3)U/L和(8.6±1.3)μmol/L(均P<0.01),谷氨酰胺组大鼠ALT、AST和TBil水平均较模型组降低,分别为(696.4±14.5)U/L、(434.5±15.8)U/L和(32.5±1.8)μmol/L(P均<0.05)。小肠黏膜组织Tunel染色表明模型组大鼠小肠可见大量肠上皮细胞凋亡、坏死;谷氨酰胺组大鼠肠上皮细胞凋亡较模型组明显减轻。Western Blot检测模型组大鼠小肠组织中Bax、Cyt-c蛋白表达与正常组比较均明显升高,Bcl-2蛋白表达则明显降低,Bcl-2/Bax值较正常组下降;而谷氨酰胺组肠组织中Bax、Cyt-c蛋白的表达均弱于模型组(P均<0.05),Bcl-2蛋白表达较模型组高(P<0.05),Bcl-2/Bax值较模型组升高。结论:谷氨酰胺可以提高急性肝衰竭大鼠的生存率,改善其肝功能,减轻肠上皮病理损伤,抑制肠上皮细胞凋亡,其机制可能是通过抑制肠上皮细胞线粒体凋亡途径来实现的。

芦笋皂苷诱导HepG-2细胞凋亡途径研究

目的：本文通过芦笋皂苷对体外培养HepG-2细胞的凋亡进行研究，对其凋亡途径进行了初步的揭示。方法与结果：酶标法检测表明，50mg·L-1、100mg·L-1、200mg·L-1的芦笋皂苷分别作用HepG-2细胞24h、48h后Caspase-8和Caspase-3活性均升高，且随着芦笋皂苷浓度的增加而增加。

柚皮苷对地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡及线粒体凋亡途径的影响

目的探讨柚皮苷对地塞米松诱导下MC3T3-E1细胞增殖、凋亡的影响及可能的分子机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1细胞,实验分5组:空白对照组(NC)、地塞米松组(DEX)、1μmol/L柚皮苷+地塞米松组(1+DEX)、10μmol/L柚皮苷+地塞米松组(10+DEX)和50μmol/L柚皮苷+地塞米松组(50+DEX)。药物干预后,采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞技术检测各实验组细胞凋亡情况;q PCR法检测线粒体凋亡通路相关基因Apaf-1、Caspase-9 mRNA相对表达量;Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)及Cleaved-caspase-9蛋白表达。结果与NC组相比,地塞米松组细胞增殖受到抑制(P<0.05),而不同浓度的柚皮苷以剂量依赖方式促进细胞增殖(P<0.05)。流式细胞技术检测结果显示,DEX组细胞早期凋亡率增加(P<0.05),而同时加柚皮苷干预组细胞凋亡率与DEX组相比明显减少(P<0.05)。q PCR结果显示,DEX组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达升高(P<0.05),而同时加柚皮苷干预组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达下降。WB结果显示DEX组Cyt-C、Cleaved-Caspase-9表达量增高(P<0.05)。相反,同时加柚皮苷干预组Cyt-C及Cleaved-Caspase-9表达量减少(P<0.05)。结论柚皮苷可以抑制地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡,其机制可能与下调线粒体凋亡途径中Cyt-C、Apaf-1凋亡酶激活因子的表达,抑制Caspase-9凋亡蛋白的激活有关。

稳心颗粒对心肌梗死大鼠BCL-2/BAX/Caspase凋亡途径基因表达的影响

目的:探讨稳心颗粒调控心肌细胞凋亡相关基因表达的心脏保护机制。方法:建立心肌梗死大鼠模型,术后随机分为模型组、稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组及假手术组。治疗2周后采用心脏超声心动图检测各组大鼠左心室收缩末期前壁厚度(LVAWs)、收缩末期内径(LVIDs)、收缩末期后壁厚度(LVPWs)、舒张末期前壁厚度(LVAWd)、舒张末期内径(LVIDd)、舒张末期后壁厚度(LVPWd)以及左室射血分数(LVEF);苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠心脏病理结构改变;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组大鼠哺乳动物B细胞淋巴瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的相对表达水平;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率变化。结果:与假手术组相比,模型组LVAWs、LVPWs、LVPWd及LVEF均显著减少(P<0.05~0.01),LVIDs、LVIDd显著增加(P<0.05~0.01),心脏组织病理缺血损伤严重,并且模型组BCL-2mRNA相对表达水平及BCL-2/BAX比值明显减少(P<0.01),而BAX、Caspase-9、Caspase-3 mRNA相对表达水平明显增高(P<0.01),心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.01);稳心颗粒低、高剂量组及美托洛尔组的LVAWs、LVPWs、LVPWd、LVEF均显著增加(P<0.05~0.01),LVIDs、LVIDd显著减小(P<0.05~0.01),心脏组织病理损伤改善,BCL-2 mRNA表达水平和BCL-2/BAX比值显著增加(P<0.05~0.01),BAX、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05~0.01),心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论:稳心颗粒可通过调控BCL-2/BAX/Caspase凋亡途径基因表达而发挥心脏保护作用。

脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响

目的研究脑健胶囊对大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响,探讨脑健胶囊抗脑缺血后神经保护的作用机制。方法将SD大鼠随机分为补阳还五汤组、脑健胶囊组、模型组和假手术组共4组,每组25只。除假手术组和模型组给予等体积无菌蒸馏水以外,其余两组在大脑中动脉线检法复制局灶性脑缺血大鼠模型(MCAO)造模后给药,将各组大鼠分别存活1、3、7、14、28 d时取脑组织及腹主动脉采血。运用免疫组化法和Elisa法检测脑组织及血清中Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Caspase-8、Caspase-3因子表达。结果脑缺血后大鼠均有神经功能障碍,经过治疗后,脑健胶囊能显著改善其神经功能缺失症状,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论脑健胶囊通过抑制缺血后脑组织FADD、Caspase-3、Caspase-8的表达,从而起到保护缺血后脑组织作用,减轻脑组织损伤。