欧拉藏羊肉成熟过程中Hsp70对绷胞凋亡酶活性的影响

为了研究欧拉藏羊肉宰后成熟过程中热休克蛋白70（heatshockprotein70。Hsp70）的变化和细胞凋亡酶（Caspase-3；Caspase-6,Caspase-8；Caspase-9）的活性变化及其相关性，测定了16只甘南欧拉母藏羊背最长肌肉成熟过程中Hsp70的表达量以及细胞凋亡酶的活性，进一步研究了Hsp70与细胞凋亡酶的关系。结果表明：Hsp70表达量总体呈降低的趋势，宰后O-12hHsp70表达量显著升高（P〈O．05），l2-24hHsp70表达量显著降低（P〈O．05），之后不断下降，宰后168h达到最小值；Hsp70的表达量与Caspase-8活力值显著正相关。证实了Hsp70与细胞凋亡酶8之间存在显著相关性。

细胞凋亡酶在肉品成熟过程中对其嫩度影响的研究进展

综述了近年来有关细胞凋亡酶在肉成熟过程中的研究新进展,包括:细胞凋亡酶的种类、激活途径,对蛋白水解作用的调控机制,细胞凋亡酶参与蛋白水解的不同途径,细胞凋亡酶与钙蛋白酶之间的相互作用。从多方面论证肉品成熟过程中细胞死亡的主要方式为细胞凋亡;同时,就细胞凋亡酶在肉品成熟中的作用机制提出一些新思路。

毛蕊异黄酮通过调控细胞色素C/凋亡酶激活因子1凋亡信号通路减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨毛蕊异黄酮对脑缺血/再灌注损伤的影响及其作用机制。方法将SPF级雄性SD大鼠40只随机分为假手术组(sham)、模型组(model)、毛蕊异黄酮组(calycosin,20 mg/kg)和尼莫地平组(nimodipine,0.7 mg/kg,阳性对照药组),采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,在体模拟脑缺血/再灌注损伤环境。Zea Longa评分法检测脑缺血/再灌注大鼠神经功能缺损情况;盐酸2,3,5-三苯基四氮(TTC)染色检测脑梗死体积;HE染色检测神经细胞病理形态学改变;尼氏染色观察尼氏小体变化;TUNEL染色检测神经细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡关键蛋白细胞色素C(Cyt C)、凋亡酶激活因子1(Apaf-1)、Caspase-9和Caspase-3的表达。结果与sham组相比,model组神经功能缺损症状明显(P<0.05),脑梗死体积明显增大(P<0.05),倒置光学显微镜下观察发现神经细胞出现胞体收缩,胞核深染、固缩,细胞生长状态较差,尼氏小体明显减少或消失(P<0.05),凋亡神经细胞明显增多(P<0.05),凋亡关键蛋白Cyt C、Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3表达均明显升高(P<0.05);与model组相比,calycosin组和nimodipine组大鼠神经功能缺损症状明显减轻(P<0.05),脑梗死体积明显缩小(P<0.05),光学显微镜下观察发现,神经细胞损伤明显减轻,尼氏小体表达明显增多(P<0.05),凋亡神经细胞明显减少(P<0.05),凋亡关键蛋白Cyt C、Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3的表达明显降低(P<0.05)。结论毛蕊异黄酮可明显抑制神经细胞凋亡,减轻脑缺血/再灌注损伤,其作用机制与毛蕊异黄酮有效调控Cyt C/Apaf-1凋亡信号通路相关。

藏羊肉宰后成熟过程中热休克蛋白27对肌原纤维蛋白及细胞凋亡酶的影响

为研究藏羊肉宰后成熟过程中热休克蛋白27(heat shock protein 27,Hsp27)对肌原纤维蛋白降解特性及细胞凋亡酶活力的影响,以经Hsp27抑制剂KRIBB3处理的藏羊肉为研究对象,测定藏羊肉在宰后成熟过程中Caspase-3、Caspase-9活力变化以及肌原纤维蛋白的溶解性和降解特性,并通过体外实验进一步研究Hsp27对μ-钙激活酶和Caspase-3降解肌原纤维蛋白的影响。结果表明:Hsp27能显著抑制Caspase-3、Caspase-9的活力(P<0.05),并能够抑制肌原纤维小片化的发生以及肌间线蛋白和肌钙蛋白-T的降解;体外实验发现,Hsp27能够抑制μ-钙激活酶和Caspase-3对肌原纤维蛋白的降解。

宰后牦牛肉成熟过程中活性氧对细胞凋亡酶活性及肌原纤维蛋白的影响

为明确宰后牦牛肉成熟过程中活性氧（ROS）对细瞻凋亡酶活性及帆原纤维蛋a的影响,选取牦牛背最长肌，在活性氧激活剂过氧化氢（H2O2）的处理下，探究宰后成熟过程中ROS相对含量、Caspase-3/-9活性、肌原纤维蛋白溶解性、肌原纤维小片化指数（MFI）、肌澡纤维蛋白二级结构相对含量的变化，结果表明，经10mmol H2O2处理后的牦牛肉在0.5—8d时ROS相对含量明显高于对照组（P〈0．05），0．5-3d试验组与对照组Caspase-3酶活性（P〈0．05），0．5—1d试验组与对照组Caspase-9活性（P〈0．05），肌原纤维蛋白溶解性在1—8d对显著高于对照组（P〈0．05）。MFI在0．5—8d时显著高于对照组（P〈0．05）,蛋白质二级结构中试验组β-折叠在3d、5d、8d时显著高于对照组（P〈0．05）,无规则卷曲在1—8d时显著高于对照组（P〈0．05）,α-螺旋在0-8d时逐渐降低，H2O2促进ROS的形成,促进了宰后牦牛肉成熟过程中肌原纤维蛋白的降解,从而有利于肉的嫩化。

凋亡酶激活因子与p53及Ki-67在结直肠癌和结直肠腺瘤组织中的表达

目的探讨凋亡酶激活因子1(Apaf-1)、p53和Ki-67在结直肠腺瘤、结直肠癌组织中的表达情况。方法采用SP染色法,检测结直肠癌、腺瘤组织中Apaf-1、p53和Ki-67的表达情况。结果结直肠癌淋巴结转移组中,Apaf-1、p53、Ki-67阳性表达率分别为22.7%、31.8%和90.9%,无淋巴结转移组分别为43.6%、89.7%和61.5%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结直肠癌A、B期的Apaf-1、p53、Ki-67阳性表达率分别为43.6%、89.7%和61.5%,C、D期的Apaf-1、p53、Ki-67阳性表达率分别为27.7%、31.8%和90.9%。结直肠癌组织中Apaf-1阳性率(39.0%)低于腺瘤(88.0%),p53阳性率(77.0%)和Ki-67阳性率(68.0%)均高于腺瘤(分别为49.0%、26.0%),差异均有统计学意义(P<0.05)。Apaf-1阳性表达与p53、Ki-67阳性表达均呈负相关(r1=-0.358,r2=-0.361,P<0.01)。结论 Apaf-1、p53与Ki-67表达在结直肠癌、腺瘤的发生、发展与转移过程中有一定影响,对诊断结直肠癌有重要意义。

蛋白磷酸酶-1对凋亡酶-3水解的PAK2活性的负调控机制

p21激活的蛋白激酶2(PAK2)可以通过与小G蛋白Cdc42和Rac结合而激活,也可以通过凋亡酶-3(caspase-3)的水解作用而激活.PAK2的这2种激活方式都需要其402位苏氨酸残基(Thr-402)发生自磷酸化.对于PAK2激活的研究已经有近10年的时间,但PAK2活性的负调控机制仍然不清楚.本文采用酶活性不可逆改变动力学的方法研究了蛋白磷酸酶1催化亚基(PP1α)对凋亡酶-3(caspase-3)水解的PAK2活性的调控机制.根据在PP1α存在下PAK2的底物反应动力学方程,我们确定了游离酶和酶-底物复合物的微观失活动力学常数.结果表明:(ⅰ)PP1α可以直接使PAK2活化环上的Thr-402去磷酸化,从而下调PAK2的激酶活力;(ⅱ)外源蛋白或多肽底物结合在PAK2活性位点上可以降低PAK2自激活和失活的速度.本文所建立的方法不仅可以用于研究酶活性调节的修饰反应动力学,还可以研究底物对修饰反应的影响,为研究蛋白激酶和磷酸酶的作用机理奠定了理论基础.

细胞凋亡相关酶测定在肿瘤治疗中的价值

目的 研究细胞凋亡相关酶测定能否预测肿瘤治疗的效果及其临床应用价值。方法对30例各类肿瘤患者用草酸铂或健择、干扰素等为主的方案治疗,测定其治疗前后血清中细胞凋亡相关乙酰胆碱酯酶(AR-AChE)活性,根据测定结果预测治疗效果。随后与治疗1个疗程后评定的治疗效果做对比研究。结果 30例患者治疗后PR 9例,NC 18例(MR 4例),PD 3例。而酶活性测定预测有效12例,无效18例。其敏感性为92.3％,特异性为100％。结论 细胞凋亡相关酶测定方法简便快速,其敏感性和特异性高,有较大的临床实用价值。

凋亡酶激活因子与Ki-67在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨凋亡酶激活因子(APAF-1)与增殖细胞核抗原(Ki-67)在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法选取2018年5月至2019年9月本院收治乳腺癌患者58例。术中收集乳腺癌组织标本及距肿瘤边缘5 cm的正常乳腺组织标本,采用EnVision两步法免疫组化染色检测APAF-1、Ki-67蛋白表达水平;收集患者临床病理指标。结果乳腺癌组织中APAF-1蛋白阳性表达率为20.69%,明显低于正常乳腺组织中的68.97%;Ki-67蛋白阳性表达率为74.14%,明显高于正常乳腺组织37.93%;差异均有统计学意义(均P<0.01)。不同肿瘤直径、淋巴结转移情况、临床分期的乳腺癌患者APAF-1表达水平比较差异均有统计学意义(均P<0.01);不同淋巴结转移情况、临床分期的乳腺癌患者Ki-67表达水平比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。乳腺癌组织中APAF-1与Ki-67表达水平呈负相关(均P<0.01)。结论 APAF-1和Ki-67蛋白在乳腺癌组织中异常表达,以负反馈调节的形式参与乳腺癌的发生与发展,同时与临床病理特征密切相关。

术前血清凋亡蛋白酶激活因子-1、组织多肽特异性抗原水平与乳腺癌患者临床病理特征和预后的相关性分析

目的分析术前血清凋亡蛋白酶激活因子-1(apoptosis protease activating factor-1,Apaf-1)、组织多肽特异性抗原(tissue polypeptide specific antigen,TPS)水平与乳腺癌患者临床病理特征和预后的相关性。方法选择2014年7月至2016年6月重庆大学附属肿瘤医院收治的126例乳腺癌患者纳入乳腺癌组,另选取该院同期收治的80例良性乳腺肿瘤患者和120例乳腺增生患者分别纳入良性乳腺肿瘤组和乳腺增生组,采集三组患者术前外周静脉血,检测血清Apaf-1和TPS水平,并分析术前血清Apaf-1和TPS水平与乳腺癌患者临床病理特征的关系。乳腺癌患者术后均获得随访,统计其术后3年无瘤生存率,分析术前血清Apaf-1、TPS水平与乳腺癌患者预后的相关性。结果乳腺癌组患者术前血清Apaf-1水平均显著低于良性乳腺肿瘤组和乳腺增生组(均P<0.05),TPS水平均显著高于良性乳腺肿瘤组和乳腺增生组(均P<0.05)。术前血清Apaf-1、TPS水平与乳腺癌患者的月经状态、组织学分级、淋巴结转移数量均无相关性(均P>0.05),与肿瘤直径、腋窝淋巴结性质、临床分期、雌激素受体状态、孕激素受体状态、人表皮生长因子受体-2状态均有相关性(均P<0.05)。随访至2019年8月,126例乳腺癌患者术后3年无瘤生存率为75.40%(95/126);术前血清Apaf-1和TPS均为阳性的乳腺癌患者无瘤生存率均显著低于术前血清Apaf-1和TPS均为阴性患者(均P<0.05)。结论乳腺癌患者术前血清Apaf-1和TPS水平与其临床病理特征和预后均存在相关性,可作为评估病情和预后的指标。

过氧化氢酶过度表达对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞凋亡的影响。方法用含过氧化氢酶基因的重组腺病毒转染人血管平滑肌细胞,采用Westernblot方法检测血管平滑肌细胞过氧化氢酶的表达,应用流式细胞术、TUNEL法等方法检测血管平滑肌细胞的凋亡。结果含过氧化氢酶基因的重组腺病毒转染后血管平滑肌细胞过氧化氢酶表达明显增多;流式细胞术显示含过氧化氢酶基因的重组腺病毒组与对照组比较凋亡率明显增加(P<0.01)。经TUNEL分析显示,含过氧化氢酶基因的重组腺病毒组凋亡细胞明显多于对照组,两者之间有显著性差异(P<0.001)。结论腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染导致过氧化氢酶过度表达,促进人血管平滑肌细胞的凋亡,这可能是防治经皮腔内冠状动脉血管成形术后再狭窄的一种新方法。

肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ干预内皮细胞后细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶的表达

目的探讨肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ在导致内皮细胞凋亡过程中诱导型一氧化氮合酶的表达变化及核因子κB的作用。方法核因子κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐预处理和未预处理原代培养的脐静脉内皮细胞,用肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ分别进行干预,逆转录聚合酶链反应检测诱导型一氧化氮合酶mR-NA的表达,免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶和IκBα的蛋白表达,电泳迁移率分析检测核因子κB的活性,TUNEL法检测细胞凋亡。结果在10μg/L肿瘤坏死因子α和1μmol/L血管紧张素Ⅱ的干预下,核因子κB的活性显著增加(P<0.05),诱导型一氧化氮合酶mRNA和蛋白的表达与对照组比较显著增加(P<0.05),细胞凋亡发生显著增加(P<0.05);吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ引起的细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶表达的增加。结论在肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ作用于内皮细胞时,通过降解IκBα引起诱导型一氧化氮合酶的核转位,后者可引起诱导型一氧化氮合酶表达上调和细胞凋亡。

细胞凋亡对宰后肌肉嫩化作用机理的研究进展

嫩度是决定肉食用品质的重要指标。宰后肉的嫩度发生不连续变化,严重降低了消费者的购买意愿,因此阐明宰后嫩化机理一直是肉品科学领域的研究热点。自“凋亡”的概念引入至宰后肌肉嫩化过程后一直广受关注,动物被屠宰放血后,活性氧(reactive oxygen species,ROS)大量累积,ATP(adenosine triphosphate)逐渐耗尽,必然导致细胞死亡。宰后肌细胞死亡和肌肉嫩化都是在一系列调控因子作用下激活肌肉内源酶,并由内源酶水解蛋白质破坏细胞结构,因此这两个生化过程被认为高度相关。本文综述了宰后肌细胞主要以凋亡的形式死亡,分析了除凋亡外,宰后早期产生少量ROS时细胞会通过自噬启动自身防御系统,宰后后期ATP逐渐耗尽肌细胞可能从凋亡转变为坏死;明确了线粒体通路是宰后肌肉中细胞凋亡酶激活的关键路径,线粒体死亡因子释放是细胞内死亡级联反应的总开关,其开放状态直接决定着细胞以何种途径进行死亡,并进一步从线粒体膜通透化和内膜嵴重构两方面,讨论了宰后线粒体损伤诱导凋亡因子的释放机理;综述了线粒体损伤变化及其对嫩化过程的影响,并从线粒体通过参与能量代谢影响肌肉pH以及通过释放凋亡因子调控细胞凋亡酶活性两方面分析了其潜在机理;探讨了宰后肌肉线粒体与内质网间相互作用以影响Ca^(2+)信号传导以及细胞凋亡过程,或与溶酶体相互作用,破坏溶酶体膜稳定性,使其释放组织蛋白酶以激活线粒体Bax和Bid而加速线粒体膜通透性;综述了细胞凋亡酶在宰后早期被激活,并参与部分肌原纤维蛋白的有限降解,但随着宰后时间的延长,ATP逐渐耗尽等因素导致细胞凋亡酶失活,因此细胞凋亡酶只参与宰后早期的嫩化过程。综述内容可为完善宰后肌肉嫩化过程提供理论参考。

细胞凋亡对肌肉宰后嫩化的贡献

嫩度是肉品最重要的品质指标,而成熟是改善肉的嫩度的重要途径。肉成熟嫩化的原因普遍认为是肌细胞的细胞骨架降解造成的。目前,细胞骨架降解的机理研究方面报道较多的是钙激活酶系统、组织蛋白酶系统和蛋白酶体,而有关细胞凋亡酶在肉成熟中的作用国内外还鲜见报道。本文综述了宰后肌细胞内生理条件的变化,以及细胞可能选择的死亡方式,即凋亡;概述了能作为caspase酶家族底物的几类主要的肌细胞骨架蛋白;对常用的几类诱导细胞凋亡的细胞毒素进行了介绍;最后,对细胞毒素注射应用于宰后牛肉品质形成机理研究的潜在意义进行了探讨。

凋亡体与细胞凋亡

由细胞色素C(Cytochrome c,Cyt c)、ATP/dATP、凋亡酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)以及procaspase-9(caspase-9的前体)构成的约700 kDa、具有很强的caspase酶激活活性的大分子蛋白复合物——凋亡体(apoptosome),在哺乳动物线粒体凋亡途径和胚胎发育中至关重要。描述了凋亡体上各因子的结构、功能及其相互关系,线粒体介导的凋亡通路中凋亡体的形成及其调控。

细胞凋亡与病毒的抗细胞凋亡

病毒的侵入可引起机体宿主细胞的凋亡 ,细胞凋亡有利于机体清除感染的细胞 ,保护自身免受病毒的侵害 ,是机体对病毒侵入的防御机制之一。一些病毒具有许多抗细胞凋亡和抗CTL活性的机制 ,如编码免疫调节分子和凋亡调节分子 ,降低细胞凋亡基因的表达以延长感染细胞的存活期 ,以利于病毒的增殖。现对细胞凋亡及病毒抗细胞凋亡的机制进一综述。

双氢青蒿素诱导人前列腺癌细胞系PC-3凋亡

目的探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人前列腺癌细胞系PC-3的凋亡诱导作用,并探讨其可能机制。方法人前列腺癌PC-3细胞经不同浓度(0、25、50和100μmol/L)DHA处理48 h,用FCM法检测各组细胞凋亡率。用荧光定量PCR检测细胞中HSP70 mRNA的表达。用蛋白质印迹法检测细胞中HSP70蛋白、凋亡酶激活因子(Apaf-1)及caspase-3的表达;荧光定量PCR及蛋白质印迹法增加两组,即100μmol/L HSP70抑制剂槲皮素(quercetin)作为阳性药物对照组,以DMSO作为溶剂对照组。结果 DHA能明显诱导PC-3细胞凋亡(P<0.05)。不同浓度DHA能明显下调HSP70 mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),上调Apaf-1及caspase-3蛋白表达水平(P<0.05)。结论双氢青蒿素能诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡,其作用机制可能是DHA干扰HSP70的表达,促进caspase信号通路中Apaf-1及caspase-3表达。

pcsk9 siRNA对oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响

为研究pcsk9基因沉默后对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响,用不同浓度oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48h,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blot分别检测pcsk9 mRNA、NARC-1蛋白的表达.应用Lipofectamine 2000转染3对pcsk9 siRNAs进THP-1源性巨噬细胞中,筛选出最有效的siRNA再转染入THP-1源性巨噬细胞,24h后加入oxLDL处理48h,Hoechst33258染色观察细胞评价细胞凋亡,流式细胞术计数检测细胞凋亡率.结果发现,75mg/LoxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48h后,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞.同时RT-PCR、Western blot检测发现,pcsk9 mRNA和NARC-1蛋白质表达量均随oxLDL浓度的增加而增加,75mg/LoxLDL组增加最明显.不同浓度siRNA转染THP-1源性巨噬细胞后,RT-PCR筛选出3对siRNAs的终浓度为80nmol/L均可出现明显的沉默效应.选取此浓度在蛋白质水平检测基因抑制情况,筛选出最有效的一对siRNA.将筛选出来的siRNA转染细胞24h后,再用oxLDL处理48h,Hoechst33258染色及流式细胞计数结果显示,转染siRNA组凋亡明显被抑制.结果表明,在本研究的浓度范围内,随着oxLDL浓度增加pcsk9的表达随之增加,同时,THP-1源性巨噬细胞凋亡也明显增加,75mg/LoxLDL最明显,pcsk9 mRNA和蛋白质的表达也在该浓度最高.提示pcsk9 siRNA能有效抑制pcsk9基因的表达,从而有效抑制由oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞的凋亡.