腺病毒介导p21^(WAF1/CIP1)基因转移及诱导胃癌细胞凋亡

目的 :探讨 p2 1WAF1/CIP1基因 (p2 1基因 )过表达对人胃癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响 ,进一步了解p2 1基因对肿瘤细胞的治疗作用。方法 :通过腺病毒介导外源性p2 1基因转移到有 p5 3基因突变的人胃癌细胞系SGC 790 1,对 p2 1基因的表达、细胞生长的抑制与机制和对肿瘤模型的治疗效果进行分析。结果 :外源性 p2 1基因在靶细胞高水平表达显著抑制了胃癌细胞的生长和集落形成 ,流式细胞仪检测显示G1期阻滞并发生了凋亡。瘤内注射Ad p2 1对裸鼠体内移植瘤有一定抑瘤作用。 结论 :p2 1基因可能参与肿瘤细胞凋亡的诱导 ,使 p2 1基因在肿瘤的基因治疗 ,特别是在与其他凋亡诱导因子联合作用的方案中有更好的应用前景。

转染p21^(WAF1/CIP1)对肾癌细胞系GRC-1促凋亡作用

目的：研究转染p(21WAF1／CIP1)对肾癌的促凋亡作用．方法：采用脂质体介导的逆转录病毒载体将p21(WAF1／CIP1)转入无P21蛋白表达的肾癌细胞系GRC－1中，通过电镜、流氏细胞仪、DNA梯电泳检测细胞凋亡．结果：电镜检测到凋亡细胞，DNA电泳呈梯状．所检测细胞中15．3％出现凋亡．结论：p21(WAF1／CIP1)过表达有促进GRC－1细胞凋亡作用．

野生型p53基因诱导肝癌细胞凋亡及p21(WAF1/CIP1)蛋白过表达

目的：研究野生型ｐ５３基因对人肝癌细胞系细胞凋亡的作用。方法：通过脂质体转染方法将野生型ｐ５３基因（ｗｔ－ｐ５３）导入ｐ５３缺陷的ＨＣＣ－９２０４细胞系中，并获稳定表达。结果：转染ｗｔ－ｐ５３后细胞生长缓慢，Ｇ１期细胞数量由转基因前的４８．５％增加到７８．０％，并有较多细胞逐渐死亡。电镜观察和ＤＮＡ分析证实细胞死亡方式主要是细胞凋亡。免疫组化结果显示细胞转染ｗｔ－ｐ５３后，ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１的表达显著增加。结论：提示外源性野生型ｐ５３基因可以抑制肝癌细胞生长，并诱导细胞凋亡。

腺病毒介导的P21^(WAF1/CIP1)基因诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的 应用重组腺病毒载体介导的P2 1WAF1/CIP1基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,探讨P2 1WAF1/CIP1基因对平滑肌细胞凋亡的诱导作用。材料与方法 P2 1WAF1/CIP1的重组腺病毒载体转染体外培养的猪主动脉平滑肌细胞 ,应用RT PCR检测外源性P2 1WAF1/CIP1基因的表达 ,并通过细胞形态、原位细胞凋亡分析、流式细胞仪和细胞生长曲线等方法观察P2 1诱导VSMC凋亡 ,抑制VSMC增殖的情况。结果 P2 1WAF1/CIP1基因的重组腺病毒载体可以有效地转入平滑肌细胞中 ,诱导平滑肌细胞凋亡 ,并能显著地抑制平滑肌细胞增殖。结论 外源性P2 1WAF1/CIP1基因转移可以诱导平滑肌细胞凋亡 ,显著地抑制平滑肌细胞增殖。

共转染p53和反义p21^(WAF_1/CIP_1)基因对肾癌细胞凋亡调控作用的实验研究

目的 :探讨 p5 3基因在 GRC- 1肾癌细胞系中的作用途径和 p2 1 WAF1 /CIP1 在 wt-p5 3介导的细胞凋亡中的作用。方法 :使用脂质体共转染方法将 wt- p5 3与反义 p2 1 WAF1 /CIP1基因导入 GRC- 1肾癌细胞系中 ,对所获转染细胞进行细胞周期分析和阿霉素诱导细胞凋亡试验。结果 :在 wt- p5 3基因与反义 p2 1 WAF1 /CIP1 基因共转染后 GRC- 1肾癌细胞中 ,wt- p5 3基因的自发凋亡现象消失、亚致死量的阿霉素诱导下存活细胞数的增加。结论 :在 GRC- 1肾癌细胞中 ,wt- p5 3基因介导的细胞凋亡至少部分是通过 p2 1 WAF1 /CIP1 基因发挥作用。p2 1 WAF1

重组腺病毒介导P21^(WAF1/CIP1)诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的体外实验研究

目的 :研究基因转移P2 1WAF1/CIP1过量表达对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法 :构建缺陷型重组腺病毒载体 :在CMV启动子控制下的人p2 1cDNA(Ad P2 1) ,其编码人P2 1蛋白。通过流式细胞仪、RT PCR进行P2 1表达检测 ;应用TUNEL法、荧光显微镜和流式细胞仪进行相关凋亡检测、分析。结果 :RT PCR检测 5株亲本胶质瘤细胞表达p2 1cDNA ,而流式细胞仪未检测到P2 1表达 ;Ad P2 1转染的胶质瘤细胞株均过量表达P2 1;在体外通过细胞形态学、分子生物学等检测均证实Ad P2 1能诱导胶质瘤细胞向终末分化并诱导细胞凋亡。结论 :基因转移P2

反义p21^(WAF1/CIP1)基因转染对肾癌细胞凋亡抑制作用的影响

目的 探讨 p2 1WAF 1 /CIP1基因在顺铂诱导的 GRC- 1肾癌细胞凋亡过程中的作用 .方法 使用脂质体转染方法将正义 p2 1WAF 1 /CIP1基因及反义 p2 1WAF 1 /CIP1基因分别导入 GRC- 1肾癌细胞系中 ,对所获转染细胞进行形态学观察和流式细胞仪检测 .结果 在正义 p2 1WAF 1 /CIP1基因转染后 GRC- 1肾癌细胞中 ,顺铂诱导细胞凋亡的作用增强 ;在反义 p2 1WAF 1 /CIP1基因转染后 GRC- 1肾癌细胞中 ,顺铂诱导细胞凋亡的作用受到抑制 .结论 在 GRC- 1肾癌细胞中 ,顺铂诱导的细胞凋亡至少部分是通过 p2 1WAF 1 /CIP1基因发挥作用 .p2 1WAF 1

p21^(WAF1)基因介导诱发的人肝癌细胞系的细胞凋亡研究

目的研究外源性ｐ２１ＷＡＦ１基因超表达对ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞系的作用和意义。方法通过脂质体介导方式将带有人全长ｐ２１ＷＡＦ１ｃＤＮＡ和潮霉素抗性基因的真核表达载体ＰＣＥＰ转入肝癌细胞中，用潮霉素筛选后，酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法检测ｐ２１蛋白的表达情况，使用流式细胞仪检测细胞周期并判定有无细胞凋亡及程度。通过透射电镜进一步观察细胞的超微结构。结果ＥＬＩＳＡ法测定ｐ２１蛋白表达结果，对照组、空载体组和ＷＡＦ１组的吸光度（Ａ）值分别为０．１７５±０．０２、０．１８３±０．０３和０．３３±０．０４，提示转基因后ｐ２１蛋白量却明显增加（Ｐ＜０．０５）。流式细胞仪检测细胞周期表明Ｇ１期细胞显著增加，并在Ｇ１期前出现一凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数的２２．５％。透射电镜可见ＷＡＦ１组部分细胞体积缩小，细胞完整，有出芽现象，细胞器结构完整，致密的染色体边集于核膜内侧，呈明显的凋亡细胞的形态。结论本实验成功地将ｐ２１ＷＡＦ１基因转入到培养的肝细胞中，获得了稳定表达ｐ２１蛋白的细胞株；外源性ｐ２１ＷＡＦ１基因的超表达可引起肝癌细胞自发凋亡。通过对该基因的进一步研究可为肝癌防治提供理论依据。

鲨鱼软骨制剂诱导人肝癌细胞凋亡及p21^(WAF1)和PCNA表达调控的研究

目的 :探讨鲨鱼软骨制剂 (SCP)能否诱导 SMMC772 1细胞凋亡及其机制。方法 :以不同浓度 SCP加入体外培养的 SMMC772 1细胞中 ,用 MTT 比色法 ,荧光显微镜 ,琼脂糖凝胶电泳和免疫细胞化学方法 ,观察SMMC772 1细胞形态学 ,生化和基因表达的变化。结果 :SCP明显抑制 SMMC772 1细胞生长 ,IC5 0 值为 1mg/ m L,荧光显微镜下可见典型的凋亡细胞的形态学改变 ;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带 (DNA ladder) ;免疫细胞化学检测显示 p2 1WAF 1表达增强 ,PCNA表达减弱。结论 :SCP诱导 SMMC772 1细胞凋亡 ,使 p2 1WAF 1表达上调 ,PCNA表达下降 ,提示

丙戊酸钠诱导K562细胞周期阻滞和凋亡并上调p^21WAF1基因mRNA的表达

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对慢性粒细胞白血病急变期细胞株(K562细胞)细胞周期和凋亡的影响及其可能机制。方法:利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞周期和细胞凋亡情况;利用RT-PCR方法检测p21WAF1基因的mRNA的表达。结果:VPA引起K562细胞凋亡增加[(11.47±0.25)%vs(4.77±0.40)%,(P<0.05)]和细胞周期阻滞在G0/G1期[(82.30±9.41)%vs(40.13±2.12)%,(P<0.05)]。同时处理后的细胞中p21WAF1基因mRNA的表达增加[(1.65±0.91)vs(0.25±0.04),P<0.05]。结论:VPA可能通过上调p21WAF1基因,导致K562细胞周期阻滞并引起细胞凋亡。

人外周血淋巴细胞凋亡与年龄及p21^(WAF1)的关系

分别从老年人和新生儿外周血中分离淋巴细胞 ,用形态观察、DNA断裂电泳图谱、流式细胞仪分析凋亡峰等手段检测其在体外培养过程中发生凋亡的情况 .结果表明 ,不论是自发凋亡还是用1 0 mmol/L的丁酸钠诱导其凋亡 ,老年人淋巴细胞的凋亡率均高于新生儿组 .进一步检测淋巴细胞凋亡时 p2 1 WAF1的表达变化 ,结果表明老年人淋巴细胞 p2 1 WAF1的下调幅度明显大于新生儿组 .提示老年人淋巴细胞凋亡率高与其 p2 1 WAF1表达容易下调有关 .

p21^(WAF1)在丁酸钠诱导的人成纤维细胞凋亡中的表现

用丁酸钠 (NaBu)诱导了人胚肺二倍体成纤维细胞凋亡 (2BS) ,检测其诱导过程中凋亡相关基因的表达变化 ,结果表明 ,p2 1WAF1的表达在凋亡发生前即有明显下降 ,并持续至凋亡发生时 ,bcl 2的表达仅在凋亡发生时有所下降 ,c myc和c fos的表达有所上升 ,而 p5 3和HER 2的表达无明显变化 .用稳定转染了不同长度p2 1WAF1启动子片段和下游绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因的 2BS WP系列细胞进一步研究发现 ,其GFP的表达水平在NaBu诱导过程中下降 ,主要调控区域为 p2 1WAF1启动子的TATAbox上游 0～ - 80 0bp .说明NaBu诱导的人胚肺二倍体成纤维细胞凋亡与p2 1WAF1启动子的转录活性下降与密切相关 ,并且可能不依赖于p5 3.

视黄酸诱导胃腺癌细胞凋亡并上调P21/WAF1基因表达

目的 研究视黄酸 (RA)对胃腺癌MGC - 80 3细胞的作用及有关机制。方法 以荧光显微镜、透射电镜和电泳技术检测细胞凋亡 ,免疫组化检测细胞P 2 1/WAF 1蛋白表达。结果 RA处理的MGC - 80 3细胞发生凋亡特征性的改变 :细胞皱缩 ,核染色质凝集 ,边移 ,沿核膜内缘分布 ,呈帽形或半月形 ,亦可见凋亡小体的产生 ;基因组DNA沿核小体之间断裂 ,电泳得到凋亡特征性的DNA梯带 ;细胞P 2 1/WAF 1蛋白表达显著增高。结论 RA诱导胃腺癌MGC - 80 3细胞凋亡与其上调P 2 1/WAF

上调miR-21-5p对阿霉素诱导的心肌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨上调miR-21-5p表达对阿霉素(DOX)诱导的心肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究。方法:将心肌细胞H9C2分成control组(常规培养的对照细胞)、DOX组(用含1μmol/L DOX的细胞培养液培养)、NC agomir处理组(DOX+NC ago组)、miR-21-5p agomir处理组(DOX+miR-21-5p ago组)、NC antagomir处理组(DOX+NC anta组)、miR-21-5p antagomir处理组(DOX+miR-21-5p anta组)。实时荧光定量PCR法测定miR-21-5p的表达,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,western blotting测定细胞中C-Caspase-3、β-catenin、c-Myc蛋白表达。结果:与control组相比,DOX组中miR-21-5p水平降低,细胞增殖活性降低,细胞凋亡和C-Caspase-3蛋白表达水平升高,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平下降(P<0.05)。与DOX+NC ago组比较,DOX+miR-21-5p ago组中miR-21-5p水平升高,细胞增殖活性上升,细胞凋亡和C-Caspase-3蛋白表达水平降低,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平上升(P<0.05)。结论:上调miR-21-5p可促进DOX诱导的心肌细胞增殖,并通过Wnt/β-catenin信号通路抑制DOX诱导的心肌细胞凋亡,从而改善DOX诱导的心肌毒性作用。

TAM诱导MA782细胞凋亡与p21/CIPI的关系

目的 :探讨Tamoxifen(TAM )诱导ET( -)小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法 :TAM体外作用于MA782细胞 ,用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布 ,免疫组化检测p2 1/CIPI(以下简称p2 1)蛋白表达 ,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果 :6、10 μmol/LTAM在体外能明显抑制MA782细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,作用 2 4h细胞凋亡率分别为 7 0 4%、19 0 4% ,10 μmol/LTAM作用48h后细胞凋亡率从 19 0 4%上升到 5 1 2 7% ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。 2 μmol/LTAM作用于细胞72h后p2 1蛋白开始显著上升 ,而 6、10 μmol/LTAM作用不同时间后 ,p2 1蛋白表达有不同程度的上升 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 :TAM诱导MA782细胞凋亡其分子作用机制可能与上调p2 1蛋白表达有关。

TAM诱导MA782细胞凋亡及其对Cyclin D1、p21/CIP1表达的影响

将TAM体外作用于MA782细胞。采用MTT法检测细胞增殖活性;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布;采用免疫组化ABC法检测细胞Cyclin D1、p21蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析;采用RT-PCR法检测MA782细胞Cyclin D1 mRNA表达情况。结果显示TAM在体外能明显抑制MA782细胞生长,诱导细胞凋亡。TAM诱导后MA782细胞Cyclin D1 mRNA及蛋白表达下降,而p21蛋白表达上升(P均<0.01)。认为TAM诱导MA782细胞凋亡的机制可能与其下调Cyclin D1蛋白和mRNA表达及上调p21蛋白表达有关。

矮小症患儿的临床特征及重组人生长激素联合来曲唑对p21waf/cip1、25-OH-D水平的影响

目的探讨重组人生长激素(rh-GH)联合来曲唑治疗特发性矮小症(ISS)的临床价值及对患儿p21waf/cip1、25羟基维生素D(25-OH-D)水平的影响。方法选取86例ISS患儿,随机分为对照组与研究组,各43例;对照组给予rh-GH,研究组联合来曲唑治疗,疗程均为12个月。比较两组的骨龄、Ⅰ型胶原氨基酸延长肽(PINP)、预测终身高、p21waf/cip1、骨碱性磷酸酶(BALP)、25-OH-D、骨钙素(OC)、临床疗效及不良反应。结果研究组的疗效优良率(95.35%Vs 76.74%)高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组的骨龄、PINP、预测终身高、BALP、OC、p21waf/cip1蛋白、25-OH-D差异无统计学意义(P>0.05);治疗12个月后,研究组的PINP、骨龄、25-OH-D、OC、预测终身高大于对照组,研究组的p21waf/cip1蛋白、BALP小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组的总不良反应率(11.63%VS 6.98%)差异无统计学意义(P>0.05)。结论在rh-GH基础上联合来曲唑治疗ISS的疗效良好,能够有效改善患儿骨代谢指标与25-OH-D、p21waf/cip1水平,促进患儿身高增长与骨骼发育,提高患者终身高值。

Tamoxifen诱导MA782细胞凋亡与P21/CIP1、PCNA的关系

目的 探讨三苯氧胺 (TamoxifenTAM )诱导ER(- )小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法 TAM体外作用于MA782细胞 ,用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布 ,透射电镜观察细胞凋亡超微结构改变 ,免疫组化检测MA782细胞p2 1/CIP1、PCNA蛋白表达 ,并用病理图像分析软件进行半定量分析。 结果 6 μmol/L、10 μmol/LTAM在体外能明显抑制MA782细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,作用 2 4小时细胞凋亡率分别为 7.0 4 %、19.0 4 % ,10 μmol/LTAM作用 4 8小时后细胞凋亡率从 19.0 4 %上升到 5 1.2 7% ,与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 1)。 2 μmol/LTAM作用不同时间后 ,细胞上述蛋白无明显变化 ,而 6 μmol/L、10 μmol/LTAM作用不同时间后 ,PCNA蛋白表达有不同程度的下降 ,p2 1/CIP1蛋白表达有不同程度的上升与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 TAM诱导MA782细胞凋亡其分子作用机制可能与下调细胞PCNA蛋白表达及上调 p2 1/CIP1蛋白表达有关。

转染P21^(WAF1)基因对GRC—1肾癌细胞凋亡的影响

目的:建立GRC—1肾癌细胞凋亡模型并探讨P21WAF1基因对肾癌细胞凋亡的影响。方法:采用顺铂诱导法建立肾癌细胞凋亡模型及转染P21WAF1基因方法观察P21WAF1基因的作用。结果:①用20μmol顺铂诱导GRC—1肾癌细胞。建立了细胞凋亡模型,凋亡细胞占细胞总数为29.4％。②成功转染了P21WAF1基因至GRC—1肾癌细胞;③转染P21WAF1基因的GRC—1肾癌细胞,培养至第10代细胞加入20μmol顺铂后,凋亡细胞占细胞总数为75.6％。④凋亡细胞比率29.4％与75.6％之间存在显著性差异,P<0.01。结论:①成功建立了肾癌细胞凋亡模型;②转染P21WAF1基因对肾癌细胞凋亡有促进作用。

桂枝茯苓丸对荷瘤鼠P21^(waf/cip)基因表达的影响

目的探讨桂枝茯苓丸诱导肿瘤细胞凋亡的机制,为桂枝茯苓丸(GFW)开发应用提供实验依据。方法计算抑瘤率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫组化法测定P21waf/cip蛋白表达,原位杂交法检测Survivin mRNA表达,电镜观察肿瘤细胞超微结构。结果GFW抑瘤率为38.93%,流式细胞仪检测GFW组凋亡率17.79%,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。GFW上调肿瘤细胞P21waf/cip蛋白表达,下调Survivin mRNA表达。GFW组镜下可见瘤细胞以凋亡变化为主。内膜结构完好,核膜清晰,细胞核固缩,染色质团块状散布核内或边集核膜下,并可见凋亡小体。结论GFW诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与上调P21waf/cip及下调Survivin mRNA表达密切相关。