在直肠癌组织中检测细胞凋亡及c-erbB-2癌基因表达的意义

目的:探讨直肠癌细胞凋亡及c-erbB-2癌基因表达与直肠癌预后的关系。方法:应用免疫组化TUNEL及SP法对106例直肠癌进行细胞凋亡及c-erbB-2癌基因表达检测,并分别以已知阳性对照切片作为阳性对照。结果:不同分化程度直肠癌中,细胞凋亡及c-erbB-2的阳性率不同。分化程度高,则细胞凋亡率高;分化程度低,则c-erbB-2阳性率高。同时有细胞凋亡和c-erbB-2阳性表达的几率在低分化直肠癌中最高。结论:细胞凋亡及c-erbB-2可作为判定直肠癌预后的可靠指标。

c-erbB-2基因在维甲酸诱导前列腺癌细胞DU-145凋亡中的作用

目的 :克隆全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系DU - 1 4 5细胞产生凋亡的相关基因。探讨前列腺癌细胞产生凋亡的分子机理。方法 :应用全反式维甲酸诱导前列腺癌DU - 1 4 5细胞凋亡 ,采用基于PCR的改良消减杂交技术克隆与凋亡相关的基因。结果 :在前列腺癌DU - 1 4 5细胞凋亡过程中 ,克隆出包括c -erbB - 2基因在内的多个基因序列。结论 :全反式维甲酸诱导的前列腺癌细胞DU - 1 4 5凋亡有多基因参与其中 ,其中c -erbB - 2等基因与前列腺癌细胞凋亡关系密切。

大肠癌及癌旁组织中抑凋亡基因bcl-2和促凋亡基因bax的表达及意义

目的 研究抑凋亡基因bcl 2和促凋亡基因bax在大肠癌及癌旁组织中的表达及意义。方法 应用免疫组织化学S P法对 3 1例大肠癌患者的癌组织及距癌组织外缘 3cm内的癌旁组织和 3cm以远的正常大肠组织中bcl 2和bax基因的表达进行检测。结果 大肠癌及其癌旁组织中bcl 2蛋白表达阳性率分别为 64 .5 %和 60 .0 % ,显著高于正常组织 (3 5 .0 % ) ,P<0 .0 5 ;bax蛋白表达阳性率分别为 45 .2 %和 45 .0 % ,显著低于正常组织 (60 .0 % ) ,P<0 .0 5 ;大肠癌组织与癌旁组织中bcl 2和bax蛋白表达阳性率的差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。bcl 2和bax蛋白在大肠癌组织中的表达与其病理类型和临床分期无明显关系 (P>0 .0 5 )。结论 大肠癌及其癌旁组织中有不同水平的bcl 2蛋白过度表达和bax蛋白低表达 ,两者通过参与调节细胞凋亡而与大肠癌的发生有关 ,但与大肠癌的病理类型、临床分期无关。距大肠癌组织外缘 3cm以内的癌旁组织应视为癌前期组织 。

细胞凋亡过程中c-erbB-2基因的表达

据文献报道ｃ－ｅｒｂＢ－２可以介导细胞凋亡，为检验这一结论是否具有普遍性，用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠成纤维细胞ＮＣ３Ｈ１０，ＴＣ３Ｈ１０及人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７的凋亡．用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法检测ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达状况．结果显示：ｃ－ｅｒｂＢ－２基因表达在５－Ｆｕ作用６ｈ开始降低，１２ｈ降低更为明显．作用２４～４８ｈ出现细胞存活率下降，ＤＮＡ梯状断裂及细胞周期凋亡峰等凋亡典型现象．实验结果并不支持ｃ－ｅｒｂＢ－２可介导细胞凋亡的观点．该基因在细胞凋亡过程中有何作用尚待探讨．

下调PAR基因表达对前列腺癌PC3细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的:本研究以RNA干扰技术下调PAR(prostate androgen regulated)基因表达,探讨其对前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及其相关蛋白Bcl-2/Bax表达水平的影响。方法:PC3细胞转染靶向PAR基因的siRNA,MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:PC3细胞PAR基因表达水平下调,此时处于G2-M期的细胞增加,为(29.95±3.25)%;细胞凋亡率亦明显增加,为(20.61±2.73)%,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),同时Bcl-2蛋白表达下降,Bax表达水平升高,Bax/Bcl-2比值升高。结论:PAR基因表达下调可诱导细胞G2-M期阻滞和凋亡,其机制为抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达,同时促进Bax表达。

肝胆管癌中bcl-2、bax基因表达和细胞凋亡的研究

目的 探索细胞凋亡及相关基因在体内肝胆管癌发生中所起的作用。 方法 用mRNA原位杂交技术和免疫组织化学方法 ,检测了肝胆管癌中bcl 2和bax基因表达 ;利用TUNEL法检测其细胞凋亡 ; 结果 肿瘤中bcl 2表达增强 ,癌旁组织中bax表达增强 ,癌旁组织中凋亡细胞增加 ; 结论 bcl 2基因激活后 ,抑制bax的作用及基因表达 ,可能使细胞的增殖加快 ,肿瘤发生 ;

下调STC2基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨抑制斯钙素-2(stanniocalcin-2,STC2)基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法通过Lipofectamine TM2000脂质体介导法将siRNA阴性对照组和STC2-siRNA组转染人前列腺癌PC-3细胞,未转染的细胞作为空白对照组,48 h后收集细胞,Western bloting检测各组细胞中STC2的蛋白表达;CCK8及流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(pAKT)的蛋白表达。结果 STC2-siRNA转染PC-3细胞后STC2的蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05);阴性对照组细胞OD值及细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05),而STC2-siRNA组细胞OD值显著低于空白对照组,凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05);阴性对照组ki67、Bcl-2、Bax、PI3K和p-AKT蛋白表达与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05),STC2-siRNA组ki67、Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著低于空白对照组,Bax蛋白表达显著高于空白对照组(P<0.05)。结论 STC2基因表达的抑制可降低前列腺癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制与调节ki67、Bcl-2、Bax及PI3K/AKT信号通路表达有关。

沉默Gli2基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默胶质瘤相关癌基因同源蛋白2基因(glioma associated oncogene homolog 2,Gli2)对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:以重组shRNA-Gli2慢病毒感染SMMC-7721细胞,筛选沉默效果最佳干扰序列。以携最佳干扰序列重组慢病毒感染SMMC-7721细胞为干扰组,shRNA-NC慢病毒感染SMMC-7721细胞为对照组,不作处理SMMC-7721细胞为空白组。采用CCK-8法与集落形成实验检测各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率;用q PCR和Western blotting法检测各组细胞Gli2、cyclin D1、Bax和Bcl-2 mRNA及其蛋白质的表达。结果:重组慢病毒感染率约为90%,重组shRNA-Gli2-1慢病毒沉默效果最佳;干扰组SMMC-7721细胞Gli2 mRNA和蛋白质表达显著低于对照组与空白组(均P<0.05),而对照组与空白组之间Gli2 mRNA和蛋白质表达差异不显著(P>0.05)。干扰组SMMC-7721细胞的增殖和细胞集落形成数明显少于对照组和空白组(均P<0.05);干扰组SMMC-7721细胞凋亡率显著高于对照组和空白组(均P<0.01);干扰组SMMC-7721细胞cyclin D1及Bax mRNA和蛋白质表达显著低于对照组和空白组,而Bcl-2 mRNA和蛋白质表达则显著高于对照组和空白组(均P<0.05)。结论:沉默Gli2基因的表达能够抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡,其机制可能与cyclin D1、Bax的下调和Bcl-2上调有关。

胃癌组织bcl-2基因表达与细胞凋亡和增生的关系

目的:探讨胃癌细胞bcl-2基因表达水平与肿瘤细胞增生活性及细胞凋亡程度的关系. 方法:胃癌组织53例,用原位杂交及免疫组化染色法分别检测bcl-2 mRNA,bcl-2蛋白和增生细胞核抗原(PCNA) 的表达,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中的凋亡细胞进行观察和比较. 结果:胃癌组织表达bcl-2 mRNA 41例(77.4%),表达Bcl-2 蛋白43例(81.1%),X2检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性.胃癌53例增生期细胞标记物PCNA表达及凋亡细胞的阳性率均为100%,细胞凋亡和细胞增生指数呈显著性负相关(r=-0.993,P<0.01).随胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平升高,PCNA阳性细胞指数相应增加,肿瘤凋亡细胞指数则相应减少,Bcl-2蛋白+++组与++组间(t=2.552, 2.699,P<0.05)及前两组分别与-组和+组间(t=4.487, 3.975,2.807,3.094,4.885,5.816,3.404,3.895, P<0.01)凋亡和增生细胞指数差异均有显著性. 结论:胃癌细胞bcl-2基因高表达可引起细胞凋亡减少与过度增生.

口腔癌凋亡相关基因bcl-2、bax表达的初步研究

目的 探讨凋亡相关基因 bcl- 2及 bax基因在口腔癌的表达情况。 方法 6 0例口腔癌的组织切片标本。bcl- 2单克隆抗体、bax多克隆抗体 ,SP免疫组织化学染色法。 结果 6 0例中 ,bcl- 2阳性率为 6 8.33% ;bax阳性 36 .6 7%。颈淋巴结转移组的阳性率为 38.71% ,无颈淋巴结转移组的阳性率为 34.48% (P>0 .0 5 )。病理分级中 ,高分化组的 bax阳性率为 6 0 % ,中分化组为 41.6 7% ,低分化组为 17.86 % ,高中分化组与低分化组差异有显著性(P<0 .0 5〉。 结论 bcl- 2和 bax在分化较好的早期肿瘤细胞中表达较多 ,随着分化程度的降低 ,bcl- 2及

三氯乙烯对CYP1A2高表达肝细胞株凋亡基因和癌基因的影响

目的:构建CYP1A2基因高表达载体,转染到L02肝细胞,建立CYP1A2高表达细胞株并检测三氯乙烯对该细胞株凋亡基因和癌基因的影响。方法:根据GenBank提供的CYP1A2基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒高表达载体pLVX-acGFP1-C1中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到CYP1A2高表达L02细胞株,通过荧光定量PCR和Westernblot对细胞株进行鉴定。用不同剂量三氯乙烯对正常L02肝细胞和CYP1A2高表达细胞进行染毒12h,采用PCR方法检测凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)mRNA表达的变化。结果:测序证明重组慢病毒高表达载体CYP1A2基因序列与GenBank提供的CYP1A2序列一致,荧光定量PCR检测显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2mRNA表达比正常L02肝细胞提高317倍,Westernblot结果显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2蛋白表达水平比正常L02肝细胞高3.41倍。三氯乙烯染毒后,CYP1A2高表达细胞中凋亡基因Bcl-2mRNA表达水平与正常肝细胞无显著性差异(P>0.05),而Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9mRNA表达水平高于正常肝细胞(P<0.05或P<0.01)。CYP1A2高表达细胞中癌基因c-myc和p53mRNA表达水平低于正常肝细胞(P<0.05或P<0.01),而c-fos和K-rasmRNA则高于正常肝细胞(P<0.05或P<0.01)。结论:三氯乙烯对CYP1A2高表达细胞凋亡基因和癌基因表达有显著影响,提示CYP1A2是三氯乙烯在体内代谢的重要因素,与三氯乙烯毒性存在一定关系。

凋亡相关基因Fas、FasL和bcl-2在膀胱移行细胞癌中的表达

目的 研究凋亡相关基因Fas、FasL和bcl-2 ,在膀胱移行细胞癌 (TCC )中的表达情况 ,并探讨其临床意义。方法 采用S -P免疫组化方法 ,检测 67例TCC及 12例正常膀胱组织中Fas、FasL和bcl -2蛋白的表达。结果 在TCC和正常膀胱组织中FasL蛋白阳性率分别为 5 6.7%和 0 ,两者有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ,而Fas和bcl -2蛋白在TCC和正常膀胱组织中的表达无显著性差异 (P >0 .0 5 )。Fas和bcl -2蛋白表达阳性率在TCC不同病理分级、分期有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。FasL蛋白表达随着TCC分级、分期的增加 ,呈降低趋势 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 Fas/FasL系统异常可能是TCC发生发展过程中免疫逃逸的重要因素 ;在TCC发生以及在低分化和浸润性TCC中 ,Fas/FasL基因介导的细胞凋亡可能被bcl -2基因的过度表达所抑制 ;Fas和bcl

抑凋亡基因Bcl-2在正常子宫内膜和子宫内膜癌中的表达及意义

为探讨抑凋亡基因Ｂｃｌ－２与子宫内膜癌发生发展及预后的关系，用ＡＢＣ免疫组化法对４０例正常子宫内膜和６０例子宫内膜癌Ｂｃｌ－２蛋白表达状况进行检测。结果发现Ｂｃｌ－２表达在正常子宫内膜中呈周期性变化，其表达由增生早期开始逐渐增强，到增生晚期表达最强，进入分泌期则减弱乃至消失。子宫内膜癌中Ｂｃｌ－２表达水平远远低于增生期内膜Ｂｃｌ－２表达水平，且表达于预后较好的腺棘癌、乳头状腺癌、单纯腺癌组织，而浆液性腺癌和鳞癌组织中则无表达；分化程度低、期别晚者，Ｂｃｌ－２表达弱（Ｐ＜０．０１）；在５例伴有内膜增生过长的内膜癌中，增生过长内膜的表达明显强于癌组织和增生期内膜的表达。由此推测Ｂｃｌ－２高表达可能在子宫内膜增生过长的发生中起着重要作用，而内膜癌中Ｂｃｌ－２表达明显减弱，其作用仍待深入研究。Ｂｃｌ－２的高表达可提示预后较好。

细胞凋亡控基因p53、bcl-2、c-myc在大肠腺癌-癌序列中的表达

目的 研究细胞凋亡的调控基因p53、bcl-2、c-myc在大肠粘膜癌变中的作用。方法 利用免疫组织化学SP法对30例大肠腺瘤(伴轻、中、重度异型增生各10例)和30例大肠癌的活检组织标本分别进行p53、bcl-2、c-myc蛋白表达的检测,同时采用15例正常大肠粘膜作为对照。结果 (1)正常黏膜、腺瘤和腺癌的p53蛋白表达率为6.7％、40%和73.3%。三组间有显著的差异(P均<0.05)。(2)正常粘膜、腺瘤和腺癌的bcl-2蛋白表达率分别为20％、73.3％和63.3%。腺瘤和腺癌组均高于正常对照组(P均<0.01),腺癌与腺癌组间差异不显著(P>0.05)。(3)正常粘膜、腺癌和腺癌的c-myc蛋白表达率分别为26.7%、60%和76.7%。腺瘤和腺癌组均高于正常对照组(P<均0.05),腺瘤与腺癌组间差异不显著(P>0.05)。结论 (1)bcl-2基因可能通过对细胞凋亡的抑制而在大肠的早期发生作用。(2)p53基因突变在腺瘤化为腺癌的过程中起作用。(3)c-myc基因的表达与细胞增生和肿瘤发生可能关。

上调HCCR-2基因表达对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的利用细胞转基因技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法经脂质体介导将含有HCCR-2真核表达质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及Western blot鉴定;Western blot检测阳性细胞克隆Bcl-2、Bax蛋白表达改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果成功建立高表达HCCR-2的阳性MCF-7细胞克隆(M-23),并证实其Bcl-2蛋白表达与细胞增殖活性均显著增高,而Bax蛋白表达与细胞凋亡显著降低。结论上调MCF-7细胞HCCR-2基因后,细胞增殖活性增加,细胞凋亡降低,其作用机制与Bcl-2表达增加而Bax表达降低。

肝癌细胞凋亡相关基因bcl-2及bax的表达意义

目的 :探讨凋亡抑制基因和凋亡促进基因bax表达与肝癌生物学行为的关系及对肝癌预后的关系。方法 :用免疫组化LSAB法测定 40例肝癌细胞和 16例正常肝组织的bcl -2和bax蛋白表达水平。结果 :bcl -2及bax蛋白表达率在正常肝组织及肝细胞癌分别为 12 5 %、45 0 %、87 5 %、5 2 5 % ,两组间差异有显著性 (P <0 0 5 )。bcl-2、bax蛋白表达与肿瘤病理分级、分期、淋巴结转移及患者预后相关。结论 :bcl-2和bax蛋白的表达参与了肝癌的发生及进展 ,并存在相互作用的关系。bcl -2蛋白表达在肝癌有独立预后价值。

凋亡相关基因Bcl-2在喉鳞状细胞癌中的表达

喉癌是较常见的头颈部恶性肿瘤之一.喉癌绝大多数是鳞状细胞癌,约占全部喉恶性肿瘤的93%～99%[1].