利用肺癌特异性结合多肽ZS-6筛选肺癌相关标志物

目的利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-6从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法以生物素标记的十二肽ZS-6为探针,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过四轮减性筛选后,挑取与ZS-6特异性结合的噬菌体单克隆、扩增、纯化,再通过PCR技术扩增、产物纯化后,进行DNA测序,测序结果经过生物信息学分析。结果筛选出18个与ZS-6特异性结合的噬菌体克隆,测序结果显示其中1个为未知功能的新基因,其余的均已确定为肿瘤相关基因。结论从人类肺癌cDNA噬菌体展示文库中筛选出潜在的肺癌肿瘤标志物,为肺癌的早期诊治奠定基础。

基于特异性结合多肽ZS-1的肺癌新肿瘤标志物的筛选

目的:利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-1(EHMALTYPFRPP)从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,并进行初步确认,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法:本实验以ZS-1为探针,通过将偶联生物素的多肽ZS-1固化在亲和素处理的酶标板,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过三轮减性筛选后,挑取与ZS-1特异性结合的噬菌体单克隆、扩增、纯化,再通过PCR技术扩增、产物纯化后,进行DNA测序,测序结果经过生物信息学分析,随后采用组织芯片技术对相关生物大分子进行了检测。结果:通过生物信息学分析首次发现与ZS-1结合的肺癌细胞膜受体蛋白为KIAA1199,随后以KIAA199抗体检测人肺癌组织芯片证实,KIAA1199的阳性检出率为32.8%。结论:从人类肺癌cDNA噬菌体展示文库中筛选出潜在的肺癌肿瘤标志物KIAA1199,为肺癌的早期诊治奠定基础。

肺癌特异性结合多肽的体外筛选和鉴定

目的应用噬菌体随机肽库技术筛选出与肺癌细胞特异性结合的多肽。方法以人肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,人胚肺细胞MRC-5为吸附细胞,对噬菌体随机12肽库进行3轮全细胞减性筛选后,随机挑取噬菌体克隆进行ELISA鉴定;对亲和力较高的阳性克隆进行DNA测序并翻译为氨基酸序列;化学合成异硫氰酸荧光素标记的多肽(FITC-ZS-5),采用细胞和组织免疫荧光法鉴定FITC-ZS-5与肺癌细胞的亲和力及特异性。结果通过3轮减性筛选后,与NCI-H1299细胞结合的噬菌体克隆得到有效的富集;ELISA结果显示5号克隆对NCI-H1299细胞亲和力最高,将其命名为Phage ZS-5;测序结果显示Phage ZS-5所表达的多肽序列在国内外均未见报道,细胞及组织免疫荧光实验结果显示FITC-ZS-5对肺癌细胞及组织具有较高的亲和力和特异性。结论应用噬菌体随机肽库技术筛选到肺癌靶向性多肽ZS-5,为肺癌的靶向治疗和诊断奠定基础。

从噬菌体随机肽库中筛选及鉴定肺癌特异性多肽

目的利用Phage display随机肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,并通过ELISA和免疫组化鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二肽库进行四轮减性筛选,挑取单克隆、扩增纯化噬菌体、并经ELISA初步鉴定噬菌体克隆亲和力;对阳性克隆提取质粒,测序后合成多肽,多肽标记荧光素FITC,以其在肺癌组织芯片上鉴定多肽的亲和力及特异性。结果经ELISA初步鉴定,随机挑选的18个单克隆中,其中3号对NCI-H1299亲和力最高,将其命名为PhageZL-3。细胞免疫荧光试验进一步证明,荧光素标记的多肽FITC-ZL-3对NCI-H1299具有高亲和力。结论利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞具有较高亲和力的多肽ZL-3,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。

噬菌体随机肽库淘选肺癌细胞NCI-H1299特异性结合多肽

目的利用噬菌体展示肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二肽库进行三轮减性筛选,挑取单克隆ELISA初步鉴定噬菌体克隆亲和力;阳性克隆提取质粒,测序后合成多肽,鉴定多肽的亲和力及特异性。结果经ELISA初步鉴定,随机挑选的20个单克隆中,其中6号对NCI-H1299亲和力最高,将其命名为PhageZS6。细胞免疫荧光试验进一步证明,合成的相应多肽FITCZS6对NCI-H1299具有高亲和力。结论利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞具有较高亲和力的多肽ZS6,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。

乳腺癌干细胞新型多肽标志物的筛选

目的:从噬菌体随机十二肽库中筛选出能够与乳腺癌干细胞(breast cancer stem cell,BCSC)特异性结合的噬菌体,筛选后提取多肽以研究其与BCSC的亲和力和特异性。方法:通过"无血清-有血清"交替培养法培养人乳腺癌MCF7和MDA-MB-231细胞系,以求最大化富集BCSC,将hs578bst正常人乳腺细胞和普通培养的乳腺癌细胞用作减性筛选细胞,筛选噬菌体随机肽库;然后根据筛选结果选取阳性噬菌体进行单克隆扩增并测序,得到测序结果后依据合成多肽,标记以FITC;最后,建立乳腺癌动物模型,并在体外观察合成多肽与BCSC结合的特异性。结果:经过3轮筛选,噬菌体富集约200倍;随机选出10株单克隆噬菌体,与BCSC共同培养,其中与MCF7和MDA-MB-231乳腺癌干细胞阳性结合的噬菌体数目分别为6株和8株;分别从中选取1个阳性噬菌体进行测序,合成多肽后分别命名为A3和B8;多肽A3特异性结合MCF7乳腺癌干细胞,同时多肽B8特异结合MDA-MB-231乳腺癌干细胞。结论:噬菌体随机肽库可成功筛选出能够特异性结合BCSC的多肽,为BCSC的靶向治疗和进一步研究奠定了理论基础。

噬菌体展示肽库在乳腺癌血清肿瘤标志物筛选中的应用

目的用噬菌体随机12肽库对乳腺癌患者的血清进行差异性筛选,以获得乳腺癌特异性的新的肿瘤标志物。方法对噬菌体随机12肽库进行三轮差异性筛选,用ELISA法测定噬菌体克隆对乳腺癌患者血清结合的特异性。结果经过三轮筛选,噬菌体富集率逐轮递增,经47例乳腺癌患者和正常人血清的ELISA法检测验证,获得一株与乳腺癌患者血清特异较好的噬菌体,经DNA测序和推导,其短肽序列为短肽(QVSAEHKVQGFW)。结论成功筛选到能与乳腺癌患者血清高亲和力特异结合的12肽序列,为今后研究乳腺癌肿瘤标志物奠定了基础。

肝癌特异性噬菌体多肽的筛选和初步鉴定

目的利用噬菌体展示肽库筛选与肝癌HepG2细胞特异性结合的多肽，为筛选及明确新的肝癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肝癌细胞HepG2为靶细胞，LO-2为吸附细胞，在37℃条件下对噬菌体随机12肽库进行多轮减性筛选，挑取单克隆扩增并鉴定。利用ELISA初步鉴定克隆亲和力，测定阳性克隆DNA测序并进行同源性及氨基酸分析。结果经过3轮减性筛选发现，随机挑选的30个单克隆中，其中ZS-9对HepG2具有较高亲和力，氨基酸测序结果表明，该序列与美国国立生物技术信息中心（NCBI）GenBankDNA序列数据库和SwissProt蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性，而且，国内外文献均未见报道，表明笔者筛选到一新的肝癌相关抗原的配体。结论利用噬菌体随机12肽库成功筛选到与肝癌细胞HepG2具有较高亲和力的多肽，为筛选鉴定新的肝癌特异的标志物奠定工作基础，也为肝癌的早期诊断和靶向治疗进一步研发确定了靶标。