多组分重组减毒沙门疫苗菌对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用

目的 利用人类幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染的小鼠模型研究多组分重组减毒沙门疫苗菌对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用。方法 将二级C5 7BL/ 6小鼠随机分成 6组 ,通过灌胃方法分别给予生理盐水 (A组 )、PBS(B组 )、减毒鼠伤寒沙门菌SL32 6 1(C组 )、重组减毒鼠伤寒沙门菌pTrc99A -ureB +pGSTag -katA(D组 )、重组减毒鼠伤寒沙门菌pTrc99A -ureB +pTrc99A -HPaA(F组 )及重组减毒鼠伤寒沙门菌 pTrc99A -ureB +pGSTag -katA +pTrc99A -HPaA(F组 )。免疫后 4周 ,予Hp进行攻击 (A组不攻击 )。攻击菌量 10 7CFU/只 ,灌胃 2次 ,每日 1。再 4周后处死动物 ,取胃组织分别行尿素酶试验、改良Giemsa染色及定量细菌培养 ,观察Hp定植情况。行HE染色观察胃粘膜组织炎症情况。取脾组织行淋巴细胞增殖试验。结果 A组小鼠Hp定植密度为 0 ,B组为 9 4 9× 10 6CFU/ g胃组织 ,C组为 1 4 2× 10 6CFU/ g胃组织 ,D组、E组和F组小鼠分别为 2 92× 10 5CFU/g、5 5 1× 10 5CFU/g和 2 16× 10 5CFU/g胃组织 ,C组、D组、E组和F组与A组和B组相比定植密度均明显降低 (P <0 0 5 )。免疫组与对照组胃粘膜均无明显炎症反应。免疫组脾淋巴细胞增殖试验阳性。结论 口服多组分重组减毒沙门疫苗菌对小鼠Hp感染具有一定免?

表达ureB/hlyE融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌预防幽门螺旋杆菌感染

目的:建立表达幽门螺杆菌(H pylori)尿素酶B亚单位(UreB) 与血溶素E(hlyE)融合蛋白的减毒沙门疫苗菌,并利用H pylori小鼠感染模型,研究该疫苗菌对H pylori感染的免疫保护作用. 方法:利用分子克隆技术构建携带ureB/hlyE融合基因的重组原核表达质粒pTrc99A—ureB/hlyE,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与GeneBank中相关序列进行同源性比较.pTrc99A—ureB/hlyE转化减毒伤寒沙门菌SL3261, 培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定.表达的UreB/hlyE融合蛋白SDS—PAGE电泳和Western-blotting 进行鉴定,薄层扫描分析蛋白含量.实验小鼠随机分成4组, 分别灌胃给予生理盐水组、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261组、携带pTrc99A—ureB的SL3261组、携带PTrc99A—ureB/hlyE 的SL3261组.免疫后4 wk,予H pylori 107 CFU/只进行攻击(生理盐水组不攻击).攻击4wk后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察H pylori定植情况. 结果:核苷酸序列测定及同源性分析证实,原核表达质粒pTrc99A—ureB/hlyE中所含的H pylori—ureB及hlyE基因与GeneBank中的H pylori-ureB和hlyE基因同源性分别为97.42% (1 663/1 707)、99.78%(910/912).重组减毒沙门氏菌可表达约100 ku的融合蛋白UreB/hlyE,含量占全菌体蛋白含量的15%;表达的融合蛋白能与小鼠抗H pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性.动物实验证实,疫苗组同空白对照组和SL3261组相比,H pylori定植密度明显下降,有显著性差异(P<0.05).表达UreB/hly蛋白的疫苗株组同表达UreB蛋白的疫苗株相比,H pylori定植密度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05). 结论:重组疫苗菌对小鼠H pylori感染具有一定免疫预防作用,hlyE可以增强疫苗株的免疫保护效果.

表达鼠精子受精素β的减毒沙门菌疫苗株的构建

目的 构建表达鼠精子抗原受精素 β亚单位 (Fβ)的可口服减毒沙门菌活疫苗株。 方法 通过酶切从克隆载体TOPO中获得FβcDNA片段 ,将其插入表达载体PYA314 9中 ,构建重组质粒pFFL ,将该重组质粒转入鼠沙门伤寒杆菌疫苗株X4 6 32 ,获得重组菌株X4 6 32 (pFFL) ,行Westernblot分析及初步毒性试验。 结果 此无抗药性的重组菌株X4 6 32 (pFFL)可稳定表达被Fβ 抗体识别的重组Fβ 蛋白 ,口服该菌株无明显毒性作用。 结论 该疫苗株的构建为研究以Fβ 为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础 ,值得进一步行诱导免疫观察。

幽门螺杆菌ureB及ureB-hspA融合基因在减毒鼠伤寒沙门菌中的表达及小鼠的免疫应答

目的 构建H .pyloriureB单基因及ureB和hspA融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗候选株 ,并进行初步的免疫原性分析。方法 将H .pyloriureB单基因及ureB和hspA融合基因分别克隆入pTrc99A asd质粒的多克隆位点之内。挑取单菌落质粒鉴定后 ,分别将其电击经中间宿主X3730转入最终宿主X4 0 72 ,SDS PAGE和Westernblot检测蛋白表达。将疫苗候选株经口或鼻免疫BALB c小鼠。结果 疫苗候选株能够分别表达出相对分子质量 (Mr)为 6 4× 10 3的UreB蛋白及 77× 10 3的UreB HspA融合蛋白。在免疫BALB c小鼠的肠液和血清中可以分别检测到针对H .pylori的特异性分泌型IgA和IgG抗体。结论 构建了能够表达幽门螺杆菌UreB及UreB HspA融合蛋白的活菌疫苗候选株 ,为探索制备H .pylori口服活菌疫苗奠定了基础。