甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)快速繁殖株不同代次全基因序列比较

为探索甲型肝炎减毒活疫苗 (H2株 )细胞适应的分子机制 ,将甲型肝炎减毒活疫苗毒株(HAVH2K7)在人胚肺二倍体细胞KMB17上快速连续系列传代增强适应 ,繁殖周期由原来的 2 8d缩短为 14d ,连续传代后抗原滴度和感染性滴度不断增加 ,传至 2 2代抗原滴度达 1∶10 2 4 ,感染性滴度lgCCID50 (每ml)为 7 83 .分别将第 6代和第 2 2代病毒用AC PCR法和PCR法扩增 .扩增片段分别与pGEM T载体连接得到重组质粒 ,测定cDNA插入片段的序列 .对 2个不同代次全基因序列及氨基酸序列比较分析表明 ,HAVH2K7适应至第 6代时 ,整个基因组有 6个核苷酸变异 ,全部位于编码区内 ,变异率为 0 0 7% ,导致 3个氨基酸变化 ,分别位于VP2 (A S) ;2C(N H) ;3A(R C) .适应至第 2 2代时 ,整个基因组出现 18个核苷酸突变 ,变异率为 0 2 4 % ,13个是该代次产生的 ,变异最大区域 5′端非编码区 (5′UTR)有 5个核苷酸变异 .编码区突变导致 7个氨基酸变化 ,其中 4个氨基酸变化是该代次在 6代基础上特有的变异 (2C ,Q P ;3A ,A S ;3C ,T A ;3D ,V G) .2C区是编码区变异最多区域 ,共有 4个核苷酸突变 ,在 6代变异基础上出现 3个新突变 ,导致 1个氨基酸变异 .说明 5′UTR的2C区变异对病毒的翻译效率、感染性滴度提高具有重要作用 .

长47株麻疹减毒活疫苗纯化毒种三级种子批的建立及疫苗的临床观察

目的:建立长47株麻疹减毒活疫苗纯化毒种三级种子批;进行疫苗的临床观察.方法:将长47株麻疹减毒活疫苗毒种从26代连续传代至38代,其中27代定为原始种子批;29代定为主种子批;30～38代定为工作种子批.将不同代次的毒种制备疫苗,接种麻疹易感儿童,观察麻疹抗体的阳转率及GMT值.结果:新建立的长47株麻疹减毒活疫苗纯化毒种三级种子批,符合<中国生物制品规程>2000年版的要求.27代、32代疫苗的阳转率均为100%,GMT值分别为56.3、44.2.结论:新建立的长47株麻疹减毒活疫苗纯化毒种三级种子批,可作为制备麻疹减毒活疫苗的种子批.长47株麻疹减毒活疫苗毒种具有良好的免疫原性及安全性.

水痘减毒活疫苗(VZV84-7株)病毒培养时间优化

目的：优化水痘减毒活疫苗（VZV84-7株）的病毒培养时间.方法：按固定MOI区间0.001～0.01感染细胞;从病毒培养70h起,以5h为间隔分5组收获病毒,采用蚀斑法对病毒收获物进行病毒滴定,通过比较,获得滴度较高病毒收获物的培养时间;再根据此时间以1h为间隔分5组进行实验,用显微镜观察记录病变量及病变细胞情况,采用蚀斑法测定病毒收获物滴度.结果：病毒培养70～90h时,随病毒培养时间的延长,病变量和病毒收获物滴度出现先升高后降低的现象,分别在培养80h和85h时获得较高滴度的病毒收获物;病毒培养82～86h时,病变量和病毒收获物滴度差异不明显.结论：病毒培养时间在82～86h间能获得滴度较高的病毒收获物.

S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗对山羊免疫效果比较试验

通过对36只不同日龄、不同性别的健康山羊（含妊娠母羊6只）随机平均分组，分别口服S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗后，在7d、14d、21d、42d、90d对血液中布氏杆菌抗体进行检测，对S2、M5诱导的抗体消长动态进行分析及疫苗安全性评价，最终研究确定出S2可适用于不同日龄、不同性别山羊广泛使用，也适用于妊娠期间山羊的免疫，能有效预防布病的发生，减少由此导致的经济损失；M5可引起妊娠母羊免疫副反应及严重的流产症状。

Oka株水痘减毒活疫苗流行病学保护效果Meta分析

目的评价Oka株水痘减毒活疫苗(Oka Strain Varicella Attenuated Live Vaccine,VarV)的保护效果。方法电子检索《美国国立生物信息中心数据库》、《中国生物医学文献数据库》、《中国期刊全文数据库》、《万方全文数据库》,将有关接种1剂Oka株VarV保护效果的研究纳入分析。使用RevMan4.2.10软件进行统计分析。结果共纳入15篇文献,8项研究为随机对照试验(Randomized Controlled Trial,RCT)/半(Semi)RCT(sRCT),7项为应急免疫后效果观察。Oka株VarV总体保护率为73%[95%可信区间(Confidence Interval,CI)为51%～85%],RCT/sRCT设计保护率为87%(95%CI:55%～96%),应急免疫保护率为46%(95%CI:16%～65%)。结论 Oka株VarV具有良好的保护效果。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)诱导的人体特异性细胞免疫应答

目的了解接种冻干甲型肝炎（甲肝）减毒活疫苗[Hepatitis A（Live）Vaccine，Freezedried；Hep A]后，机体能否产生特异性细胞免疫应答。方法研究对象经HepA（H2株）1剂次免疫，流式法检测淋巴细胞亚群CD2^＋、CD4^＋、CD8^＋的百分率及表达干扰素（IFN）-γ及白细胞介素（IL）-4的阳性细胞百分率；T淋巴细胞的特异性增殖试验（MTT法）检测T淋巴细胞增殖反应；酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测淋巴细胞的IFNγ分泌能力。结果接种后2周，CD^＋上升，以4周上升为显著，与接种前相比，差异有显著的统计学意义（t=2．571，P〈0．05）；接种后4周～3个月，淋巴细胞对特异性刺激物甲肝病毒的反应都有明显增强，与接种前相比，差异均有非常显著的统计学意义（t=3．215～3．959，P均〈0．01）；接种后2周，表达IL-4和IFN-γ的阳性细胞百分率上升，以IL-4为明显，与接种前相比，差异有显著的统计学意义（t=2．197，P〈0．05）；接种后3年，用ELISPOT法检测IFN-γ，阳性率为57．1％（8／14）。结论接种HepA（H2株）后，机体能有效地产生特异性细朐免疫席答。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗SA_(14)-14-2弱毒株的表型和基因型特性及其稳定性

自 198 9年以来 ,流行性乙型脑炎 (乙脑 )减毒活疫苗在国内已广泛应用于乙脑的预防接种 ,在约 1 5亿人群的接种观察中未发现与疫苗相关的病例报告。乙脑SA14 14 2减毒株的表型和基因型特征及其通过体内外传代后的表型和基因型稳定性表明 ,乙脑SA14 14 2减毒株具有弱毒群体均一 ,无温度敏感 (Ts) ,对小鼠、猴子脑内接种不致病 ,经细胞回传 17代或鼠脑传 5代后无返祖 ,以及在基因序列上核苷酸发生多部位 (5 7～ 6 6个 )突变导致 2 4～ 31个氨基酸替代 ,经细胞传代后保持稳定、无回复突变等主要特征。综述分析认为 ,上述SA14 14 2减毒株的这些表型和基因型特征 ,是疫苗接种后对人体高度安全的相关基础 ,结合该疫苗对人体的高免疫性 ,SA14 14

安徽省Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒衍生株病例调查分析

目的 了解发生在安徽省 2 0 0 2年 3例Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒衍生株 (VDPV)引起的病例的流行病学特征和临床表现。方法 病例个案调查。结果 3例分布在相距较远的农村地区 ,为 <2岁男孩 ,均发病于春夏季 ,有 2次或 3次脊髓灰质炎减毒活疫苗 (OPV)服苗史 ,其中 1例在服苗后 2 5d发病 ;病例有发热、非对称性麻痹、腱反射减弱、巴彬斯基征阴性和留有后遗症等临床表现 ,其中 2例临床症状严重。结论 首例Ⅲ型VDPV病例发生在安徽省 ,病例有增多的趋势 ;其流行学特征和临床表现与野病毒引起的病例相似 ;2例患儿因感染在环境中循环的Ⅲ型VDPV而发病 ;尚未发现该疾病的传播流行 ;

冻干甲型肝炎减毒活疫苗H2株的安全性和免疫原性研究

为观察H2株冻干甲型肝炎(甲肝)减毒活疫苗接种人体后的安全性和免疫原性，选择广西壮族自治区蒙山县一小学学生(年龄7～12岁)164人和浙江省台州市椒江区一幼儿园儿童(年龄3-6岁)114人为接种对象，免疫前筛选抗甲肝病毒IgG抗体(抗-HAV-IgG)阴性，血清丙氨酸氨基转移酶(SGPT)正常，无肝炎病史、症状和体征者，分别接种2个批号的H2株冻干甲肝活疫苗。观察接种疫苗后30min，8、24、48、72h的局部及全身反应，以后隔天记录体温及其它有关临床反应。接种疫苗后1、2个月采静脉血测定SGPT及抗-HAV-IgG，同时长期随访检测免疫后13、24个月血清抗-HAV-IgG水平。检测用酶免疫测定（EIA)竞争抑制法，用世界卫生组织(WHO)提供的标准品(含100mlU／ml)进行标定。结果显示：在整个观察期间，所有观察者未见中、强反应及其它临床反应发生，SGPT检测结果无异常升高。H2株冻干甲肝活疫苗具有良好的安全性。接种疫苗后2个月抗体阳性率为99．1％-100．0％，13～24个月阳性率仍高达97．8％-98．9％；免疫后2个月抗体几何平均滴度(GMT)达1607mlU/ml，在免疫后24个月抗体GMT仍维持在448．3mlU／ml。表明H2株冻干甲肝活疫苗安全性良好，接种后有较高的抗体阳转率和GMT。

甲型肝炎病毒恒河猴模型的评估

目的 对国产恒河猴作为甲型肝炎病毒 (HAV)的动物模型做出全面评估。方法 用HAV野型株和H2株减毒HAV感染恒河猴 ,检测分析猴体的各种反应。结果 14只恒河猴经 4株野型病毒感染后 ,全部血清抗体阳转 ,效价为 1∶2～ 1∶12 80 ,13只猴 ( 92 .9% )的血清酶异常升高和粪便排毒 ,2只猴 ( 14 .3% )有肝脏组织病理学极轻度改变 ;35 2只恒河猴分组接种 6 8批H2株及其子代病毒后 ,血清抗体阳转率为 99.7% ,血清酶异常升高率为2 .8% ,粪便排毒率为 5 8.3% ( 14 / 2 4 ) ,无肝脏组织病理学变化。结论 国产恒河猴是HAV的敏感动物 ,其ALT等血清酶指标能有效反映HAV的强毒或弱毒性质 。

S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗对山羊免疫效果的比较试验

为了研究S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗对本地杂交山羊诱导的抗体消长动态规律、安全性及免疫效果,试验对36只不同日龄、不同性别的健康山羊(含妊娠母羊9只)随机平均分组,采用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)方法分别对口服S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗的试验山羊,在免疫后第7,14,21,42,90天时对血液中布鲁氏菌抗体进行检测。结果表明:两种疫苗一次免疫对本地杂交山羊的最长保护期为90 d,其中S2株布鲁氏菌减毒活疫苗可适用于不同日龄、不同性别本地杂交山羊使用,也适用于妊娠期间山羊的免疫;M5株布鲁氏菌减毒活疫苗可引起妊娠母羊免疫副反应及严重的流产症状。说明较M5株布鲁氏菌减毒活疫苗,S2株布鲁氏菌减毒活疫苗具有使用方便且安全有效的优势。

鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspiC对非靶动物(鼠)的致病性

目的评价鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspiC对非靶动物(鼠)的致病性。方法采用鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspi C[1×10~7、1×10~9 CFU/(0. 1 mL·只)]及鸡白痢沙门菌S06004(Nal^R)[1×10~7 CFU/(0. 1 mL·只)],分别经肌肉注射和口服感染小鼠,同时设空白对照组(未感染)。观察小鼠的临床症状、病理、体重、脏器内菌体载量、粪便排菌及脾脏细胞因子水平,分析鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株对小鼠的致病性。结果与空白对照组比较,各组小鼠均未出现任何临床症状,肝脏、脾脏、盲肠病理观察均未见任何病变,体重变化差异无统计学意义(P> 0. 05)。与鸡白痢沙门菌S06004(Nal R)感染组比较,减毒活疫苗候选株感染组小鼠肝脏、脾脏、盲肠内及小鼠粪便载菌量均降低。各感染组小鼠脾脏中炎性因子IL-1β、IFNγ、IL-12、IL-6表达量均较低,仅引起小鼠轻微短暂的炎症反应。结论鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株SKLZΔspiC对非靶动物(鼠)无致病性,符合公共卫生安全要求。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗诱导的人体特异性免疫应答

目的观察人体接种冻干甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)后产生的特异性免疫应答。方法选择16名血清甲型肝炎抗体阴性的健康志愿者,接种1针冻干甲型肝炎减毒活疫苗,接种前和接种后2、4、8、12、156周(3年)采血,采用ELISA检测血清抗HAVIgG抗体;采用流式细胞术检测全血各淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的百分率及表达细胞因子IFN-γ和IL-4的阳性细胞百分率;采用ELISPOT法检测外周血淋巴细胞分泌IFN-γ的斑点形成细胞(SFC)。结果接种疫苗后2周,表达IL-4的阳性细胞百分率与接种前相比显著升高;接种后4周,CD4+淋巴细胞亚群百分率与接种前相比显著升高;接种后8周,抗体100%阳转;接种后3年,抗体和分泌IFN-γ的SFC有一项以上阳性者占85.7%(12/14)。结论接种冻干甲型肝炎减毒活疫苗,能诱导机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。

日本脑炎ML-17两个变异株的基因组序列及突变分析(英文)

目的鉴别日本脑炎疫苗株ML-17的两个大宽变异株（ML-17L2和ML-17L4）的存在，并通过全基因组序列测定分析引起斑形和毒力改变的基因突变。方法首先对疫苗株ML-17在传代过程中出现的多斑ML-17sh的两个大宽变异株进行纯化和鉴定，再对两个大斑变异株进行全基因组序列测定和全编码氨基酸序列推导。并与小斑疫苗株ML-17及其大斑亲代野毒株JaOH0566的全核苷酸序列和全编码氨基酸序列进行比较，分析引起宽形改变的基因突变。并应用小白鼠试验检查ML-17变异前后的神经侵袭力和毒力变化。结果全基因组序列分析显示两个大斑变异株的核苷酸总数均为10977个，与ML-17和JaOH0566相比较，分剐有33和34个核苷酸变异散在分布于ML-17L2和ML-17L4的全基因组中，其中又分别有12和13个核苷酸导致了氨基酸的改变。在ML-17L2和ML-17L4的衣壳蛋白区没有氨基酸变异，但在包膜蛋白区各有一个氨基酸变异；在5’端非编码区没有核苷酸变异，但在3’端非编码区有3～4个核苷酸变异，且各增加了一个额外的10699核苷酸。ML-17和ML-17sh的小鼠LD50分别为大于1×10^6FFU和481FFU。变异后毒力明显增强。结论发生在两个大斑变异株的第5非结构蛋白区和其它区的氨基酸返祖变异（变回与JaOH0566相同）和新变异，可能引起了宽彤的改变；而全部5个氨基酸返祖变异和2—3个氨基酸新变异可能与其毒力改变有关。本次研究为ML-17L2和ML-17L4的斑形和毒力改变提供了分子遗传学基础。

腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法的建立及验证

目的建立腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法,并进行验证。方法针对腮腺炎减毒活疫苗株S79血凝素(hemagglutinin,H)基因保守区域设计特异性引物和Taq Man荧光探针;以05008批腮腺炎减毒活疫苗S79株成品作为参考品,将参考品或供试品稀释后,接种于长成单层的Vero细胞中,采用低渗合并冻融法将细胞破碎,吸取上清,进行荧光定量RT-PCR。优化病毒感染时间,并对该方法的特异性、精密性及准确性进行验证。结果病毒感染的最佳时间为18 h;建立的荧光定量RT-PCR法只对腮腺炎减毒活疫苗具有特异性扩增,对灭活的腮腺炎减毒活疫苗、水痘病毒、狂犬病病毒、麻疹病毒、风疹病毒和Vero细胞均无扩增曲线出现;该方法检测4个浓度(1、1:5、1:52、1:53)样品6组数据的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<5%,不同操作人员于不同日期检测4个浓度(1、1:5、1:52、1:53)样品的标准曲线回归方程R2均大于0.97,RSD均<5%;该方法与细胞病变法测得的11批腮腺炎减毒活疫苗成品的病毒滴度值之差均≤0.2 Lg CCID50/ml,两组数据差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立的荧光定量PCR法检测腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度特异性较强,精密性和准确性良好,且快速方便,可应用于企业生产过程中的内部质控。

国内医药信息

我国存在两种基因型别乙脑病毒中国CDC(疾病预防控制中心)病毒病预防控制所进行的国内首次大规模乙脑分子流行病学研究发现,目前我国同时存在基因3型和基因1型两种乙脑病毒,新分离病毒与我国目前所应用的乙脑减毒活疫苗株在重要结构蛋白基因区段氨基酸位点特征无较大变化,我国当前的流行的乙脑病毒完全可通过国产乙脑疫苗免疫预防。中国CDC病毒病预防控制所副所长梁国栋研究员介绍。

A型流感病毒持续感染细胞系来源的IVpi-189病毒生物学性状的初步研究

为明确E61-24-P15 A型重组流感病毒的第189代传代子病毒(IVpi-189)是否具备流感病毒温度敏感减毒活疫苗候选株的特点,将IVpi-189病毒感染MDCK细胞,并于不同培养温度条件下培养,观察其致细胞病变效应,病毒合成、释放情况,以及不同温度条件下病毒存活时间。结果显示32℃培养温度下,IVpi-189病毒具有等同于亲代野生病毒株的诱导细胞病变能力,而当培养温度上调至38℃,IVpi-189病毒致细胞病变效果出现缓慢且程度明显减轻。空斑形成单位实验发现IVpi-189病毒在38℃培养条件下增殖能力明显下降,其原因与病毒灭活速度及子病毒释放无关,但与感染细胞病毒合成能力下降有关。上述实验结果初步证实流感病毒持续感染细胞系来源的IVpi-189病毒具有温度敏感减毒活疫苗的生物学特性,在许可培养温度条件下具有良好的增殖能力,而在非许可培养温度下,病毒增殖活性受到明显抑制。本研究为流感病毒减毒活疫苗的开发研制提供实验佐证。