人类精子表面附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊凝固蛋白Semenogelin的相互作用研究

目的:探讨人类精子表面一种附睾蛋白激酶抑制剂Epp in和精囊凝固蛋白Sem enogelin(Sg)的相互关系。方法:①用抗Epp in的抗体与精子和精浆中Epp in蛋白进行免疫沉淀反应;②免疫荧光法在精浆和精子表面共同显色定位;③重组Epp in(rEpp in)和重组精囊凝固蛋白Sg(rSg)共同孵育,用抗Epp in抗体或抗Sg抗体进行免疫共沉淀;④W estern印迹检测rEpp in和rSg相互作用;⑤放射性125I-rSg与rEpp in结合达饱和后,用未标记的rSg竞争性结合分析;⑥放射性125I-rSg直接与印迹膜上的rEpp in行放射性自显影。结果:人精子表面蛋白Epp in与精囊蛋白Sg发生特异性结合,Sg分子结构中的半胱氨酸残基Cys-239是唯一的结合位点,Cys-239的还原及羧甲基化将阻碍125I-rEpp in与rSg的结合。结论:Epp in与Sg的结合是靠分子结构中二硫化键的参与。在人类射精后的精子表面,精囊蛋白Sg结合在精子表面的Epp in上。

人精液凝固蛋白SgI-52的表达与抗菌活性研究

以人精囊腺cDNA为模板,用嵌套式PCR技术扩增出编码成熟人精液凝固蛋白I(semenogelin I,SgI)第85–136位氨基酸(SgI-52)的核苷酸序列并将其插入载体pMAL-p2X中,成功构建的表达载体pMAL-p2X/SgI-52转化大肠杆菌DH5α后,重组融合蛋白诱导表达于大肠杆菌周质中。经第X因子剪切及超滤处理,得到表达的重组SgI-52。质谱分析结果证明重组SgI-52为目的肽。重组人SgI-52对大肠杆菌ATCC25922标准株以及耐氨苄标准株ML-35P的最低抑制浓度MIC分别为32.45以及46.30?μg/mL。我们的结果及相关研究提示在人精液液化过程中人精液凝固蛋白I的不同降解产物可能行使不同的生物学功能,值得进行深入研究。

人精液凝固蛋白Ⅰ衍生合成肽在不同pH值及Zn^(2+)浓度下的抗菌活性研究

目的研究5种人精液凝固蛋白Ⅰ衍生合成肽在不同PH值及Zn2+浓度下的抗菌活性,探讨人精液凝固蛋白Ⅰ衍生抗菌肽在不同条件下的抗菌机理。方法在前期研究新发现的人精液凝固蛋白Ⅰ衍生肽SgI29及其衍生合成肽(SgI14、SgI19、SgI22及SgI25)具有抗菌活性的基础上,设置不同pH值及不同Zn2+浓度,通过琼脂糖弥散法抗菌试验进一步测定其在此环境下对泌尿生殖道感染常见细菌抗菌活性。结果 SgI29及其衍生合成肽在pH值为4时,无明显抗菌活性,pH值为6和7时,其抗菌活性最强。在试验所设置的不同Zn2+浓度下,各培养皿中均未见细菌生长。结论 pH值是影响人精液凝固蛋白Ⅰ衍生肽抗菌活性的重要因素之一。游离态Zn2+具有较强的抗菌活性,精液中Zn2+的抗菌活性值得进一步研究。

紫外分光光度法测定纤维蛋白原制品中可凝固蛋白含量

紫外分光光度法测定纤维蛋白原制品中可凝固蛋白含量６１００８１中国医学科学院中国协和医科大学输血研究所焦丽华肖玲卢传兰郑世荣景明纤维蛋白原可凝固蛋白含量测定，《中国生物制品规程》称纯度测定且规定用凯氏定氮法测定，但该法操作较繁琐，不利于快速检测中间产品...

中国鲎试剂中凝固蛋白原的快速纯化

报道一种从商品中国鲎试剂中快速分离纯化凝固蛋白原的方法．经透析、离子交换、凝胶过滤从该品中获得一种均一蛋白，紫外光谱和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实为鲎凝固蛋白原．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和凝胶过滤测得其分子量分别为２６ｋＤ和２０ｋＤ．其得率为５０％．

精液凝固蛋白Semenogelin对精子运动抑制机制的研究进展

精液的液化和精子的获能是精子取得向前运动的关键,精液凝固蛋白Semenogelin(Sg)在这个过程中起着至关重要的作用,它们直接参与了精液凝胶的形成,并协同其他一些来源于男性生殖道的蛋白酶类和金属离子等,与精子细胞表面发生作用,参与调控精液液化和精子获能,最终使精子取得向前运动。本文综述了当前Sg对精子活动抑制机制的研究进展。

人精液凝固蛋白Ⅰ衍生合成肽的抗菌活性

SgI-29是作者最新发现的有抗菌活性的人精液凝固蛋白I衍生抗菌肽。以SgI-29为模板,合成4种不同肽链长度的SgI-29衍生小肽,利用理化性质分析软件及螺旋轮作图法对SgI-29及其衍生物进行了理化性质及结构的预测,结合琼脂糖弥散法抗菌试验得到的不同合成肽段对大肠杆菌标准菌株(Escherichia coli ATCC 25922)以及绿脓杆菌标准株(Pseudomonas aeruginosaATCC27853)的抗菌活性实验结果,探讨了SgI-29及其衍生物的结构-功能关系。结果表明:SgI-22在所有的SgI-29及其衍生物中有最好的抗菌活性,是进行进一步结构优化的良好模板。

精液凝固蛋白Ⅰ活性片段的精子抑制活性分析

目的制备重组精液凝固蛋白(Sg)及其小分子衍生肽,并分析其对精子活动的抑制作用。方法通过分子克隆及PCR扩增等技术得到实验用重组蛋白,从而对有正常生育能力的男性精子活动进行抑制实验分析。结果在生理条件下,精液Sg的N和C端片段均对精子运动存在抑制作用,其中以N端片段更为显著。结论精液Sg中存在能够抑制精子运动的氨基酸片段,而Sg24~163的作用最为显著。

鲎凝固蛋白原的纯化及其火箭免疫电泳鲎试验法

亚洲鲎血细胞溶解物先经CM-Sepharose CL-6B分级洗脱,再经Dextran-Sepharose CL-6B亲和层析纯化凝固蛋白原。用此法纯化的凝固蛋白原免疫家兔产生抗血清,并用火箭免疫电泳法测定鲎血细胞溶解物与内毒素反应后的凝固蛋白原残余量,根据残余凝固蛋白原量与参加反应内毒素量呈负相关关系,建立了定量测定内毒素的火箭免疫电泳鲎试验法。

研究发现针对血液凝固蛋白的新型免疫疗法

正常情况下，血液蛋白纤维蛋白不会进入大脑。但在一些神经系统疾病中，血脑屏障的渗透性增大，使纤维蛋白渗入大脑并引发炎症。血脑屏障渗漏是导致神经变性的脑部疾病的早期事件，这可能会导致神经细胞死于多发性硬化症（MS）、阿尔茨海默病（AD）和其他疾病。

凝固剂对干酪风味、质构及蛋白水解代谢特征的影响

干酪蛋白质形成凝胶的过程,是干酪加工的关键环节。凝固剂的种类及用量与干酪凝胶的品质特征密切相关。该文综述酶类凝固剂及酸类凝固剂对干酪风味、质构及蛋白水解代谢特征的影响,并对干酪凝固剂加工及应用工业面临的机遇与未来发展趋势进行探讨,以期为今后干酪产品开发及品质提升提供参考。

D二聚体和鱼精蛋白副凝固试验检测在白血病、恶性肿瘤与DIC诊断中的表达

白血病、恶性肿瘤与DIC均可有凝血功能障碍,而且前二者在疾病过程已属慢性DIC的范畴,在某些情况下,并可转变成急性DIC。DIC的病理过程中除凝血功能改变外,尚有纤溶功能的改变。本文以最常用的纤溶指标D二聚体与3P试验为观察对象,以了解其在上述疾病中的表达。

D-二聚体和血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验检测继发性纤溶的对比研究

目的探讨D-二聚体可代替血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验对继发性纤溶,动脉或静脉血栓性疾病,妊高症和恶性肿瘤的检测。方法选择20名继发性纤溶深静脉血栓、妊高症、白血病病人分别做D-二聚体和血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验进行对比。结果D-二聚体比血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验的敏感性高。结论D-二聚体是检测继发性纤溶的最佳指标,D-二聚体检测如阴性,则基本可排除血栓形成。

精液凝固蛋白在肾癌中的表达及其临床意义

目的探讨精液凝固蛋白(Sg)在肾癌患者癌旁组织及癌组织中的表达及临床意义。方法收集具有明确病理诊断的20例肾癌组织及癌旁组织,应用qRT-PCR和Western blot方法检测Sg基因和蛋白水平的表达,并进一步研究了Sg与临床分期之间的相关性。结果肾癌组织标本中Sg mRNA的相对表达量为(0.71±0.48),明显低于癌旁组织中的(1.07±0.44)(P<0.05)。在Ⅲ/Ⅳ期癌组织中Sg mRNA的表达量为(0.40±0.19),明显低于Ⅰ/Ⅱ期癌组织的(0.92±0.51)(P<0.05);Sg蛋白表达亦表现出相同趋势。结论 Sg基因在肾癌中的异常表达与肾癌的发生发展关系密切。

急性脑梗死患者蛋白C活性依赖凝固时间标准化比值降低

目的观察急性脑梗死患者蛋白C活性依赖凝固时间标准化比值(PCAT-NR)与相关凝血指标纤维蛋白原(Fib)、凝血因子Ⅶ活性(FⅦ:C)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、抗凝血酶(AT)、D二聚体(DD)的相关性。方法经临床及影像学确诊急性脑梗死患者100例为病例组,选取75例体检健康者为健康人对照组,检测Fib、FⅦ:C、FⅧ:C、AT、PCAT-NR、DD并比较两组间差异;分析急性脑梗死患者PCAT-NR下降组与PCAT-NR正常组Fib、FⅦ:C、FⅧ:C、DD、AT结果差异;分析急性脑梗死患者PCAT-NR与其他凝血指标的相关性。结果急性脑梗死组Fib(3.38±1.25)g/L、FⅦ:C(130.5±15.9)%、FⅧ:C(135.8±43.1)%、DD(2.12±3.01)mg/L均高于健康人对照组,而AT(83.94±14.95)%、PCAT-NR(0.87±0.23)结果均低于健康人对照组,P均<0.05;急性脑梗死组患者PCAT-NR下降组Fib(4.03±1.25)g/L、FⅦ:C(138.2±6.9)%和FⅧ:C(151.5±54.9)%结果均高于正常组(P均<0.05),而DD、AT差异无统计学意义(P均>0.05);急性脑梗死患者PCAT-NR与Fib、FⅧ:C、DD呈负相关(r分别为-0.484、-0.356、-0.473,P均<0.05),与FⅦ:C、AT无相关性(P均>0.05)。结论急性脑梗死患者PCAT-NR水平下降与高凝状态有关,与Fib和凝血因子Ⅷ活性有一定关联。

简易硫酸鱼精蛋白副凝固试验阳性标本制作的方法

采用稀释的新鲜血浆或陈旧血浆,与凝血酶制备成硫酸鱼精蛋白副凝固(3P)试验阳性标本,不仅方法简便,并可动态观察,能更好地满足实验教学的需求。

微生物产生大豆蛋白凝固酶的研究——Ⅰ.菌种的分离筛选及产酶条件的研究

从141份土壤样品中筛选到一株产大豆蛋白凝固酶的细菌,在适宜的发酵条件下,酶活力可达0.6—1u/ml。酶反应的最适温度为70℃、pH为5.5。在45℃、pH6.3—8.0条件下,酶活力稳定。

改良血浆硫酸鱼精蛋白副凝固实验的方法学建立及评价

目的对传统硫酸鱼精蛋白副凝固实验进行改良,以提高其在临床应用中的灵敏度以及在临床相关疾病诊断中的价值。方法收集98例DIC患者及156例正常人血浆标本,分别进行硫酸鱼精蛋白副凝固实验、D-二聚体及改良硫酸鱼精蛋白副凝固实验。通过对改良硫酸鱼精蛋白副凝固实验进行相应的方法学评价,分析其灵敏度及特异度等相关指标,并将改良后的硫酸鱼精蛋白副凝固实验应用于临床8例疑似心梗病的辅助诊断。结果硫酸鱼精蛋白副凝固实验、D-二聚体及改良硫酸鱼精蛋白副凝固实验的灵敏度分别为16.33%,88.76%和77.56%,其特异度分别为100%,88.46%和97.44%。在5例确诊的心梗病例中,改良硫酸鱼精蛋白副凝固实验先于D-D及硫酸鱼精蛋白副凝固实验呈现阳性。结论改良后的硫酸鱼精蛋白副凝固实验较传统3P方法具有较高的灵敏度,较D-二聚体具有较高的特异度。改良硫酸鱼精蛋白副凝固实验对于血栓形成及纤溶具有早期预警作用,在相关疾病的临床诊断与鉴别诊断中具有良好的应用价值。

血液凝固与纤维蛋白溶解

导言 血液凝固之研究早已始于20世纪初期,但有关止血机制筛选的实验方法,仅在1960年才开始建立,并被临床实验室广泛采用。随后,出血倾向与血友病的拟诊,亦基于这些结果的报告与分析。 由于标记技术的发展,吾人对凝血机制使用了分子标记,俾使临床能得到早期、正确的诊断,对血栓与出血的病人始可作出适宜的治疗。 1 止血机制 “衰老来自于血管壁”,故吾人宜注意保持血管壁的健康使其情况良好。血液流经血管,并通过其未端抵达身体各处,以供给氧气与营养物质。但当出血时,凝血机制活化形成纤维蛋白使失血停止,并保获机体不受感染。在正常情况下。