1株凝结芽孢杆菌ZC-1生物学特性研究

以凝结芽孢杆菌ZC-1为研究对象,通过对菌株的最适生长温度、抑菌试验、药敏试验,对胃酸、胆盐及高温的耐受试验及菌株安全性试验来进行研究。结果表明,菌株最适生长温度为40℃,对大肠杆菌、沙门氏菌、痢疾志贺氏菌及普通变形杆菌等均有良好的抑菌效果;菌株对氯霉素、氨苄西林、庆大霉素、四环素及诺氟沙星表现敏感,但对呋喃唑酮表现出耐药性。凝结芽孢杆菌ZC-1在pH值2.0与pH值3.0处理6 h存活率分别为73.75%与91.18%;经0.3%与0.7%猪胆盐处理6 h,存活率分别为96.27%、91.07%;在80℃与100℃水浴处理30 min,存活率分别为89.07%、41.67%;菌株无溶血现象,对小鼠无致病性。研究表明,凝结芽孢杆菌ZC-1具有良好的安全性及抗逆性。

产L-乳酸凝结芽孢杆菌发酵条件的初步研究

对经N+离子注入筛选到的L-乳酸高产菌株BacilluscoagulansRS12-6的发酵条件进行了初步研究。主要研究了 通气量、温度及pH值等培养条件对菌体生长及产酸的影响。确定最佳培养条件及最佳碳源、氮源配比。

凝结芽孢杆菌对产蛋鸡后期生产性能、蛋品质及免疫的影响

试验旨在探究凝结芽孢杆菌制剂对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质及免疫的效果,并确定适宜添加量。试验选用810只产蛋后期(66周龄)"京粉1号"蛋鸡,随机分成5组,每组6个重复,每个重复27只鸡。阴性对照组用无抗基础日粮饲喂,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础日粮中添加3.33×10~6、1×10~7、3.33×10~7 cfu/g凝结芽孢杆菌,阳性对照组添加枯草芽孢杆菌1×10~7 cfu/g,预饲期1周,正式饲喂期8周。结果表明:试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及阳性对照组等4个组与阴性对照组相比,试验Ⅰ组显著提高蛋鸡的产蛋率(P<0.05),降低破蛋率(P<0.05)。试验Ⅱ组显著提高合格蛋重(P<0.05)、降低料蛋比(P<0.05)。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均显著降低次品蛋率、沙壳蛋率、腹泻率(P<0.05)。试验Ⅰ组和试验Ⅲ组显著提高蛋黄颜色(P<0.05),试验Ⅰ及阳性对照组均可提高28 d蛋壳厚度(P<0.05),并对蛋品质有一定程度的改善作用。免疫指标:与阴性对照组比,日粮中添加凝结芽孢杆菌制剂可以显著提高产蛋后期蛋鸡血清中IgG、IgA、IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α以及小肠黏膜sIgA的含量(P<0.05),降低血清IFN-γ的含量(P<0.05);与阳性对照组相比,试验Ⅰ、Ⅱ组多项免疫指标显著提高(P<0.05)。由试验结果可知,凝结芽孢杆菌制剂可显著提高产蛋后期蛋鸡生产性能和免疫能力,改善蛋品质和蛋鸡肠道健康,1×10~7cfu/g水平下凝结芽孢杆菌多项指标优于枯草芽孢杆菌,适宜添加剂量为3.33×10~6 cfu/g。

转运蛋白提高凝结芽孢杆菌酸耐受性

光学纯乳酸作为可降解生物材料——聚乳酸(polylactic acid,PLA)的前体物质,正在受到广泛关注。乳酸发酵过程中酸性产物的积累会影响菌株的生长,提高菌株酸耐受性具有重要意义。本研究以乳酸生产菌株凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)DSM1为出发菌株,通过对凝结芽孢杆菌DSM1及其乳酸脱氢酶双敲除菌株(ΔldhL1ΔldhL2)进行比较转录分析,筛选酸耐受相关的转运蛋白基因。对关键基因RS16330、RS06895、RS16325、RS10595、RS00500、RS07275、RS10635及RS01930进行实时定量PCR分析,发现基因RS06895、RS10595、RS00500和RS10635在发酵12 h和24 h转录水平显著增强。过表达RS10595基因的菌株,在中性(pH 6.0)条件下生长状况和发酵性能均受到抑制,但在酸性条件下(pH 4.6),其乳酸生成相比对照组显著提高。上述结果表明,RS10595基因与菌株DSM1的酸耐受性密切相关。本研究有助于进一步探究凝结芽孢杆菌酸耐受的机制,也为构建耐酸菌株提供了基础。

抑制大肠杆菌K88的益生菌体外筛选

本研究以从断奶仔猪肠道分离的益生菌为试验菌株,将大肠杆菌K88和益生菌接种到体外培养的猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cell-1,IPEC-1)中,测定培养2.5h上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,同时将益生菌和大肠杆菌K88体外混合培养2.5h,进行平板计数,统计大肠杆菌K88菌数的变化,筛选出可以抑制大肠杆菌K88的益生菌。试验结果显示,干酪乳杆菌和凝结芽孢杆菌能显著降低IPEC-1培养上清液中的LDH活性(P<0.05),降低大肠杆菌K88对细胞的损伤;凝结芽孢杆菌能降低DMEM培养基中大肠杆菌K88的生长速度,结合模拟制粒过程及胃肠道环境的耐高温、耐酸及耐胆盐研究进行综合分析,该凝结芽胞杆菌对大肠杆菌K88有较好的抑制作用且具有良好的耐高温、耐酸及耐胆盐性能,具有作为微生态制剂菌株的应用潜力。本试验建立了能够抑制大肠杆菌K88的益生菌体外筛选技术模型。

凝结芽孢杆菌对急性重症胰腺炎患者血清炎症因子水平的影响

目的探讨急性重症胰腺炎患者应用凝结芽孢杆菌的治疗效果,观察治疗前、后血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1和IL-6水平变化。方法 68例急性重症胰腺炎患者按就诊时间分为2组,2008年10月—2011年4月就诊34例为对照组,2011年5月—2013年10月就诊34例为观察组,对照组给予禁食水、胃肠减压等常规治疗,观察组在常规治疗基础上给予凝结芽孢杆菌0.7g/次,3次/d,胃管内注入。治疗7d后评定2组疗效,记录2组治疗前、后血清TNF-α、IL-1和IL-6水平变化,并观察2组白细胞计数和血清淀粉酶恢复正常时间、腹痛腹胀缓解时间。结果观察组总有效率(94.12%)高于对照组(73.52%)(P<0.05);对照组治疗后TNF-α、IL-1和IL-6水平((22.80±6.05)、(21.98±5.37)、(32.87±6.80)μg/L)低于治疗前((59.65±13.18)、(58.13±6.75)、(79.03±9.11)μg/L)(P<0.05);观察组治疗后TNF-α、IL-1和IL-6水平((17.33±4.02)、(16.64±5.04)、(24.85±6.03)μg/L)低于治疗前((57.82±11.92)、(59.46±5.56)、(77.07±11.09)μg/L)(P<0.05),与对照组治疗后比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组白细胞计数恢复正常时间、血清淀粉酶恢复正常时间、腹痛腹胀缓解时间((5.23±1.16)、(5.48±1.54)、(4.12±2.08)d)均短于对照组((7.94±2.15)、(8.37±2.12)、(7.40±2.06)d(P<0.05)。结论SAP患者应用凝结芽孢杆菌可使血清TNF-α、IL-1和IL-6水平下降,提高治疗有效率。