聚乙二醇沉淀法与凝胶色谱层析法检测巨泌乳素的相关性研究

目的探讨聚乙二醇(PEG)沉淀法检测巨泌乳素(MPRL)方法的可行性。方法将26例高泌乳素血症(HPRL)患者按临床表现和影像学资料分为真性HPRL组(简称真泌组)11例及MPRL血症组(简称巨泌组)15例。采用凝胶色谱层析(GFC)法分离泌乳素(PRL)各组分,检测各组分PRL浓度,同时将所有标本进行PEG沉淀,检测处理后单体PRL浓度,并与GFC法单体PRL检测结果进行相关性分析。结果巨泌组与真泌组的PRL层析谱不同,真泌组以单体PRL为主,而巨泌组以巨PRL为主。真泌组与巨泌组血清处理前总PRL浓度差异无统计学意义(P>0.05),而处理后真泌组明显高于巨泌组(P<0.05)。PEG沉淀法与GFC法检测真泌组与巨泌组单体PRL浓度差异无统计学意义(P>0.05),且相关性良好[相关系数(r)=0.844,P<0.05]。结论PEG沉淀法检测MPRL结果与GFC法有良好的相关性,且经济、简便、易行,可作为临床常规筛查方法。

干腌火腿活性肽的抗氧化性能研究与鉴定

以金华火腿为研究对象,借助凝胶层析色谱对火腿粗肽进行初步分离,测定各组分的抗氧化性,将样品经由配备在线钠喷离子源的液相色谱串联质谱分析,采用串联EASY-nanoLC 1200的Orbitrap Q-Exactive Plus质谱仪鉴定金华火腿中所含活性肽的序列,发现了31条丰度高且未被鉴定的短肽。并利用PeptideRanker进行预测分析,得到丰度和活性都比较高的3个肽段,氨基酸序列分别为:DHDGPDHW、FPPDVGD、PFGDTH。用DPPH自由基清除能力、ABTS阳离子自由基清除能力和羟自由基清除能力检测抗氧化能力,证明金华火腿粗肽液具有良好的抗氧化性。红外光谱发现粗肽在1600~1700 cm-1有吸收带。通过合成短肽,验证肽段的抗氧化能力,分子对接实验表明超氧化物歧化酶与DHDGPDHW、FPPDVGD、PFGDTH均有结合能力,FPPDVGD的结合能力最强为-6.6 kcal/mol。综上,FPPDVGD具有较好的抗氧化能力,可作为天然抗氧化剂应用于食品、药品或化妆品,应用前景非常广泛,为干腌制品的进一步开发利用提供理论支持。

纯化抗原半定量检测幽门螺杆菌感染

目的 :鉴定并提取幽门螺杆菌 ( Hp)特异性抗原 ,建立测定抗 Hp抗体的半定量免疫酶技术。 方法 :10株 Hp可溶性蛋白用于十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析 ,凝胶层析提取特异性抗原 ,方阵滴定建立免疫酶方法。纯化抗原与全菌抗原同批检测 136例患者 ,以免疫印迹分析作为金标准。 结果 :Hp主要特异性抗原分子量为 660 0 0 ,590 0 0 ,310 0 0和2 50 0 0 ,Sephadex G- 2 0 0柱层析第 1峰提取物含其中 3种抗原成分。纯化抗原 EL ISA测定抗 HpIg G,敏感性 98.9% ,特异性 92 .5% ,准确性 97.0 % ,优于应用全菌抗原的检测结果。 结论 :本实验建立的检测抗 Hp Ig G方法 ,具有敏感、特异、半定量可靠、可目测定性及可用于微量检测等特点 。

偏执型分裂症患者血清中型分子成份的改变

中型分子(CM)是一种具有肽类性质的生物活性物质,它参与神经传递和调节。它在某种程度上可调节人体的感觉,并对记忆缺失有直接的关系。

采用大孔树脂纯化燕麦酶解产物的研究

利用DA201-C大孔吸附树脂对燕麦肽酶解产物进行脱盐及糖原分离纯化。结果表明,用25%乙醇洗脱时效果较好,过程较容易控制;通过测定凝胶层析色谱分析纯化前后样品的分子量的分布状态,验证了大孔吸附树脂DA201-C较好的脱盐及脱糖效果。最后,使用高效液相色谱精确测定纯化后产物的分子量在438.56至1301.01之间。

乳清蛋白酶解工艺条件的研究

以乳清蛋白为原料制备生物活性肽，根据单因素实验研究最佳酶解工艺，乳清蛋白酶解液的水解度最优值固定在27．90％，其最优条件为：反应pH8．5，反应温度55℃，反应时间3h，加酶量3％。另外利用凝胶层析色谱分析酶解后乳清肽的相对分子质量分布，并测定个分子量组分ACE抑制活性。最后，利用高效液相色谱精确测定，酶解产物的相对分子质量主要分布在562．25～1330．63。

大肠杆菌CFT073中Curli系统重要基因csgF的克隆、表达、纯化和结构分析

【目的】对大肠杆菌CFT073中Culri系统的重要蛋白CsgF进行高效表达,探索其纯化条件和三维结构,为研究Curli生物合成机制提供理论基础。【方法】以大肠杆菌CFT073基因组为模板扩增csgF基因,构建pET28a-csg F(nsp)-N-6His、pET28a-csg F(20-129)-N-6His、pET28a-csg F-C-6His和p ET28a-csg F(nsp)-C-6His等重组质粒,转化到大肠杆菌DH5α并在BL21(DE3)中诱导表达;通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定CsgF蛋白在大肠杆菌中的表达情况,用Ni-NTA His Bind Resin和凝胶排阻层析色谱纯化重组蛋白CsgF,SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定分析;用Pull down实验研究CsgF与CsgG蛋白的相互作用,同源模建方法分析重组蛋白CsgF的三级结构。【结果】克隆了目的基因csg F,并筛选出稳定CsgF蛋白的条件:50 mmol/L Sodium acetate(pH 5.0)、150 mmol/L NaCl、5%Glyercol;CsgF与CsgG存在相互作用,CsgF三维结构模型显示为(β/α)。【结论】获得了高纯度稳定的CsgF重组蛋白及其三维结构,为进一步研究CsgF结构与功能奠定了基础。