蓖麻种子毒蛋白的高效凝胶过滤色谱分析

植物蓖麻种子的抽提液经sepharose4B柱和sephadexG100柱分离纯化,得到一种毒蛋白,利用光谱图和反相高效液相色谱来确认毒蛋白的纯度。根据标准相对分子质量曲线,得到它的相对分子质量并与SDSPAGF(十一烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)所得结果进行比较,用氨基酸自动分析仪测定了其氨基酸组成。

凝胶过滤层析结合液相色谱-串联质谱法测定血清中游离甲状腺激素

基于凝胶过滤层析(GFC)进行前处理,结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)建立了血清中游离三碘甲腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺素(FT4)的高通量、高灵敏检测新方法。选用Sephadex LH-20凝胶小柱对150μL血清样本进行过滤分离,先用Tris-HCl缓冲液(0.1 mol/L,pH 7.4)淋洗去除结合蛋白的甲状腺激素,然后用甲醇对游离的甲状腺激素进行洗脱,采用LC-MS/MS法进行检测和定量,并进行方法学验证。结果显示:FT3和FT4的线性相关系数(r^(2))均不小于0.9995,批内及批间相对标准偏差为1.8%~10%,准确度为85.4%~110%,基质效应为85.8%~114%,回收率为85.8%~107%。采用该方法与平衡透析法(ED)同时检测了95份血清样本,使用IBM SPSS Statistics 26和MedCalc统计软件(v.20.0.0)对检测结果进行配对t检验分析、PassingBablok回归分析和Bland-Altman一致性分析。结果表明,GFC/LC-MS/MS与ED/LC-MS/MS法对血清中FT3、FT4的测定结果无统计学差异(P>0.05)。所建立的方法快速、简便,受干扰因素相对较少,便于临床推广,可为临床实验室游离甲状腺激素的快速、高效、准确检测提供参考方法,同时为其它游离激素的检测提供了一种新的思路。

凝胶过滤层析参数对家蝇蛋白粗提液分离效果的影响

考察了凝胶过滤介质、层析柱直径、柱床高度和洗脱流速对家蝇Muscadomestica蛋白粗提液分离效果的影响 ,结果表明 :凝胶过滤介质种类、层析柱直径、柱床高度、洗脱流速均能不同程度地影响家蝇蛋白粗提液的分离效果。在实验范围内 ,选择1 3cm直径、4 0cm柱床高度的SephadexG 75 ,以 0 4mL min的流速洗脱时 ,对家蝇蛋白粗提液的分离效果比较理想。

凝胶过滤层析分离蛋白质实验中三种过滤介质分离效果的比较

目的 探讨凝胶过滤层析分离蛋白质的最佳实验效果。方法 分别采用不同规格的凝胶过滤层析介质SephadexG 5 0、G 75、G 10 0 ,通过凝胶过滤层析法分离已知分子量的混合蛋白质。结果 混合样品得到分离 ,呈现三组分离样品的层析图。结论 从大分子物质中除去小分子物质时应选用交联度大的介质G 5 0。进行中等蛋白质分离时 ,选用G 75较为合适。将小分子物质浓缩而除去大分子物质时 ,应选用交联度小的介质 ,如G 10 0或G 2 0 0。

凝胶过滤层析在低聚木糖分离中的应用

分别以聚丙烯酰胺凝胶Bio-Gel P-4和Bio-Gel P-2为分离介质,对低聚木糖进行二次分离,分析了凝胶过滤层析分离低聚木糖的规律。结果表明:采用Bio-Gel P-4一次分离可获得木二糖、木三糖、木五糖、木六糖和木七糖组分的纯度分别为98.18%,88.54%,97.52%,78.80%和86.67%;HPLC分析表明,低聚木糖中阿拉伯糖基质量分数为14.75%,其中木二糖和木三糖组分不含阿拉伯糖基;以Bio-Gel P-2为层析介质对木三糖组分进行了二次分离,可将木三糖组分的纯度从88.54%提高到94.19%。

凝胶过滤层析对针刺全血清成分的分段分离研究

目的 为进一步分离、鉴定针刺血清中存在的有效成分 ,对针刺全血清进行预初分段分离。方法 采用凝胶过滤层析技术对针刺全血清进行分段分离 ,并将分离的血清经冷冻干燥制成干粉。结果 将针刺全血清分成 >4 5 k D、14 .3k D- 4 5 k D和 <14 .3k D 3个分子量段。结论 有利于进一步确定针刺血清中抗哮喘有效成分的大体所在 。

凝胶过滤层析法调节脂质体内外水相pH的探讨

通过对脂质体内外水相pH梯度的制备方法的探讨,采用凝胶过滤层析技术将脂质体外水相的pH4.0柠檬酸缓冲液替换成pH 7.2磷酸盐缓冲液,在脂质体内外水相形成pH梯度。在药脂比为1∶5、1∶10、1∶15和1∶20(质量比)时,阿霉素在pH梯度的驱动下从脂质体外水相穿越脂质双分子膜进入内水相,包封率分别达到96.7%、98.7%、96.8%和95.1%,其中药脂比1∶10时包封率达到最高。药脂比1∶10制备的阿霉素脂质体在37℃,12 h内阿霉素泄漏均低于1.0%;48 h内药物泄露率低于5.0%。通过该实验,使学生们能够观测到如何采用凝胶过滤层析技术调节pH梯度,以及pH梯度在阿霉素脂质体主动载药过程中的重要性,为脂质体递释系统的课堂理论教学奠定了良好的实验基础。

离子交换层析和凝胶过滤分离纯化抗凝血多肽

以DEAE C5 2离子交换层析和SephadexG5 0凝胶过滤成功地从盐源山蛭 (Haemendipsayanyuanensis)头部分离纯化了抗凝血多肽 ,获得了蛋白质质量浓度为 1.17mg·mL-1、抗凝血酶比活性为 15 2 .78U·mg-1的抗凝血多肽 ,证明了DEAE C5 2离子交换层析和SephadexG5

凝胶过滤层析分离纯化纤维素酶的研究

海洋细菌MB1产生的纤维素酶粗酶液 ,经盐析、透析 ,分别上葡聚糖凝胶层析柱SephadexG -10 0 ,SephadexG -75和SephadexG -5 0进行分离纯化 ,以SephadexG -75分离效果最好 ,得到一个电泳纯的外切酶组分 ,该酶的比活力由 6.94Umg- 1 提高到 2 0 0 .9Umg- 1 ,提高了 2 8.9倍 ,总收率 8.6%。

凝胶过滤及离子交换层析法纯化玉米CuZn-SOD的研究

用葡聚糖（Sephadex G-75）凝胶过滤及纤维素（DEAE-32）离子交换层析法分离纯化玉米CuZn- SOD，并对其部分理化性质进行了测定．结果表明，玉米CuZn-SOD具有与其它来源的CuZn-SOD相似的性质，即最大吸收峰为260nm，分子量为33,600道尔顿，分子中含有17种289个氨基酸残基，不含色氨酸，N-末端氨基酸为丙氨酸，1分子酶中含2个铜原子和2个锌原子；电泳分析显示，蛋白质谱带和酶活性谱带数目相同，均为两条．

基于响应面法优化凝胶过滤在分离乳铁蛋白中的工艺研究

目前我国乳铁蛋白主要依靠进口,产业化发展相对较慢,相对于其他原料,牛初乳具有廉价、易获得等优点。为低成本获得更多乳铁蛋白,本文对凝胶过滤层析纯化方法进行了优化,并设计了响应曲面试验。研究了磷酸盐缓冲液pH、流速、洗脱液浓度三个不同因素对乳铁蛋白含量的影响,通过设计三因素三水平的响应面试验分析优化凝胶过滤层析在乳铁蛋白纯化中的应用,检测方法采用紫外分光光度法,测量所得样品在475 nm处的OD值,计算出相应的质量浓度,得到最终结果。试验表明:最优工艺条件为磷酸盐缓冲液pH 7.48,流速0.20 mL/min,洗脱液浓度0.42 mol/L,预测乳铁蛋白质量浓度为170.567μg/mL。在此条件下进行三次重复试验并取平均值,实际所得乳铁蛋白质量浓度为166.485μg/mL,相对误差为2.393%,与模型基本吻合。

RGD-葡激酶的凝胶过滤层析法复性及其纯化

构建的溶栓和抗栓双重功能的RGD 葡激酶突变体 (RGD Sak)在大肠杆菌中高表达 ,目的蛋白质以包涵体形式存在。为获得有活性的蛋白质 ,需要对包涵体进行变复性。利用凝胶层析方法对包涵体中RGD Sak进行复性 ,并与稀释复性法进行比较 ,发现凝胶柱复性方法具有操作周期短、简便、成本低而高效等优点。复性后蛋白质用Q SepharoseFF离子交换进一步纯化 ,纯度达 95 % ,酪蛋白凝胶板活性测定表明两种复性法得到的蛋白质比活性相当。圆二色谱测定显示两种复性法得到的蛋白质的二级结构成份和谱形一致 ,说明在两种复性过程中完成了RGD

凝胶过滤层析参数对EV71病毒粗提液分离效果的影响

通过凝胶过滤层析达到分离纯化EV71肠道病毒粗提液,以提高EV71的纯度。选用不同的洗脱流速、不同样品上样量、不同的缓冲溶液的pH值和不同盐浓度对EV71肠道病毒粗提液进行连续洗脱。结果表明,凝胶过滤层析的洗脱流速、样品上样量、缓冲溶液的pH值和盐浓度对EV71病毒均能不同程度地影响EV71病毒粗提液的分离效果。在试验范围内,选择洗脱流速为60 cm·h-1、样品的上样量为5%CV、缓冲溶液的pH为7.5和盐浓度为0.1 mol·L-1时,对EV71病毒粗提液的分离效果比较理想。

凝胶过滤层析精制还原型谷胱甘肽的研究

采用Sephadex G-10凝胶双柱精制还原型谷胱甘肽(GSH)。研究了脱盐上样体积、分级分离上样浓度及上样体积对GSH洗脱的影响。结果表明,在脱盐上样体积为10 mL、分级分离上样浓度和上样体积分别为10 mg.mL-1和5 mL的优化条件下,所得GSH含量可达92.40%。

凝胶过滤层析一步纯化MC-LR Fab的方法及吸附机制初探

为高效制备高纯微囊藻毒素(MC-LR)Fab片段,采用木瓜蛋白酶酶解腹水中纯化获得的单克隆抗体,利用该Fab片段与凝胶过滤层析介质结合的特殊现象分离酶解混合物。通过单因素实验考察流动相中离子强度和pH对Fab片段在柱中保留行为的影响,结合Fab片段等电点(pI)及聚集性质分析二者结合机制。结果表明,腹水经protein G纯化得到纯度大于90%的IgG,IgG经木瓜蛋白酶酶解,主要产物为Fab片段、Fc片段和少量IgG,酶解混合物经凝胶过滤层析一步纯化获得纯度为94.5%,回收率为51%,对MC-LR抑制率为94%的Fab片段。Fab片段pI为6.02,由于表面较强疏水性产生聚集,疏水吸附导致Fab片段与凝胶过滤层析介质结合,降低流动相中离子强度,减弱疏水作用同时提高pH增强离子排阻作用可使Fab片段消除吸附,实现了Fab片段的高效制备。

凝胶层析分离纯化乳酸菌菌体蛋白条件的优化

采用凝胶过滤层析分离纯化乳酸菌菌体蛋白,选择不同的凝胶过滤介质、过滤柱高度、洗脱流速、样品上样量对经过Sephadex G-25脱盐处理的乳酸菌菌体蛋白进行洗脱,观察洗脱峰。结果表明,凝胶过滤介质、过滤柱过度、洗脱流速和样品上样量均不同程度的影响菌体蛋白的纯化效果。在本试验中,分离纯化乳酸菌菌体蛋白的凝胶过滤层析参数为:Sephadex G-75的层析介质以45 cm的柱床高度,洗脱流速0.75 m L/min,样品上样量为5%CV时,对乳酸菌菌体蛋白可达到最佳的分离纯化效果。

人表皮生长因子在凝胶层析中的某些分离性质

考察了流速、进样体积与柱床高度对人表皮生长因子 (humanepidermalgrowthfactor,hEGF)分离行为的影响 .结果表明 :在实验范围内 ,流速对hEGF的分配系数影响较小 ,hEGF的分配系数随样品体积的增加而上升 ,但柱床高度对hEGF的分配系数几乎无影响 .在流速小于 6cm·h-1时 ,hEGF的标准偏差下降显著 ,而高流速对其影响较小 .当进样量小于 3ml时 ,hEGF的标准偏差上升较缓 ;当进样量大于 3ml时 ,hEGF的标准偏差显著上升 .在柱床高度小于 8cm时 ,hEGF的标准偏差下降较快 ;当柱床高度高于 8cm时 。

低场核磁法测定凝胶过滤介质的孔径分布

凝胶过滤介质在蛋白质、多糖等生物大分子的分离纯化过程中具有非常重要的作用,其中介质的孔径分布是决定分离纯化效果的关键因素。由于绝大部分凝胶过滤介质是软凝胶,因此很难用常规的方法如压汞法、低温氮吸附法等测定其孔径分布。本文探索了利用低场核磁共振测定凝胶过滤介质的孔径分布的方法。首先通过抽滤、自制琼脂糖凝胶块等实验确定了峰的归属,明确了介质孔内水、介质间隙水和自由水在核磁共振横向弛豫时间(T2)图谱上的分布范围;随后与逆体积排阻层析法(ISEC)测定的结果相对比,得出层析介质孔径和介质孔内水弛豫时间的关系;最后通过高斯正态拟合得到了介质的孔径分布。实验结果证实了低场核磁共振法测定凝胶过滤介质孔径分布的可行性。该法操作简单、测定迅速,并可以为其他层析介质孔径分布的测定提供参考。