葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒碱柔性脂质体包封率的条件探讨

目的研究葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒碱柔性脂质体包封率的操作条件。方法以洗脱液的紫外吸收值为指标,比较葡聚糖微型凝胶柱中的水分、离心机转速、离心时间对包封及未包封药物洗脱速度的影响。结果葡聚糖微柱采用1000r/min, 6s离心除去3mL的水后,加入的脂质体2000r/min, 5min离心,一次可将脂质体泡囊(包封的辣椒碱)完全洗脱,而游离辣椒碱不被洗脱。结论采用葡聚糖微型凝胶柱测定脂质体包封率,当控制水分、离心机转速、离心时间,不仅速度快,而且葡聚糖用量少。

葡聚糖凝胶柱色谱法测定脂质体包封率的条件筛选

目的 考察用葡聚糖凝胶法测定脂质体包封率的影响因素。方法 正交实验设计 ,筛选最优条件。结果 葡聚糖凝胶柱径高比、洗脱流速、上样量都影响脂质体与游离药物分离效果。结论 粒径为 10 0～ 30 0 μm的SephadexG 5 0最适于脂质体包封率的测定。

两种不同凝胶柱测定壳聚糖分子量结果的比较

凝胶渗透色谱法测定壳聚糖分子量 ,以葡聚糖为标准品 ,用 2种不同的凝胶柱 (PLaquagel- OH柱和 TSK G4 0 0 0 PWXL柱 )测定 4种样品的分子量及其分布 ,并经过普适标定。比较结果发现 :PL aquagel- OH柱效果稍好于 TSK G4 0 0 0 PWXL柱。两柱所得重均分子量平均偏差为 0 .17%～ 3.38% ,数均分子量的平均偏差为 0 .90 %～ 3.5 7% ,分子量分布宽度指数 1.34～ 1.5 4。

恩诺沙星可视化凝胶柱快速免疫检测方法研究

建立一种动物源性食品中兽药恩诺沙星可视化凝胶柱快速免疫检测新方法。采用活化酯法制备恩诺沙星与辣根过氧化氢酶(HRP)的偶联物作为酶标抗原。整个检测在一个标准的1 m L SPE固相萃取柱中进行,柱中包含两层:一个结合了恩诺沙星特异性抗体的凝胶检测层和一个结合了HRP抗体的凝胶质控层。将样品提取液与酶标抗原预混合后加入到检测柱中,基于抗原抗体的竞争结合反应和辣根过氧化物酶的酶促反应,根据检测柱的检测层颜色的深浅和有无来定性半定量检测恩诺沙星的含量。该凝胶检测柱的检测限为5μg/L,整个检测过程可以在10 min内完成,猪肉、牛肉、鸡肉、鱼肉、虾肉和牛奶等动物源性食品中恩诺沙星检测限为100μg/kg。该方法具有准确、灵敏、特异性好、操作简便快速、成本低等优势,适合动物源性食品中恩诺沙星残留的快速筛查。

硅胶柱与凝胶柱净化/气相色谱-质谱联用测定植物叶片中多环芳烃

建立了索氏提取-硅胶柱和凝胶柱净化/气相色谱-质谱联用（GC-MS）测定植物叶片中多环芳烃的分析方法。叶片中的多环芳烃经二氯甲烷-正己烷（体积比1∶1）索氏提取，提取液采用硅胶柱和凝胶柱两步净化（手填硅胶柱和GPC柱）后，进行GC-MS测定，根据保留时间和特征离子进行定性，内标法定量。方法检出限为0.025 1~5.80 ng/g，加标回收率为82.2%~130%，相对标准偏差不大于11%。该方法能有效去除植物叶片中的色素与油脂，适用于植物叶片中多组分多环芳烃的痕量分析，为测定植物组织内多环芳烃的含量提供了技术支撑。

苦瓜子中植物胰岛素的凝胶柱与RP-HPLC法分离

采用有机酸、醇提取 ,SephadexG 5 0凝胶柱层析、反相高效液相色谱 (RP HPLC)技术分离 ,从苦瓜子中分离出降糖多肽PA ,根据SDS PAGE电泳和氨基酸组成分析 。

应用葡聚糖微型凝胶柱与一阶导数光谱法测定辣椒碱柔性脂质体的包封率

应用葡聚糖微型凝胶柱,结合紫外一阶导数法消除背景对辣椒碱测定的干扰,脂质浓度在4%以上其包封率可达到药典规定。本法快速、简单、准确。

复方参果液对大鼠半乳糖性白内障晶状体蛋白分子量影响(Ⅱ)──尿素溶性蛋白凝胶柱分离高压液相图谱分析

目的 :探讨复方参果液防治白内障的作用机理。方法 :40日龄大鼠用D 半乳糖诱发白内障同时灌胃给药 ,剖取晶状体制备尿素溶性蛋白溶液进行凝胶柱分离高压液相图谱分析。结果 :与模型组比较 ,复方参果液可使尿素溶性晶体蛋白分子量增大 ,百分含量提高 ,而接近正常对照组。结论

Sepharose FF凝胶柱分离参数变化对蝎毒抗癌多肽纯化的影响

目的 :优选蝎毒抗癌多肽 (antineoplasticpolypeptidefromButhusmartensiivenom ,APBMV)组分Ⅲ (antineoplas ticpolypeptide ⅢfromAPBMV ,AP Ⅲ )的分离参数。方法 :采用不同长度的SepharoseFF阳离子交换凝胶柱及不同的样品洗脱速度 ,比较AP Ⅲ的分离效果。结果 :当柱长为 2 5cm ,直径为 5cm ,流速为 1 .0ml/min时 ,可分离出 6个峰 ,AP Ⅲ纯度为 89% ;分别以 0 .8,0 .5和 0 .2ml/min流速进行层析 ,可分别分离出 6 ,4,3个峰 ,AP Ⅲ相应的纯度为89% ,85 %、83%。当柱长为 1 2 .5cm ,而其他条件相同时 ,均得到 2个峰 ,相应的AP Ⅲ纯度分别为 83% ,82 % ,80 %和 78%。结论 :分离、纯化AP Ⅲ较理想参数为柱长 2 5cm ,直径 5cm ,流速 0 .8ml/min ,梯度洗脱时间 1 2 0 0min。

食品中链霉素的可视化免疫亲和凝胶柱快速检测

基于可视化免疫亲和凝胶柱(IATC)方法,建立了一种快捷、准确的检测牛奶和肉类中链霉素残留的方法.整个检测过程在固相萃取(SPE)柱中进行,柱中包含一个结合链霉素多克隆抗体的检测层和一个结合辣根过氧化物酶(HRP)抗体的质控层.将样品处理液与酶标抗原预混合后加入到凝胶柱中,根据凝胶柱中检测层颜色的变化快速筛查牛奶和肉类中链霉素的残留.整个检测过程仅需10 min完成,检出限为10μg/kg.可视化IATC法对牛奶中链霉素的检出限为40μg/kg,对牛肉和猪肉中链霉素的检出限均为160μg/kg.取牛奶、牛肉、猪肉共12件空白样品制成盲样用于检测,其结果与高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)一致.

凝胶柱净化-高效液相色谱检测食品中的苏丹红

建立了凝胶柱净化-高效液相色谱同时检测食品中苏丹红Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ的方法.样品用乙醇提取,提取液经Bio-Beads SX3凝胶柱(200 mm×10 mm i.d.)净化,用环己烷-乙酸乙酯(体积比为1:1)洗脱.采用Symmetry Shield RP18柱(250 mm×4.6 mm i.d., 5 μm)分离,以100%甲醇为流动相,流速1.5 mL/min;用二极管阵列检测器检测,检测波长478 nm.上述4种苏丹红组分在其质量浓度为0.1～10.0 mg/L时有良好的线性关系(r>0.999),方法的检测限为7～14 μg/kg;平均加标回收率为80.7% ～96.3% (添加水平为0.25,2.5 mg/kg),相对标准偏差为2.4% ～5.9% .方法灵敏可靠,能满足食品中苏丹红检测的需要.

简易凝胶柱净化-气相色谱法检测动物源性样品中残留的敌敌畏

目的建立动物源样品中敌敌畏的简易凝胶色谱净化-气相色谱检测方法。方法采用凝胶净化粉湿法装填于玻璃层析柱,制成长约15 cm、直径1 cm的简易凝胶净化柱,对样品的净化洗脱液进行分段收集,分析其中敌敌畏回收率的规律。结果最终确定4.6~25 m L体积段的洗脱液为敌敌畏的最佳洗脱体积段,乙酸乙酯-环己烷（6：4,V：V）为最优配比的洗脱溶液,凝胶柱装填3.00 g凝胶粉时净化效果最佳。选取猪肉、牛肉、鸡肉、鱼肉样品,进行确证试验,回收率和变异系数均满足精确度要求,方法检出限为0.003μg/m L,加标回收率为88.2%~100.7%,相对标准偏差为0.4%~1.2%。结论该方法快速、灵敏、准确,适合动物源性食品中敌敌畏的测定。

呋喃它酮代谢物的可视化免疫亲和凝胶柱检测分析

为了建立一种用于检测动物源性食品中呋喃它酮代谢物(AMOZ)的可视化免疫亲和凝胶柱检测方法,利用对醛基苯甲酸(CPA)对AMOZ进行衍生处理得到衍生物CPAMOZ,制备CPAMOZ完全抗原,并通过免疫小鼠获取CPAMOZ多克隆抗体,使用间接ELISA法对抗体的效价及特异性进行测定。实验采用恒温振荡法将溴化氰活化的琼脂糖凝胶分别与CPAMOZ抗体、HRP抗体偶联制得CPAMOZ抗体胶和HRP抗体胶,作为亲和凝胶柱的检测层与质控层。建立AMOZ可视化免疫亲和凝胶柱分析方法,确定了该方法在酶标抗原的稀释倍数为5000、HRP胶稀释20倍、CPAMOZ抗体胶稀释15倍的条件下,达到最佳工作状态。实验结果表明CPAMOZ多克隆抗体效价为1:64000,IC50值为2.19μg/L,具有良好的灵敏度及特异性。建立的AMOZ可视化免疫亲和凝胶检测柱方法检测限为4μg/L,动物源实际样品中AMOZ的检测限为2μg/kg。该方法快速便捷,符合我国高通量筛选食品中AMOZ的要求。

链霉亲和素突变体凝胶柱的制备及生物素修饰蛋白纯化

目的对链霉亲和素(SA)进行定点突变,降低与生物素之间的亲和力,制备SA突变体琼脂糖凝胶柱,并摸索最适洗脱条件,以达到纯化生物素修饰蛋白的目的。方法原核表达SA突变体蛋白使用Ni-NTA纯化树脂进行纯化,将SA突变体蛋白与溴化氰活化琼脂糖凝胶4FF(CNBr-activated Bestarose TM 4FF)偶联制备凝胶柱。生物素修饰蛋白与凝胶柱孵育后,以不同浓度NaOH对生物素修饰蛋白进行洗脱回收,ELISA检测SA突变体蛋白亲和力。通过Western blot法、考马斯亮蓝染色检测纯化效果。结果成功表达并纯化五种SA突变体,并制备凝胶柱。ELISA结果计算得到SA突变体对生物素修饰蛋白的亲和常数相较野生型SA均有所降低。将生物素修饰蛋白与五种凝胶柱相结合,通过Western blot法和考马斯亮蓝染色结果筛选出SA突变体M2凝胶柱可以在10 mmol/L NaOH洗脱条件下,纯化出生物素修饰蛋白,并且SA突变体M2凝胶柱能够对生物素修饰蛋白进行再次纯化。结论成功制备了SA突变体琼脂糖凝胶柱,为生物素修饰蛋白的纯化提供了可行性方案。

聚丙烯酰胺圆盘电泳后凝胶柱的保存

在HP、GC等血清型及各种酶型的电泳鉴定中,对实验结果的保存十分重要,经摸索发现,除用照相的方法外,还可将电泳染色后的凝胶柱干燥保存,现介绍如下。一、材料及方法:(1)材料:用于蛋白分离的凝胶柱十根;聚丙烯酰胺圆盘电泳后,经考马斯蓝染色、冰乙酸甲醇液脱色。凝胶浓度为百分之十,交联度二点六。

乳制品中三聚氰胺的免疫亲和凝胶柱检测方法

为建立用于检测乳制品中三聚氰胺的免疫亲和凝胶柱检测方法,本研究采用活化酯法制备三聚氰胺酶标抗原,将三聚氰胺抗体、HRP抗体分别与溴化氰活化的琼脂糖凝胶偶联制备相应的抗体胶作为检测层和质控层,方法检测限为200μg/L。选取牛奶、奶粉、发酵乳等乳制品进行检测,测得所检样品中三聚氰胺的检测限为1 mg/kg。该方法具有良好的特异性,除与环丙氨嗪存在一定的交叉反应外,与其他3种结构类似物和6种常用兽药没有交叉反应。该检测方法操作简便,结果判断容易,整个检测过程约15 min,可用作三聚氰胺现场快速检测的有效手段。

两种凝胶柱基于GPC-液相色谱法测定芥花油中16种多环芳烃

本文基于凝胶渗透色谱技术（GPC，Gel Permeation Chromatography），建立了AGPC—HPLC法检测芥花油中16种多环芳烃（PAHs）的分析方法。对比了两种不同规格（玻璃标准凝胶净化柱和不锈钢快速凝胶净化柱）凝胶净化柱对检测结果的影响。研究表明：16种多环芳烃的线性范围为1．0-10．Ong／mL，线性相关系数为0．9989～0．9999。采用玻璃标准凝胶柱净化，芥花油中16种多环芳烃的收集时间为23--53min，16种目标物在2．5，5．0ugag加标水平下的各组分回收率为81．2％～98．7％，相对标准偏差为0．88％～6．17％；采用不锈钢快速凝胶柱净化，芥花油中16种多环芳烃的收集时间为15--55min，16种目标物在2．5，5．0“gag加标水平下的各组分回收率为84．2％～105．4％，相对标准偏差为0．75％～6．03％。结果显示：两种凝胶净化柱净化均满足实验检测要求，但采用不锈钢快速凝胶柱净化，样品前处理时间更短，效果更好。不锈钢快速凝胶柱更满足现代化实验室多样、快速、高效的实验要求。

凝胶柱前处理-气相色谱法测定火腿中多种有机膦农药残留量

用乙腈萃取火腿试样中的残留农药,所得萃取液经凝胶渗透色谱柱净化后用气相色谱法(带火焰光度法检测器)测定了9种农药的残留量,用外标法定量。HP-1701型毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm,1.0μm)用于气相色谱分离,采用柱温250℃和检测器温度230℃,载气为氮气,流速为10 mL.min-1,测得三唑膦农药的测定限为2.8μg.kg-1,其它8种有机膦农药的测定限均为5μg.kg-1。用标准加入法测定回收率,9种农药的回收率均在70%以上。

卡式微柱凝胶试验在临床输血检验中的应用价值

目的探讨卡式微柱凝胶试验在临床输血检验中的应用价值。方法收集2022年1—12月沂水县人民医院收治的12例需行输血治疗患者的临床资料,并进行回顾和分析。对所有患者进行低离子凝聚胺技术与卡式微柱凝胶试验交叉配血,分析并比较两种方法的检测结果。结果卡式微柱凝胶试验的主侧和次侧符合率分别为100.00%、91.67%,低离子凝聚胺技术的主侧和次侧符合率均为83.33%,两种方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。卡式微柱凝胶试验和低离子凝聚胺技术的检验用时分别为(18.63±1.47)min、(18.48±3.65)min,差异无统计学意义(P>0.05)。卡式微柱凝胶试验的不良反应发生率为8.33%,低于低离子凝聚胺技术(16.67%),但差异无统计学意义(P>0.05)。结论临床输血时需先进行检验,卡式微柱凝胶试验应用效果理想,且安全性较高。

卡式微柱凝胶试验在临床输血检验中检验效能和符合率的应用价值

目的探讨卡式微柱凝胶试验在临床输血试验中的应用价值。方法回顾性选取2021年01月-2023年02月期间行输血治疗的120例患者的血液样本120份作为研究资料,所有患者均在入院治疗当天抽取5 ml静脉血,分别利用卡式微柱凝胶试验、低离子多胺技术进行检测,之后以患者最终输血治疗结果为金标准,对比两种交叉配血技术的交叉配血试验效率、检验效能和符合率。结果120例患者中,最终输血治疗结果为失败的有10例(8.33%),成功110例(91.67%);与低离子凝聚胺检测技术相比,卡式微柱凝胶检测交叉配血时间更短,一次性配血成功率更高(P<0.05);卡式微柱凝胶90.83%(109/120)检测成功率略高于低离子凝聚胺检测84.17%(101/120),但其对比差异无统计学意义(P>0.05);两种检测的诊断特异度均为70.00%(P>0.05);但卡式微柱凝胶敏感度、准确度均高于低离子凝聚胺检测(P<0.05);两种检验方式在主次侧符合率方面存在差异,卡式微柱凝胶符合率均高于低离子凝聚胺检测(P<0.05)。结论卡式微柱凝胶试验在临床输血检验中符合率和诊断效能较高,可提升临床输血治疗安全性。