基于凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术的聚天冬氨酸分子量测定方法的建立

目的建立利用凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术(gel permeation chromatography-multi-angle light scattering,GPC-MALS)对聚天冬氨酸分子量及分子量分布进行测定的方法。方法以市售聚天冬氨酸产品为样品,研究凝胶色谱柱的类型和样品浓度对检测结果的影响,利用GPC-MALS同时测定聚天冬氨酸的数均分子量、重均分子量和分子量分布等参数。结果采用Shodex Protein KW-803凝胶色谱柱,样品浓度为18.5 mg/m L时,可以得到较好的实验结果,聚天冬氨酸分子量和分子量分布测定的相对标准偏差分别为1.8%和0.7%。结论该方法操作简单,精密度良好,适用于聚天冬氨酸分子量及分子量分布的测定。

凝胶渗透色谱-光散射联用表征聚合物摩尔质量的实验教学改革

凝胶渗透色谱-光散射(gel permeation chromatography-light scatting,GPC-LS)联用是目前最常用的表征聚合物摩尔质量的方法之一,具有灵敏度高、结果准确等特点,在科学研究与生产实践中得到了广泛应用。“凝胶渗透色谱-光散射联用表征聚合物摩尔质量”是《高分子物理实验》课程中一个重要的教学内容。然而,目前的GPC-LS实验教学内容简单,缺乏深度。本文在该实验项目原有内容的基础上进行扩充,重新设计出多套实验项目:(1)选取商品化的聚苯乙烯为实验样品,利用GPC-LS对其摩尔质量、摩尔质量分布以及回转半径等分子结构参数进行表征;(2)选取两种分子结构参数接近的聚丙烯腈样品,借助质量微分分布曲线揭示这两种样品在摩尔质量分布中的细微差别;(3)选取一系列不同摩尔质量的聚乙二醇为实验样品,通过比较其色谱图分析摩尔质量的高低对色谱峰的影响;(4)选取3种不同的聚合物(聚丙烯腈、聚甲基丙烯酸甲酯、聚β-环糊精)样品,借助构象图对其分子链的构象进行分析。此外,本文对实验教学方法进行了改革,将被动学习转变为主动学习,提高了学生的自主学习能力。通过本实验项目的教学改革探索,使学生能更加全面地理解凝胶渗透色谱-光散射联用的原理及应用,开拓了学生的知识视野,激发了学生的学习热情,提升了实验教学效果。

凝胶渗透色谱-多角度激光散射测定聚乙二醇分子量

以一种低分子量的聚乙二醇为例,对凝胶渗透色谱-多角度激光散射法的测试原理及影响因素进行了分析。研究发现,在测定齐聚物分子量时,适当提高进样浓度有利于减少测试误差,且dn/dc值随分子量的变化对测试结果影响不大,按示差峰出峰时间和激光峰的收峰时间确定有效峰面积,以及在激光信号最强的Debye图中通过去掉偏离直线较远的点后外推θ至0°所得到的测试结果误差均较小。

凝胶渗透色谱-激光光散射法测定甲基-乙烯基-苯基硅橡胶相对分子质量及其分布

采用凝胶渗透色谱(GPC)-激光光散射(LLS)联用测定甲基-乙烯基-苯基硅橡胶(MPVQ)相对分子质量及其分布。确定测定条件如下:溶剂甲苯,测试温度25℃,流速1 mL·min^(-1),试样溶液质量浓度4 mg·mL^(-1),进样体积50μL,测定MPVQ的折光指数增量(dn/dc)为(0. 058 9±0. 002 5) mL·g^(-1)。MPVQ数均相对分子质量和重均相对分子质量测定的相对标准偏差分别为3. 97%和1. 52%,GPC-LLS法具有较高的准确度和精密度。

凝胶渗透色谱联用多角度激光光散射测定铁皮石斛多糖分子量及其分布

为研究铁皮石斛多糖的分子量及其分布,采用凝胶渗透色谱-多角度激光散射联用技术,对不同种源地铁皮石斛多糖分子量及其分布进行测定。结果表明,它们的重均分子量、多分散系数和旋转半径分别为:2.975×10^5~3.741×10^5 u、1.289~1.502和60.3~61.1 nm。该方法快速、简便,可用于测定铁皮石斛多糖的分子量及其分布,为铁皮石斛的种源优选和质量控制提供了依据。

激光光散射-凝胶渗透色谱联用系统的校准

建立了激光光散射-凝胶渗透色谱联用系统的校准方法。色谱柱为HT3+HT4型凝胶渗透色谱柱,柱温为25℃,流动相为四氢呋喃,流量为1.0 mL/min,采用聚苯乙烯作为标准样品进行试验。测定结果相对偏差的绝对值不大于10%,重复性(相对标准偏差)小于5%(n=6)。当聚苯乙烯相对分子质量为177670时,不确定度为10600(k=2)。该方法操作简便、快速,可用于激光光散射仪与凝胶渗透色谱联用系统的校准。

凝胶渗透色谱-十八角激光散射仪测定聚硅氧烷的摩尔质量及其分布

以四氢呋喃为流动相,采用凝胶渗透色谱-激光光散射法测定了聚硅氧烷的摩尔质量和摩尔质量分布,给出了该方法的实验原理、实验步骤。实验结果表明:在给定的测试条件下,聚硅氧烷的重均摩尔质量测定误差小于0.5%,数均摩尔质量和分布宽度指数误差均不大于1%,摩尔质量在10万g/mol左右,且分散度很好。该法的准确度和精密度较好,可作为常规测定聚硅氧烷摩尔质量及其分布的方法。

凝胶渗透色谱与小角激光光散射联用控制电路

本文叙述了150C ALC/CPC和KMX—6LALLS联用中遇到的四个问题,提出了三种解决方案,文中着重介绍自控电路。

凝胶色谱与多角激光光散射联用研究聚氧化乙烯的扩展效应和链构象

采用凝胶色谱与多角激光光散射联用的方法,测定了一系列不同分子量的聚乙二醇(PEG)和聚氧化乙烯(PEO)在色谱柱中的扩展效应.扩展因子随PEG/PEO分子量的增加而增大,经扩展效应改正后得到了样品的准确分子量和分子量分布.同时建立了PEO的Z均回转半径Rgz与重均分子量Mw之间的单分散标度关系:Rgz=0.0272 Mw0.56,结果表明,长链PEO在水溶液中由于排除体积效应采取溶胀的无规线团构象.

脑膜炎球菌疫苗多糖及多糖蛋白结合物分子量尺寸排阻色谱-多角度激光光散射联用检测方法的建立及验证

目的建立尺寸排阻色谱-多角度激光光散射(size exclusion chromatography-multiangle laser-light scattering,SEC-MALLS)联用测定脑膜炎球菌多糖及多糖蛋白结合物分子量的方法,并进行验证及初步应用,以期进一步提高该品种质量控制水平。方法建立SEC-MALLS联用方法检测脑膜炎球菌多糖及多糖蛋白结合物分子量,色谱条件:流动相为0.9%氯化钠溶液,色谱分离柱为Shodex OHpak LB-806 HQ(300 mm×8.0 mm,13μm),流速为0.5 mL/min,柱温为35℃。对方法的系统适用性、准确性、精密性、耐用性进行验证,并用该方法检测不同厂家来源的样品,同时与现行药典质量标准方法进行相关性分析。结果普鲁兰糖标准品除STD P-100以外,STD P-50 STD P-800重均分子量(Mw)实测值与标示值相对误差和精密度小于5.0%,可作为系统适应性样品;重复性、中间精密度RSD均不大于5.0%。多糖及多糖蛋白结合物在配制完成48 h内稳定性良好。A、C、Y、W135群多糖平均Mw分别为257.5、377.3、399.7、305.5 kDa;A、C群多糖蛋白结合物分别为6438、23360 kDa。71批多糖样品中有5批次A、C群结果超趋势,其余批次批内和批间差异均在均值±3 SD的范围以内。SEC-MALLS法与现行药典质量标准方法测定结果除Y群多糖分配系数(KD)与Mw呈一定的负相关性外,两种方法在其余多糖及多糖蛋白结合物中相关性并不显著。结论SEC-MALLS方法能直接测定脑膜炎球菌疫苗多糖及多糖蛋白结合物分子量,具有操作简单、快速、准确、能一定程度反映分子结构信息等优点,有利于提升该关键质量参数的质量控制水平。

高效凝胶色谱法同时测定眼用粘弹剂中透明质酸钠和硫酸软骨素钠的含量

样品经50mmol·L^(-1) NaH_2PO_4-0.1mol·L^(-1) NaCl混合溶液溶解后,首先采用凝胶渗透色谱与多角度激光光散射联用仪确定透明质酸钠和硫酸软骨素钠的分子量,依据分子量分布确定水凝胶色谱柱(OH pak SB-806HQ L012028与OH pak p8514-804L102028串联)为分离柱,OH pak SB-G G008146为保护柱,流动相采用50mmol·L^(-1) NaH_2PO_4-0.1mol·L^(-1) NaCl混合溶液,流量为0.5mL·min^(-1),以示差折光检测器进行测定。透明质酸钠和硫酸软骨素钠的质量浓度在0.10~1.0g·L^(-1)内与其峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.051,0.059g·L^(-1)。加标回收率在83.3%~110%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)小于2.2%。

SEC-MALLS-RI体系测定魔芋胶分子结构特性的研究

[目的]用SEC-MALLS-RI系统测定魔芋胶的分子结构。[方法]采用凝胶渗透色谱(SEC)、多角度激光光散射(MALLS)与示差折光检测仪(RI)联用技术系统测定魔芋胶的分子量、分子量分布、分子旋转半径(RMS)及其构象。[结果]魔芋胶的分子结构特性是:重均分子量(Mw)=1.040×106 g/mol,数均分子量(Mn)=9.395×106 g/mol,z-均分子量(Mz)=1.329×106 g/mol;数均旋转半径(Rn)=110.5 nm,重均旋转半径(Rw)=115.9 nm,z-均旋转半径(Rz)=129.6 nm;分散度分别是Mw/Mn=1.107和Mz/Mn=1.414。分子旋转半径RMS与分子摩尔数之间的关系曲线斜率为0.40±0.00,表明魔芋胶是一个高度紧密且具有分支结构的聚合物。[结论]建立了测定聚魔芋胶分子量及其分布的激光光散射法,结合凝胶渗透色谱,能在较大范围内准确测量聚合物的绝对分子量,且试验误差较小,重现性好。

生物合成聚γ-谷氨酸的相对分子质量表征

为了确定特定条件下聚γ 谷氨酸(γ PGA)水溶液的Mark Houwink方程参数,在参数适用范围内通过特性粘度测量,对γ PGA的相对分子质量进行快捷、可靠的估计,在对钠盐型γ PGA稀溶液的粘度特性和流变性质进行了系统考察的基础上,采用凝胶渗透色谱-激光光散射联机试验(GPC LLS)和粘度方法,研究了钠盐型γ PGA的特性粘数、分子尺寸对重均相对分子质量的依赖性;建立了γ PGA在1.20mol LNaCl水溶液中的Mark Houwink方程。提出了相对分子质量的测定方法,并对均方末端距进行了估算。较大的α值表明:γ PGA大分子即使在1.20mol L的离子强度下由于聚离子的静电相斥作用仍然在溶剂中呈现出较伸展的构象,即呈棒状结构。

丁二烯-苯乙烯嵌段共聚物的表征

采用光散射-粘度-示差多检测凝胶渗透色谱(GPC)测定了自行合成的丁二烯-苯乙烯两嵌段共聚物以及苯乙烯-丁二烯-苯乙烯三嵌段共聚物(SBS)的Mark-Houwink常数。m(S)/m(B)=3/7的两嵌段共聚物的K=0.01673,α=0.743。m(S)/m(B)=3/7的三嵌段共聚物的K=0.03912,α=0.690。考察了不同结合苯乙烯含量和不同分子量的丁二烯-苯乙烯两嵌段共聚物在四氢呋喃(THF)中的特性粘数、均方旋转半径和流体力学半径。实验表明,随着分子量的增大和苯乙烯含量的减少,丁苯两嵌段共聚物在THF溶液中的"线团"舒展程度增加。

SEC-RI-MALLS测定甘露聚糖肽分子量与分子量分布

目的:建立尺寸排阻色谱-示差折光-多角度激光光散射检测器联用(size exclusion chromatography-refractive index-multiangle laser light scattering, SEC-RI-MALLS)测定甘露聚糖肽原料药和制剂分子量及分子量分布的方法。方法:采用SEC-RI-MALLS联用技术,以0.05 mol·L^(-1)硫酸钠溶液为流动相,Shodex OHpak SB-804 HQ为色谱分离柱,在流速0.5 mL·min^(-1),柱温35℃的条件下对甘露聚糖肽分子量及其分布进行专属性、准确度、精密度、耐用性方法学验证,并与现行质量标准方法进行比较。结果:片剂辅料淀粉对测定无干扰,右旋糖酐标准品实测值同标示值的准确度相对误差<3.0%;当样品配制浓度为2 mg·mL^(-1)时精密度最好,RSD为0.40%;重现性、耐用性RSD均不大于5.0%。79批次样品采用Shodex OHpak SB-804 HQ色谱柱和TSK-GEL G4000 PWXL色谱柱进行测定,结果无显著性差异。SEC-RI-MALLS法比甘露聚糖肽国家标准方法 (GPC法)的结果平均高19 509 Da,且分子量分布更为集中。结论:SEC-RI-MALLS法无需标准品就能够测定甘露聚糖肽分子量及其分布,结果准确,耐用性好,与现行方法相比,更有利于该品种的安全性、有效性控制。

HTPB窄分布标准物质制备和相对分子质量及其分布测定

采用沉淀分级方法,以四氢呋喃作为溶剂、甲醇作为沉淀剂,将自由基聚合的宽分布HTPB样品制备成5个窄分布的标样。采用GPC-MALLS法,测定了HTPB标样的相对分子质量及其分布。实验结果表明,HTPB标样色谱峰峰形对称,峰窄,相对分子量分布均匀,分散指数D<1.3。与VPO法测定结果对照,数均相对分子量相对偏差<10%。以窄分布HTPB作为标样,采用GPC法测定了HTPB相对分子质量及其分布,获得的数均、重均相对分子质量及分散指数与GPCMALLS法结果基本一致,相对偏差<10%;数均相对分子质量与VPO法相对偏差<12%。

PGN相对分子质量及其分布测定

采用GPC-MALLS法测定了聚缩水甘油醚硝酸酯(PGN)6个窄分布标样的相对分子质量(M_r)及其分布。实验结果表明,PGN标样色谱峰峰形对称,峰窄,M_r分布均匀,分散指数D<1.12。与VPO法测定结果对照,数均分子质量(M_n)相对偏差小于6%。以窄分布PGN作标样,采用GPC法测定了PGN的M_r及其分布,获得的M_n、重均分子质量(M_w)以及分散指数与GPC-MALLS法结果基本一致,相对偏差小于4%;M_n与VPO法相对偏差小于6%。

不同直链/支链比的玉米淀粉分子质量及其构象

采用凝胶渗透色谱(GPC)和十八角度激光光散射(MALLS)技术,以二甲基亚砜为流动相测定蜡质玉米淀粉、普通玉米淀粉、直链/支链比1:1的高直链玉米淀粉(G50)、直链/支链比4:1的高直链玉米淀粉(G80)的分子质量及其分布以及在二甲基亚砜(DMSO)溶液中的均方根旋转半径和构象。结果表明:分子质量最大的是蜡质玉米淀粉,其重均分子质量达到了1.416×108g/mol,其次是普通玉米淀粉2.744×107g/mol与G501.026×107g/mol,最小的是G80的3.992×106g/mol;均方根旋转半径也是随着直链淀粉含量的增加依次减小;蜡质玉米淀粉在DMSO溶液中的构象是较为紧密的无规则卷曲型,其他3种玉米淀粉的构象均为球型。

蛋白质分子量测试方法概述

分子量是蛋白质主要的特征参数之一,近年来其测试方法发展十分迅速。该文概述了目前蛋白质分子量测试中应用最广泛的凝胶电泳法、高效凝胶过滤色谱-激光光散射法以及生物质谱技术的原理和应用发展现状等。

热处理对高温煎煮和低温酶法提制绿茶多糖的影响

采用复合酶法提取和二乙基氨基乙基(DEAE)-纤维素52(DE-52)柱层析纯化制得茶多糖复合物TPC-1;采用煎煮提取、Sephadex G-200柱层析纯化获得茶多糖(TPC)复合物TPC-2。高效液相凝胶渗透色谱-蒸发光散射检测表明,TPC-1和TPC-2经98℃水浴处理5 h后,TPC-1的主要均一性组分TPC-1a裂变为TPC-1a-1和TPC-1a-2 2个组分;圆二色(CD)谱显示TPC-1在194 nm呈现1个正Cotton效应峰,热处理后在216 nm处增加1个正Cotton效应峰;TPC-2经热处理后其中2种均一性组分TPC-2a和TPC-2b未变化,CD谱显示TPC-2在203、215和272 nm处均呈现显著的的正Cotton效应峰,经热处理后前2个峰消失。98℃水浴热处理改变了低温复合酶法提制的茶多糖复合物TPC-1溶液构象和均一性组分的分布,未改变沸水煎煮提制的TPC-2的均一性组分的分布和凝胶色谱行为,但影响了其溶液构象。