基于鼻黏膜-海马神经免疫机制探讨醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎大鼠的影响

目的基于鼻黏膜-海马神经免疫机制探讨醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎(AR)大鼠的影响。方法选择21日龄(PND21)SPF级SD大鼠40只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、中药组、西药组,每组10只。除正常组外,其余3组均采用卵清蛋白(OVA)致敏的方法构建AR动物模型。造模成功后,正常组和模型组均给予生理盐水滴鼻(50μL/次),中药组给予醒鼻凝胶滴鼻剂滴鼻(50μL/次),西药组给予布地奈德鼻喷雾剂滴鼻(20μL/次),2次/d,连续治疗12 d。采用AR大鼠行为学评分标准对大鼠进行鼻炎行为学评分;采用Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能;采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清免疫球蛋白E(IgE)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;采用苏木精-伊红染色法(HE)观察鼻黏膜组织病理变化及嗜酸性粒细胞(EOS)计数;采用免疫组化法检测海马组织非受体酪氨酸激酶Fyn、P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、神经肽Y(NPY)表达水平;采用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)检测海马组织Fyn、SP、VIP、NPY mRNA转录水平。结果(1)鼻炎行为学评分:与正常组比较,模型组、中药组、西药组治疗前鼻炎行为学评分均明显更高(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后鼻炎行为学评分均明显更低(P<0.05)。与治疗前比较,中药组和模型组治疗后鼻炎行为学评分均明显更低(P<0.05)。(2)学习记忆功能:与正常组比较,模型组平台潜伏期、游泳总路程均明显更长(P<0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间均明显更低(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后平台潜伏期和游泳总路程均明显更短(P<0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间均明显更高(P<0.05)。(3)血清IgE、TGF-β1含量:与正常组比较,模型组血清IgE、TGF-β1含量均明显更高(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后血清IgE、TGF-β1含量均明显更低(P<0.05)。(4)鼻黏膜组织病理变化及EOS计数:模型组鼻黏膜水肿,上皮细胞排列紊乱;中药组和西药组治疗后鼻黏膜水肿明显减轻,上皮细胞结构较完整。与正常组比较,模型组、中药组、西药组治疗后大鼠鼻黏膜EOS计数均明显增多(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组治疗后鼻黏膜EOS计数均明显减少(P<0.05)。(5)海马组织Fyn、SP、VIP、NPY mRNA转录水平和蛋白表达水平:与正常组比较,模型组海马组织Fyn、SP、VIP mRNA转录水平和Fyn、SP、VIP平均OD值均明显升高(P<0.05),NPY mRNA转录水平和NPY平均OD值均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,中药组和西药组治疗后海马组织Fyn、SP、VIP mRNA转录水平和Fyn、SP、VIP平均OD值均明显降低(P<0.05),NPY mRNA转录水平和NPY平均OD值均明显升高(P<0.05)。结论醒鼻凝胶滴鼻剂可改善AR大鼠鼻炎行为学和学习记忆功能,可能与通过Fyn信号通路调节鼻黏膜-海马神经免疫机制有关。

醒鼻凝胶滴鼻剂对于变应性鼻炎豚鼠鼻腔、支气管肺泡灌洗液IL-4、IL-13、TGF-β和鼻黏膜及肺组织XBP1的影响

目的观察醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎豚鼠上下气道相关的鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液白介素4(IL-4)、白介素13(IL-13)、转化生长因子-β(TGF-β)的影响,鼻黏膜及肺组织X盒结合蛋白1(XBP1)的影响,及肺组织炎症情况。方法健康普通级豚鼠60只,适应性喂养1周后,以卵清白蛋白(OVA)致敏、激发建立变应性鼻炎豚鼠模型,采用简单数字和分层随机法随机分为6组,分别为正常对照组、模型组、醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂13.76 mg/kg剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂27.52 mg/kg剂量组、雷诺考特组;10只/组。并于造模第16天开始给药。采用ELISA检测鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液IL-4、IL-13、TGF-β;用RT-PCR检测鼻黏膜及肺组织XBP1 mRNA;用HE染色评价肺组织炎症情况。结果与正常对照组比较,模型组鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液及鼻黏膜、肺组织XBP1 mRNA指标明显升高(P<0.01);与模型组比较,醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、13.76 mg/kg剂量组、27.52 mg/kg剂量组及雷诺考特组鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液的IL-4、IL-13、TGF-β,鼻黏膜的XBP1 mRNA指标明显降低(P<0.01);醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、27.52 mg/kg剂量组,雷诺考特组及肺组织的XBP1 mRNA指标降低明显(P<0.01)。HE染色显示,与正常对照组比较,模型组豚鼠肺组织气道血管周围炎症细胞浸润明显;与模型组比较,醒鼻凝胶滴鼻剂干预后,醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、13.76 mg/kg剂量组、27.52 mg/kg剂量组肺组织气道血管周围炎症细胞浸润减轻。结论醒鼻凝胶滴鼻剂可通过下调上气道包括鼻腔灌洗液、鼻黏膜等相关炎症因子的表达,减轻豚鼠鼻炎模型肺组织气道血管周围炎症,发挥治疗变应性鼻炎的作用,并能在一定程度上下调下气道相关的支气管肺泡灌洗液及肺组织相关炎症因子的表达,为醒鼻凝胶滴鼻剂在上下气道的变态反应性Th1/Th2细胞因子的作用机制研究提供了一定的实验参考数据。

醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎豚鼠Periostin、IRE1α及嗅区鼻黏膜形态学的影响

观察醒鼻凝胶滴鼻剂对AR(变应性鼻炎,allergic rhinitis)豚鼠鼻黏膜及血清Periostin(骨膜素,Pn)、IRE1α(内质网感应蛋白肌醇需求酶,1α)的影响,扫描电镜观察其对嗅区鼻黏膜形态学的影响,联合血清Ig E(免疫球蛋白E,immunoglobulin E)及变应性鼻炎豚鼠行为学评分,进行醒鼻凝胶滴鼻剂的机制研究。健康普通级豚鼠70只,OVA(卵清蛋白,Ovalbumin)致敏建立变应性鼻炎豚鼠模型,随机分为完全空白对照组;生理盐水模型组;生理盐水给药模型组,醒鼻凝胶滴鼻剂低、中、高剂量组,雷诺考特组,10只/组。观察各组行为学变化,酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清Periostin、Ig E、IRE1α;逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测鼻黏膜Periostin、IRE1αm RNA,扫描电镜观察嗅区鼻黏膜形态。结果显示:AR豚鼠模型构建成功;OVA模型组鼻黏膜Periostin m RNA表达上升(P <0. 05),鼻黏膜IRE1αm RNA及血清Periostin、IRE1α、Ig E表达也均上升(P <0. 01);高剂量醒鼻凝胶滴鼻剂给药后鼻黏膜及血清中Periostin、IRE1α、Ig E表达均显著下调(P <0. 01);OVA模型组嗅区黏膜细胞管腔萎缩,脱落、变稀,排列紊乱,组织表面粘连,见较多分泌物附着;醒鼻凝胶滴鼻剂干预后嗅区鼻黏膜细胞管腔再生,排列较整齐,分泌物减少。醒鼻凝胶滴鼻剂可下调鼻黏膜及血清Periostin、IRE1α的表达,影响血清Ig E,并能减轻炎症分泌物,促进变应性鼻炎豚鼠嗅区鼻黏膜细胞管腔再生,发挥治疗变应性鼻炎的作用,且存在一定浓度依赖,高浓度药效更佳。

醒鼻凝胶滴鼻剂治疗儿童变应性鼻炎的临床研究

目的:观察醒鼻凝胶滴鼻剂治疗变应性鼻炎(AR)患儿的临床效果。方法:选取2018年6月-2019年10月福建中医药大学附属人民医院儿科门诊确诊为AR患儿67例。按简单随机化方案分为观察组34例,对照组33例。两组性别、年龄、病程、疾病严重程度比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组采用醒鼻凝胶滴鼻剂治疗,对照组采用布地奈德鼻喷雾剂治疗,4周为1个疗程,检测治疗前后血清IgE、鼻腔分泌物嗜酸性粒细肥(EOS)计数水平,并以鼻症状总积分(TNSS)、鼻-结膜炎相关生活质量问卷(RQLQ)、治疗总有效率等作为疗效评价指标评估醒鼻凝胶滴鼻剂治疗AR的临床效果。结果:观察组治疗总有效率为97.06%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组TNSS、RQLQ评分均较治疗前明显降低(P<0.05),观察组TNSS鼻痒评分低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组鼻腔分泌物EOS计数、血清IgE水平比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组EOS计数、IgE均较治疗前明显降低(P<0.05)。观察组治疗后症状计分低于对照组(P<0.05)。结论:醒鼻凝胶滴鼻剂能减少AR患儿鼻分泌物中的嗜酸性粒细胞计数,降低IgE水平,改善患儿的鼻部、眼部等临床症状,提高患儿生活质量,值得推广应用。

基于豚鼠呼吸区鼻黏膜形态及肌醇需求酶1α蛋白表达研究醒鼻凝胶滴鼻剂干预变应性鼻炎的机制

目的观察醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎豚鼠呼吸区鼻黏膜形态及肌醇需求酶1α(IRE1α)表达的影响,探讨其治疗变应性鼻炎的可能机制。方法选取60只Hartley品系、鼠龄为2~3个月健康普通级豚鼠,雌雄各半。采用简单数字随机及性别、体重的分层随机法分为空白组、模型组、醒鼻凝胶滴鼻剂低剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂中剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂高剂量组、雷诺考特组,每组10只。除空白组外,其余组以卵清蛋白构建变应性鼻炎豚鼠模型。于造模第16天起,模型组给予生理盐水滴鼻,醒鼻凝胶滴鼻剂低、中、高剂量组分别给予6.88 mg/kg、13.76 mg/kg、27.52 mg/kg醒鼻凝胶滴鼻剂滴鼻,雷诺考特组给予20μg/kg雷诺考特滴鼻,均2次/d,连续11 d。干预结束后,取各组豚鼠呼吸区鼻黏膜进行扫描电镜观察,取鼻黏膜、肺组织采用Western blot法检测IRE1α蛋白表达情况。结果扫描电镜下模型组豚鼠呼吸区纤毛柱状上皮表面微绒毛、纤毛结构缺失,排列混乱,方向不一致,且柱状上皮细胞之间的间隙增宽;醒鼻凝胶滴鼻剂中剂量组豚鼠呼吸区纤毛传输系统有改善;醒鼻凝胶滴鼻剂高剂量组和雷诺考特组柱状上皮细胞排列较整齐,纤毛生长较好,排列有明显的方向性,并可见腺体分泌细胞。模型组豚鼠鼻黏膜、肺组织中IRE1α蛋白表达水平均明显高于空白组(P均<0.05),各给药组豚鼠鼻黏膜、肺组织中IRE1α蛋白表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),且鼻黏膜中的IRE1α蛋白表达水平降低与醒鼻凝胶滴鼻剂给药浓度呈负相关。结论醒鼻凝胶滴鼻剂可在一定程度上修复变应性鼻炎纤毛柱状上皮细胞的纤毛,其可能通过调节鼻黏膜及肺组织中IRE1α蛋白的表达发挥减轻气道炎性反应的作用。

醒鼻凝胶滴鼻剂干预儿童变应性鼻炎CD4+CD25+Foxp3+Treg的临床研究

目的观察醒鼻凝胶滴鼻剂治疗儿童变应性鼻炎及其对CD4+CD25+Foxp3+Treg的影响。方法采用随机数字表法将67例变应性鼻炎患儿分为对照组35例和观察组32例,另选取体检中心健康儿童10例为健康组。对照组应用布地奈德喷雾剂治疗,观察组应用醒鼻凝胶滴鼻剂治疗,2周为1个疗程,连续治疗2个疗程。观察治疗前后症状总分、视觉模拟量表评分以及血清IgE、CD4+CD25+Foxp3+Treg水平变化。结果观察组疗效与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前比较,对照组和观察组治疗后症状总分、视觉模拟量表评分和总IgE水平均明显降低(P<0.05),Foxp3+CD4+CD25+Treg百分率明显提高(P<0.05)。结论醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过提升CD4+CD25+Foxp3+Treg水平来调节Th1/Th2免疫平衡,从而治疗儿童变应性鼻炎。

醒鼻凝胶滴鼻剂干预儿童变应性鼻炎IL-19的临床研究

目的观察醒鼻凝胶滴鼻剂治疗儿童变应性鼻炎(AR)对IL-19的影响及AR患儿过敏原阳性情况。方法采用电脑随机法将72例AR患儿分为中药组34例和西药组38例,同时招募体检健康的儿童作为健康组。健康组不予任何干预,西药组以布地奈德喷雾剂外用干预,中药组以醒鼻凝胶滴鼻剂干预,2周为1个疗程,连续治疗2个疗程。观察3组治疗前后IL-19基因和蛋白的变化,比较AR组与健康组过敏原阳性情况。结果与治疗前比较,西药组和中药组治疗后IL-19 mRNA表达差异无统计学意义,IL-19蛋白表达明显降低(P<0.05)。AR患儿过敏原分布情况由高到低排序前5位分别是:尘螨组合、牛奶、霉菌组合、屋尘、鸡蛋。与健康组相较,AR患儿过敏原阳性率显著升高(P<0.05),与IL-19表达成正相关。结论IL-19参与了变应性鼻炎的发病,醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过下调IL-19而抑制STAT信号通路,进而抑制AR免疫炎症反应,从而发挥临床疗效。

氯马斯汀凝胶滴鼻剂的制备和稳定性

目的:设计一种治疗过敏性鼻炎、过敏性皮肤病的氯马斯汀凝胶滴鼻剂的处方和制备工艺，建 立 制剂的质量标准，并研讨其稳定性。方法:以PVA作为凝胶基质；采用分光光度法测定含量；加速试验法考察制剂的稳定性。结果:制剂均匀、分散性好。建立的分析方法不受辅料的干扰，准确测定含量。结论:氯马斯汀凝胶滴鼻剂的制备工艺简单，易于生产。

复方氧氟沙星凝胶滴鼻剂的制备及质量控制

目的:研究复方氧氟沙星凝胶滴鼻剂的制备及质量控制。方法:确定制剂的组成,采用紫外分光光度法以及旋光光度法测定含量。结果:以甲基纤维素为空白胶体,氧氟沙星,盐酸麻黄碱为主要原料药制成的复方氧氟沙星凝胶滴鼻剂,制备工艺简单,质量控制的方法可靠。结论:本品局部用药时不易流失,药效时间长,是治疗鼻炎较理想的制剂。

醒鼻凝胶滴鼻剂治疗儿童变应性鼻炎30例

目的探讨醒鼻凝胶滴鼻剂治疗儿童变应性鼻炎的临床疗效。方法选取2019年4月—2021年1月就诊于福建中医药大学附属第三人民医院儿科及耳鼻喉科门诊的变应性鼻炎患儿60例,按就诊时间顺序随机分为对照组和观察组各30例。对照组给予糠酸莫米松鼻喷雾剂喷鼻,观察组给予醒鼻凝胶滴鼻剂滴鼻,连续治疗28 d后比较2组疗效、治疗前后症状体征积分以及治疗后6个月内复发次数。结果2组总有效率比较无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,治疗后2组症状体征积分均明显降低(P<0.05),治疗后2组症状体征积分比较无统计学意义(P>0.05);观察组复发次数明显低于对照组(P<0.05)。结论醒鼻凝胶滴鼻剂治疗儿童变应性鼻炎能明显改善患儿的鼻部症状、体征,降低复发次数。

醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎模型大鼠鼻黏膜Fyn-STAT5信号通路的影响

目的探讨中药醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎(AR)的影响及可能机制。方法 52只大鼠随机分为正常组、模型组、醒鼻凝胶滴鼻剂组和布地奈德组各13只。除正常组外其余各组大鼠以腹腔注射卵清白蛋白(OVA)致敏和鼻腔滴OVA溶液激发,建立AR模型。于第7次致敏后第2天开始,醒鼻凝胶滴鼻剂组大鼠双侧鼻孔滴醒鼻凝胶滴鼻剂50μl,布地奈德组滴布地奈德鼻喷雾剂50μl,正常组和模型组滴等量生理盐水,每日2次,连续12天。实验结束后对各组大鼠进行行为学评分(喷嚏、鼻痒和流涕),HE染色观察鼻黏膜病理并进行嗜酸性粒细胞计数,检测大鼠鼻黏膜Fyn、信号转导和转录激活因子5(STAT5)蛋白含量和CD19、CD23水平,以及血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素10(IL-10)含量。结果与正常组比较,模型组大鼠行为学评分,嗜酸性粒细胞计数,血清TGF-β1、IL-10含量,鼻黏膜Fyn蛋白表达、CD19、CD23水平均升高,STAT5蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,醒鼻凝胶滴鼻剂组和布地奈德组上述各指标均改善(P<0.05或P<0.01),且醒鼻凝胶滴鼻剂组和布地奈德组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过防止IgE与靶细胞结合,减少Fyn被磷酸化,减少炎症介质的释放,从而改善AR的喷嚏、鼻痒和流涕症状。

醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎豚鼠鼻黏膜成纤维细胞Fyn-STAT5信号通路的影响

目的:通过观察醒鼻凝胶滴鼻剂干预变应性鼻炎(AR)豚鼠鼻黏膜成纤维细胞对Fyn-STAT5信号通路的影响,进一步阐明醒鼻凝胶剂治疗AR可能的作用机制。方法:体外分离培养AR豚鼠鼻黏膜成纤维细胞并进行鉴定;将成纤维细胞分为正常组、模型组、TGF-β1组、醒鼻剂组和雷诺考特组,分别检测各组成纤维细胞中Fyn-STAT5信号通路及相关因子的基因和蛋白变化。结果:细胞鉴定结果显示,F3代成纤维细胞波形蛋白表达呈阳性。MTT检测结果提示,经25ng/m L TGF-β1干预24h后,细胞活力增长最明显。Real-time PCR和Western blot检测结果显示,模型组中Fyn m RNA及蛋白和SCF m RNA高表达(P<0.01),IL-10 m RNA和STAT5蛋白呈现低表达(P<0.01);与模型组比较,3个给药组干预12、24h后,Fyn m RNA及蛋白、SCF m RNA的表达均显著降低,IL-10 m RNA、STAT5蛋白显著升高(P<0.01,P<0.05),干预48h后,酸鼻剂组及雷诺考特组IL-10 m RNA仍明显升高(P<0.01)。结论:醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过降低Fyn和SCF表达,同时上调STAT5和IL-10,从而抑制Fyn-STAT5信号传导通路,减轻AR成纤维细胞免疫反应。

清宣醒鼻法对儿童变应性鼻炎转录组学的影响

目的 探讨清宣醒鼻法对儿童变应性鼻炎(AR)转录组学的影响。方法 纳入福建中医药大学附属人民医院儿科AR患儿20例,采用醒鼻宣窍汤内服配合醒鼻凝胶滴鼻剂滴鼻治疗4周,每隔1周进行AR症状评分以评估疗效,治疗前后收集血液标本进行转录组测序(RNA-seq),筛选有差异的mRNA、lncRNA、cirRNA,再进一步扩大样本进行qPCR定量验证。结果 筛选出3 776个差异mRNA,上调基因1 918个,下调基因1 858个;筛选出541个差异lncRNA,上调基因244个,下调基因297个;筛选出683个差异cirRNA,上调基因337个,下调基因346个。qPCR验证结果显示,治疗后Akt1、BCL2L1、CD36、EP300、PSMA3、PSMD6、SNW1及TLE4等基因表达水平较治疗前明显下降(P<0.05),HDAC11、MAPK1、MYC及TLR1等基因表达水平较治疗前明显升高(P<0.05)。结论 Akt1、BCL2L1、CD36、EP300、HDAC11、MAPK1、MYC、PSMA3、PSMD6、SNW1、TLE4及TLR1等基因可能参与AR的慢性炎症反应,并且可能成为清宣醒鼻法治疗AR患儿的药物作用关键靶点。

疏风醒鼻法对变应性鼻炎大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响

目的:研究疏风醒鼻法对变应性鼻炎(AR)大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响。方法:24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组。观察大鼠体质量变化情况,评估AR行为学评分,HE观察鼻黏膜病理改变,免疫组化检测鼻黏膜白细胞介素-4(IL-4)、信号转导及转录激活因子(STAT)5、STAT6、GATA3表达,ELISA测定血清IgE、IL-4水平,RT-PCR检测鼻黏膜组织中STAT5、STAT6、GATA3 mRNA表达,Western Blot检测鼻黏膜组织中IL-4、STAT5、STAT6、GATA3蛋白表达。结果:与模型组比较,治疗后中药组大鼠体质量显著改善(P<0.05),AR行为学评分降低(P<0.01),鼻黏膜病理改变减轻,鼻黏膜组织中IL-4、STAT5、STAT6、GATA3表达均下降(P<0.05,P<0.01),血清IgE、IL-4水平均降低(P<0.01),鼻黏膜组织STAT5、STAT6、GATA3 mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。结论:疏风醒鼻法能够显著改善AR大鼠鼻黏膜炎性症状,其作用机制可能和调节Th1/Th2免疫平衡及相关细胞因子关系密切。