佛波酯对人胃癌细胞Ha-ras基因启动子及启动子结合蛋白的影响

目的探讨佛波酯(PMA)对人胃癌细胞BGC-823 Ha-ras基因启动子活性及启动子结合蛋白活性的影响。方法通过RT-PCR和运用自行构建的真核表达载体prasEYFP转染细胞进行荧光细胞检测,并应用凝胶电泳移动检测S、outhwestern blotting等方法检测PMA(100μg/L)处理BGC-823细胞72和96 h后,对Ha-ras基因表达水平、Ha-ras基因启动子活性以及对Ha-ras启动子结合蛋白的影响。结果经PMA(100μg/L)处理72和96 h,与未处理细胞相比,BGC-823细胞中Ha-ras基因表达显著降低,Ha-ras基因启动子活性分别被抑制65.2%和71.8%;同时两个Ha-ras启动子结合蛋白活性也显著降低,经检测,其分子量分别约为18 kD,35 kD。结论PMA长期处理通过降低人胃癌细胞中Ha-ras启动子结合蛋白活性使Ha-ras启动子活性被抑制,从而在转录水平上调节Ha-ras基因表达。

低剂量电离辐射诱导转录因子NF-κB活化及其信号通路的实验研究

目的 研究低剂量电离辐射对转录因子NF κBDNA结合活性的影响 ,探讨NF κB结合活性信号传导通路的机理。方法 采用凝胶电泳移动变化分析及免疫组织化学的方法检测了X射线照射后EL 4细胞NF κBDNA结合活性的时程变化及p65核转位、IκBα水平的变化 ,同时用脂质体介导的瞬时转染法将空质粒和NF κB 荧光素酶表达质粒转染到NIH3T3细胞内 ,并用PKC信号通路阻断剂CalphostinC处理 ,检测受照后其荧光素酶的表达变化。结果 0 0 75GyX射线照射可诱导NF κB、p50 p65和p50 p50活性增强 ,而前者活性增强更明显。这种转录激活能力的增强 ,涉及到辐射诱导的p65核转位和IκBα水平的变化 ,表现为受照后p65亚基核阳性率明显升高 ,而IκBα水平的变化正相反 ,在照后 4h分别达到峰值和低谷。而且PCK信号通路阻断剂CalphostinC可降低 0 0 75Gy照射对NF κB的活化效应。结论 低水平照射诱导NF κB的迅速活化 ,而且可能通过PKC通路 ,进而调节细胞因子等特异基因的表达 ,促使免疫功能增强 ,这可能是低剂量辐射兴奋效应的机理之一。