蛋白质凝胶电泳银染色法的改进

目的探索一种快速、灵敏的蛋白质凝胶电泳银染色方法。方法对蛋白质凝胶电泳银染色过程中的多种因素进行了实验探索,在此基础上探索出一种改良的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色法。结果改进方法灵敏度为CoomassieBrilliantBlueR-250法的100倍以上,对牛血清白蛋白的检测限在0.5ng以下,整个染色过程不超过60min,染色重复性好。结论改进后的方法比以前使用的方法简便、快速、灵敏、成本相对低廉。

几种双向凝胶电泳蛋白质检测方法的比较

本研究对蛋白质染色法进行比较和分析,以求获得满足蛋白质组研究所需的适宜的蛋白质检测法。实验采用2-D电泳分离急性早幼粒白血病细胞株NB4的全蛋白及1-D电泳分离蛋白质分子量标准物,从蛋白质检测的灵敏性、质谱兼容性、操作的简便性等角度,比较了传统考马斯亮蓝染色法、胶体考马斯亮蓝染色法、改良考马斯亮蓝染色法和银染法4种蛋白质着色法对凝胶分离蛋白质的检测影响,探讨了影响蛋白质染色与鉴定的影响因素。结果显示,银染检测灵敏度最高,但质谱鉴定相容性差,鉴定率近10%;改良考马斯亮蓝染色法检测灵敏度也高,可达4ng/spot,质谱鉴定率可接近55%。结论:改良考马斯亮蓝染色法的蛋白质检测灵敏度高,与质谱兼容好,能满足蛋白质组研究需要。

检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的3种染色方法比较

用考马斯亮蓝染色、银染色、铜染色等 3种方法对同一种蛋白质染色的灵敏度、快速性进行比较 ,得出 3种蛋白质染色方法的优缺点 。

凝胶上蛋白质染色方法研究进展

凝胶电泳是分离蛋白质及多肽的一种强有力的生化分析工具。而蛋白质染色在凝胶电泳系统中则是一个重要的组成部分，随着蛋白质组学的飞速发展，凝胶蛋白质染色技术已成为衔接二维电泳和下游质谱分析的关键环节。目前，常用的凝胶上蛋白质染色方法主要有染料染色法、银染法、负染法和荧光染色法。本文对近几十年来在凝胶上蛋白质染色技术方面所取得的进展和突破进行总结，并对未来的发展方向做出展望。

THP抗体ABC免疫染色法鉴别尿中红细胞来源

目的鉴别血尿来源，提高出血部位的诊断率。方法利用ＡＢＣ免疫染色法观察了１４８例血尿标本中红细胞表面ＴＨＰ（Ｔａｍｍ－ＨｏｒｓｆａｌＰｒｏｔｅｉｎ）含量，同时与红细胞形态学法进行了对比。结果肾小球血尿（６９例）红细胞ＴＨＰ染色阳性率大于７０％，非肾小球性血尿（７９例）阳性率小于３０％。ＴＨＰ免疫染色正确率为９５．２％，形态学检验的正确率为８９．９％，二者总符合率为９２．５％。结论ＴＨＰ抗体ＡＢＣ免疫染色法能较客观的鉴别血尿来源。

SDS—PAGE的蛋白质染色方法

在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中,常用考马斯亮蓝或硝酸银给凝胶中的蛋白质条带染色,这两种方法是当前电泳染色中的主要方法,应用广泛.最近几年,又出现了新的染色方法—曙红Y染色法和尼罗红染色法.四种染色法各有特点.现把四种染色法介绍如下,以供同行们染色时参考与选择.1 考马斯亮蓝染色法考马斯亮蓝染色法是SDS-PAGE中蛋白质带染色的常规方法.该法重复性好,但灵敏度不高,检出下限约为0.1μg的蛋白质,样品中每种蛋白质的浓度应为20～30ng/μl.考马斯亮蓝染色法的染色强度依赖于蛋白质的特性.碱性蛋白质、低分子量蛋白质在醇、酸固定时容易从凝胶中洗脱下来.用此染色法不能使糖蛋白染色.

微卫星PCR凝胶电泳染色方法的比较

本研究采用水平板琼脂糖凝胶和垂直板聚丙烯酰胺凝胶分别对微卫星PCR产物进行电泳分离,利用硝酸银染色法和荧光染料染色法染色,从染色背景、染色时间及分辨率角度对不同凝胶电泳分离及染色方法进行比较,探讨微卫星PCR两种凝胶电泳及不同染色方法的特点及适用性。结果显示,常规银染法较快,染色液可重复利用,是一种经济实用的染色方法,但操作繁琐,染色液含有甲醛,具有一定毒性。无毒的GelRed荧光染料染色速度快,操作简单,是一种比较成功的凝胶电泳染色法。

P_(21)^(ras)在人宫颈癌中的表达及其临床意义

作者以P_(21)单克隆抗体为探针,应用免疫组化ABC法、凝胶电泳ABC染色及ELISA定量分析对宫颈癌、慢性宫颈炎及正常宜颈组织进行了P_(21)^(ras)表达的研究。结果表明:宫颈癌呈阳性表达,并与癌细胞的分化程度及病理类型有关,其阳性率为72.8%(51/70例);30例慢性宫颈炎仅2例阳性;正常宫颈无阳性表达。凝胶电泳ABC染色,在宫颈癌组织中呈现一条与P_(21)单克隆抗体呈阳性反应,分子量为21kd的区带,进一步证明宫颈癌中的过量表达确为P_(21)^(ras)蛋白质。ELISA定量分析显示,宫颈癌中P_(21)蛋白质含量显著高于炎症及正常宫颈组织。

抗骨肉瘤单克隆抗体2G10与骨源性肿瘤组织的免疫组化反应研究

用本室建立的１株抗人骨肉瘤组织的杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体２Ｇ１０进行ＡＢＣ法染色，对骨肉瘤和２０种其它肿瘤组织，以及２０余种正常人体组织进行了免疫组织化学定位研究。发现除了对部分骨源性肿瘤，尤其骨肉瘤有阳性反应外，对其它肿瘤均显示阴性反应；与正常成人以及胎儿的相应组织无交叉反应。

姜黄素对人白血病K562细胞凋亡的影响

Ｋ５６２细胞对多种化疗药物诱导凋亡具有抗性，本文以ＡＯ／ＥＢ染色法、细胞分光光度术、ＤＮＡ凝胶电泳及电镜观察等方法，发现姜黄素可显著诱导Ｋ５６２细胞凋亡，提示该药对治疗慢性粒细胞性白血病可能有价值。

大黄素对人胃癌细胞MKN45增殖抑制及诱导凋亡的研究

目的:研究大黄素(Emodin)对人胃癌细胞MKN45增殖及诱导凋亡的作用。方法:用噻唑蓝(MTT)法观察Emodin对MKN45的生长抑制作用;用DNA Ladder凝胶电泳法、荧光染色法、流式细胞仪法分析Emodin的诱导凋亡作用。结果:与对照组相比,Emodin能明显抑制MKN45细胞的生长且与浓度、时间呈依赖性,其IC50(48小时)为(47.5±0.3)μmol/L;Emodin处理胃癌细胞后,DNA凝胶电泳结果显示呈明显的梯状条带;吖啶橙(AO)染色观察示细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成;流式细胞仪分析Emodin能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2/M期阻滞。结论:Emodin对人胃癌细胞MKN45有明显的生长抑制作用,且该作用与诱导细胞凋亡有关。

喉癌组织中抑癌基因PTEN的表达及意义

目的检测抑癌基因PTEN在喉癌组织的表达情况,探讨PTEN与喉癌发生发展之间的关系。方法采用免疫组织化学SABC染色法观察正常喉黏膜和喉癌组织中PTNE蛋白的表达,并比较分析其与肿瘤生长部位、病理分级、临床分期和淋巴转移的关系。结果PTNE在喉癌组织的表达阳性率(52.3%)明显低于正常喉黏膜组织的表达阳性率96.7%,(P<0.05);、期喉癌(71.4%、63.3%)PTEN蛋白表达阳性率又明显高于、期喉癌(25.0%、22.2%),(P<0.05);声门型喉癌(65.8%)明显高于声门上型和声门下型喉癌(34.8%、25.0%),(P<0.05);高分化喉鳞癌(88.0%)明显高于低分化喉鳞癌(37.5%、18.8%),(P<0.05);N0喉癌(78.4%)明显高于N1、2喉癌(17.9%),(P<0.05)。结论PTNE在喉癌的发生及发展过程中有表达缺失,缺失程度与临床分期、生长部位、病理分级和淋巴转移有相关性。

抗入肝细胞癌单克隆抗体的产生及其相应抗原P60的免疫组化定位研究

本文用肝癌手术标本,制备细胞悬液,免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用ABC染色法筛选单克隆抗体,获得特异性较好的杂交瘤-HAb_(18),抗体亚类为小鼠IgG1,抗原经亲和层析获得,分子量为60KD,过碘酸-Schiffs染色阴性,脂蛋白电泳阴性,PI:8.2。肝癌免疫组化染色阳性率为75％。

连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制与诱导凋亡作用的观察

目的：研究连花清瘟胶囊抗肿瘤的药理作用。方法应用MTT法检测连花清瘟胶囊对乳腺癌 MCF－7细胞增殖的抑制程度，AO／EB双荧光染色法检测细胞凋亡形态，DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞 DNA 片段。结果在浓度为200～2667μg· mL －1内，连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF－7细胞的增殖有显著的抑制作用，其抑制作用随药物浓度的增加而增强，对MCF－7细胞增殖抑制率由10．50％增加到43．83％，与对照组比较呈显著差异性（P＜0．05vs正常组）。连花清瘟胶囊明显影响乳腺癌MCF－7细胞的染色质，发生固缩等凋亡形态的变化及细胞凋亡的 DNA梯带形状。结论连花清瘟胶囊具有抑制乳腺癌细胞增殖和诱导其凋亡的抗肿瘤的药理作用。

短期二氧化硫吸入对小鼠免疫器官的损伤作用

目的 探讨短期二氧化硫较大剂量染毒对小鼠免疫器官的影响。方法 用 5 6,112 ,168mg/m3二氧化硫分别对小鼠连续染毒 7d ,用HE染色法观察二氧化硫对小鼠脾脏组织结构的影响 ,用DNA凝胶电泳法和流式细胞技术观察二氧化硫吸入对小鼠脾脏细胞凋亡的影响。结果 (1)用HE染色法各剂量组均未观察到脾脏结构有明显改变 ;(2 )DNA凝胶电泳分析在 168mg/m3组可见明显DNAladder;(3)流式细胞分析显示高剂量染毒组的小鼠脾细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性 ,P <0 0 5。结论 短期二氧化硫吸入对小鼠脾脏的组织学结构影响不明显 ,但在剂量达到一定水平时可能引起脾细胞凋亡加速 。

长白落叶松三种等位酶遗传型初步分析

长白落叶松三种等位酶遗传型初步分析张军丽（中国科学院沈阳应用生态研究所，沈阳１１００１５）本文采用淀粉凝胶电泳法，在酶水平上，利用“水平切片染色法”分析了长白落叶松（Ｌａｒｉｘｏｌｇｅｎｓｉｓ）自然群体单株采集种子胚乳的三种等位酶的遗化变化情况。对苹...