凝胶渗透色谱-光散射联用表征聚合物摩尔质量的实验教学改革

凝胶渗透色谱-光散射(gel permeation chromatography-light scatting,GPC-LS)联用是目前最常用的表征聚合物摩尔质量的方法之一,具有灵敏度高、结果准确等特点,在科学研究与生产实践中得到了广泛应用。“凝胶渗透色谱-光散射联用表征聚合物摩尔质量”是《高分子物理实验》课程中一个重要的教学内容。然而,目前的GPC-LS实验教学内容简单,缺乏深度。本文在该实验项目原有内容的基础上进行扩充,重新设计出多套实验项目:(1)选取商品化的聚苯乙烯为实验样品,利用GPC-LS对其摩尔质量、摩尔质量分布以及回转半径等分子结构参数进行表征;(2)选取两种分子结构参数接近的聚丙烯腈样品,借助质量微分分布曲线揭示这两种样品在摩尔质量分布中的细微差别;(3)选取一系列不同摩尔质量的聚乙二醇为实验样品,通过比较其色谱图分析摩尔质量的高低对色谱峰的影响;(4)选取3种不同的聚合物(聚丙烯腈、聚甲基丙烯酸甲酯、聚β-环糊精)样品,借助构象图对其分子链的构象进行分析。此外,本文对实验教学方法进行了改革,将被动学习转变为主动学习,提高了学生的自主学习能力。通过本实验项目的教学改革探索,使学生能更加全面地理解凝胶渗透色谱-光散射联用的原理及应用,开拓了学生的知识视野,激发了学生的学习热情,提升了实验教学效果。

凝胶色谱-蒸发光散射检测法检测中药注射剂中吐温80的含量

目的:运用凝胶色谱-蒸发光散射检测法(GPC-ELSD)建立一种中药注射剂中吐温80检测的通用方法。方法:采用TSK gel G2000SWXL(8.7 mm×30.0 cm)色谱柱,柱温30℃;以0.02 mol.L-1醋酸铵溶液-乙腈(90∶10)为流动相,流速0.6mL.min-1,进样量20μL;采用Alltech ELSD2000ES检测器,漂移管温度110℃,氮气流速2.3 L.min-1。结果:吐温80浓度在0.5～3.1 mg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9961);吐温80的回收率范围在93.8%～99.2%之间(n=5),RSD范围在0.8%～2.8%之间(n=5);检出限为1.27μg。用该方法检测了19种78批中药注射剂,吐温80含量在0～20 mg.mL-1。结论:该检测方法灵敏、简便,专属性强,重复性好,能够满足吐温80的含量测定。

凝胶色谱-蒸发光散射检测法测定紫杉醇脂肪乳注射液中泊洛沙姆188的含量

目的：建立凝胶色谱-蒸发光散射检测法（GPC-ELSD）测定紫杉醇脂肪乳注射液中泊洛沙姆188的含量。方法：采用UltrahydrogelTM（7.8 mm×300 mm,250）水性凝胶柱,以乙腈-水（20∶80）为流动相,流速1.0 mL·min^-1,蒸发光散射器的漂移管温度为50℃,载气流速为1.9 L·min^-1,进样量20μL。结果：泊洛沙姆188浓度在0.4～1.2 mg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.9998）;定量限为0.8μg;泊洛沙姆188的平均回收率（n=9）为101.6%,RSD为0.65%;脂肪乳中的其他成分对检测没有干扰。结论：该检测方法经方法学验证,适用于紫杉醇脂肪乳注射液中泊洛沙姆188的含量测定。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定N-乙酰氨基葡萄糖中的葡萄糖和氨基葡萄糖的含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定发酵工艺来源的N-乙酰氨基葡萄糖中的葡萄糖和氨基葡萄糖的含量。方法采用Asahipak NH_(2)P-50 4E(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(80∶20)为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃;使用蒸发光散射检测器,载气为空气,气体压力为350 kPa,漂移管温度为80℃,增益为5。结果N-乙酰氨基葡萄糖与葡萄糖和氨基葡萄糖之间分离度良好,葡萄糖在76.12~304.50µg·mL^(-1)、氨基葡萄糖在124.68~498.71µg·mL^(-1)、N-乙酰氨基葡萄糖在150.15~600.60µg·mL^(-1)与峰面积线性关系良好,R^(2)均大于0.9990。结论本方法准确、简便,可用于发酵工艺来源的N-乙酰氨基葡萄糖中葡萄糖和氨基葡萄糖的检测。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定芪黄胶囊中黄芪甲苷的含量

目的:研究芪黄胶囊中黄芪甲苷含量测定的前处理方法,并建立以高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法测定芪黄胶囊中黄芪甲苷含量的方法。方法:采用溶剂提取结合中性氧化铝进行样品前处理,用HPLC法,以蒸发光散射检测器测定黄芪甲苷含量。色谱柱为Kromasil C18,流动相为乙腈-水(30∶70),流速为0.8ml/min;ELSD参数气体流速为2.0ml/min,漂移管温度为90℃;进样量为10μl。结果:黄芪甲苷进样量在0.8μg^8μg范围内呈现良好的线性关系(r=0.9 998);平均回收率为99.2%(RSD=1.2%)。结论:本试验中前处理方法能有效除去芪黄胶囊复方中杂质对黄芪甲苷的干扰,所建立的含量测定方法操作简便、快速、准确、适用范围广。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定玉屏风胶囊中黄芪甲苷的含量

建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定玉屏风胶囊中黄芪甲苷的含量。采用Phenomenex C18(4.6mm×250mmi.d.,5μm)色谱柱,柱温为35℃,以乙腈-水(35:65)为流动相,以蒸发光散射检测器进行检测。以峰面积的常用对数(Y)对进样量的常用对数(X)进行线性回归,回归方程为Y=1.6709X+14.2699(r=0.9998),线性范围为1～19μg。加标回收率为86.7%～96.2%,测定结果的RSD为0.22%(n=7)。方法准确、可靠、重复性好,可有效控制玉屏风胶囊的质量。

高效液相色谱法-蒸发光散射检测器测定安神胶囊中酸枣仁皂苷A和B的含量

目的建立安神胶囊中酸枣仁皂苷A和B含量的测定方法。方法应用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD),以YMC-PackODS柱(200mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(70∶30∶2)为流动相,流速是1.0mL/min,柱温:25℃;漂移管温度95℃,气体流速1.05L/min。结果酸枣仁皂苷A线性范围是2.47～12.34μg,r=0.9999,平均回收率为99.3%,RSD=1.89%(n=6);酸枣仁皂苷B线性范围是1.34～6.70μg,r=0.9999,平均回收率为99.3%,RSD=1.5%(n=6)。结论该方法快速简便,重现性良好,可用于测定安神胶囊中酸枣仁皂苷A和B的含量。

高效液相色谱-蒸发光散射法检测芪白平肺胶囊中3种人参皂苷含量

目的 采用高效液相色谱仪-蒸发光散射检测器（high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD）建立芪白平肺胶囊中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量测定方法.方法采用色谱柱为Hypersil ODS XB-C8柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）和Hypersil ODS XB-C18柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈为流动相A、以水为流动相B进行梯度洗脱;洗脱程序（0～40 min,A 19%;40～55 min,A 19%～40%）,流速为1.2 ml/min,柱温为30 ℃.ELSD参数优化：漂移管温度分别设为50、70、90、110 ℃,载气流量分别为1.0、1.2、1.4、1.6 L/min.结果 通过对比研究,最终采用Hypersil ODS XB-C8柱作为分析柱,漂移管温度为90 ℃,载气流量为1.2 L/min时,3种人参皂苷的含量检测结果最佳.人参皂苷Rg1、Re和Rb1的加样回收率分别为98.3%、99.1%、101.8%,RSD分别为0.67%、1.03%、1.22%.结论 所选择的色谱柱和优化的ELSD参数可准确测定芪白平肺胶囊中3种人参皂苷的含量,且重现性好.

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定静心胶囊中黄芪甲苷的含量

目的：制定静心胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法。方法：用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC—ELSD），Hypersil C18色谱柱，流动相为甲醇-水（80：20），流速为0．8mL·min^-1；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度为40℃，气压为3．5bar。结果：线性范围为0．7944～6．3552μg，回归方程Y=7．1546＋1．5638X，r=0．9996，回收率为98．35%。RSD为1．26%。结论：该方法灵敏、可靠、准确、重现性好，可作为静心胶囊的质量控制方法。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定脑络通胶囊中黄芪甲苷含量

目的采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（ELSD—HPLC）法测定脑络通胶囊中黄芪甲苷的含量。方法采用HypersilODS2色谱柱（150mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈-水（30：70），流速为1．0mL／min，柱温为25℃；蒸发光散射检测器条件，漂移管温度50cc。结果黄芪甲苷质量浓度在0．0667～0．4668g／L（r=0．9999）范围内与峰面积呈良好线性关系，平均加样回收率为100．70％（n=9），RSD=1．28％。结论该方法操作简便、准确、稳定、灵敏度高，可作为该制剂的质量控制方法。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法同时测定胆汁槟榔维B_1胶囊中鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸含量

目的建立测定胆汁槟榔维B1胶囊中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法。方法 Thermo U-3000液相色谱系统,Chromeleon TM 7工作站;ELSD 2000ES检测器,漂移管温度为105℃,撞击管关闭,增益为1;气体流速为2.0 L/min。采用Thermo C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%冰醋酸（53∶47）,流速为1.0 m L/min,柱温25℃。结果猪去氧胆酸质量浓度在21.53～258.36μg/m L（r=0.999 7）,鹅去氧胆酸在11.148～133.776μg/m L（r=0.999 5）范围内与峰面积呈良好的线性关系;猪去氧胆酸平均加样回收率为101.07%,RSD=2.49%（n=9）;鹅去氧胆酸平均加样回收率为97.10%,RSD=2.54%（n=9）。结论该法操作简便、准确、稳定、灵敏度高,可用于胆汁槟榔维B1胶囊的质量控制。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定黄七胶囊中黄芪甲苷的含量

目的:评价高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)黄七胶囊中黄芪甲苷的含量测定。方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(32∶68)为流动相;蒸发光散射检测器;柱压11.2~12.3 MPa;流速:1.0 m L/min;柱温:室温。理论塔板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4 000;峰拖尾因子为1.02。结果:HPLC-ELSD法精密度、重复性、稳定性、回收率良好。黄芪甲苷对照品进样量在1.0528~10.528μg范围内线性关系良好(r=0.999 9,n=7)。结论:高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定黄七胶囊中黄芪甲苷含量是可行的。

高效液相色谱-蒸发光散射检测梯度洗脱法测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量

目的：建立高效液相色谱一蒸发光散射检测（HPLC—ELSD）梯度洗脱法测定膜荚黄芪中黄芪甲苷含量。方法：黄芪药材经甲醇-氨水（9：1，V／V）超声提取60min，确定实验条件并进行方法学考察；色谱条件：依利特Hypers订0Ds2色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相：A相为乙腈，B相为水，梯度洗脱；流速：1．0ml／min；柱温：室温；进样量：20μl。蒸发光散射检测器条件：漂移管温度：40℃，载气（空气）压力：3．5bar（1bar-10^5Pa），增益值：7。结果：黄芪甲苷的理论塔板数为214798，分离度为1．858，拖尾因子为1．011。回归方程为y：1．415X＋7．509，r=0．9994，线性范围在6．930～693．0μg／ml之间。方法学考察结果表明，日内和日间精密度的RSD均小于2．0％，48h内稳定性试验的RSD分别为1．24％，重复性试验的RSD分别为1．26％（n=5），最低检测限为0．6930μg／ml，加样回收率为97．05％，RSD-0．17％（n=3）。膜荚黄芪中黄芪甲苷的含量均符合《中国药典》标准。结论：该方法缩减了黄芪药材的前处理步骤，测定结果准确，适用于黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的研究。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法同时测定化瘀祛斑胶囊中4种柴胡皂苷含量

目的建立同时测定化瘀祛斑胶囊中柴胡皂苷a,b1,b2,d的高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法。方法色谱柱采用Agilent Zorbax Bonus-RP C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温为30℃,漂移管温度为42℃,载气为氮气(流速为2.5 m L/min)。结果样品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷b1和柴胡皂苷d进样量分别在0.0821~3.2080μg(r=0.9985),0.2673~10.4400μg(r=0.9998),0.0835~3.2600μg(r=0.9993),0.0909~3.5520μg(r=0.9997)范围内与峰面积平均值的对数值呈良好线性关系;平均回收率分别为101.61%,99.64%,95.36%,95.26%,RSD均小于2%(n=6)。结论该方法操作简单,准确度高,专属性强,可用于化瘀祛斑胶囊中4种柴胡皂苷的含量测定。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定藜芦中的介藜芦碱和藜芦胺

建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）测定藜芦中介藜芦碱、藜芦胺含量的方法,并对4种藜芦属药材样品进行了测定。采用的色谱柱为Kromasil C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,以乙腈和0.1%三氟乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为：0-5min,20%乙腈;5-30min,20%乙腈-40%乙腈,30-40min,40%乙腈-20%乙腈;40-45min,20%乙腈;流速为0.8mL/min;柱温为35℃;采用ELSD检测,漂移管温度为98℃,载气流速2.2L/min。介藜芦碱和藜芦胺的线性范围分别为42.05-980mg/L和43.77-1 020mg/L;平均回收率分别为99.2%和101.4%,相对标准偏差分别为1.7%和2.1%（n=6）;信噪比为3时,测得介藜芦碱和藜芦胺最低检测限分别为18.37mg/kg和21.50mg/kg。该方法快速简便、灵敏度和分离度好,适用于藜芦药材中活性生物碱的测定。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定柴胡药材中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量

目的 制定柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量测定方法。方法 用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD），Alltima C18色谱柱，流动相甲醇-水（80：20），速度0．8ml·min^-1；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度40℃，气压3.5bar。结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在1．908-19．08μg（r=0．9996）和1．804-18．04μg（r=0．9992）范围内线性关系良好，平均回收率分别为98．35％（RSD=1．26％）和97．64％（RSD=1．58％）。结论 该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现性好，可作为柴胡药材的质量控制方法。

藏药材珠芽蓼中β-谷甾醇含量的超高液相色谱-蒸发光散射检测法测定

目的测定藏药材珠芽蓼中β-谷甾醇含量,来控制珠芽蓼药材质量。方法采用超高液相色谱-蒸发光散射检测法(UPLC-ELSD)。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEHC18(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以甲醇-水为流动相,体积流量0.4 ml/min;柱温40℃;蒸发光散射检测器参数为漂移管温度40℃,载气(压缩空气)体积流量为2.5 L/min。结果β-谷甾醇在进样量0.3～3μg的范围内线性关系良好,r=0.999 7,回收率为98.1%(n=9)。结论采用UPLC-ELSD法测定藏药材珠芽蓼中β-谷甾醇的方法简便、高效、准确,可用于控制珠芽蓼药材质量,且该方法比HPLC-ELSD法测定节省时间和溶剂。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测24-表芸苔素内酯原药含量

建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）检测24-表芸苔素内酯原药含量的分析方法。在优化的ELSD条件（漂移管温度50℃、增益值10、辅助气压力350kPa）下，采用Eclipse XDB C18色谱柱（250rain×4．6mm，5μm），以V（乙腈）：V（水）=55：45等度洗脱、流速为1．0mL／min、柱温30℃时，24-表芸苔素内酯原药中的有效成分和其他组分在10min内能达到基线分离。在43．8～700．7mg／L范围内，24-表芸苔素内酯峰面积的对数与质量对数间线性关系良好，回归方程的相关系数为0．9993，相对标准偏差（RSD，n=7）为0．75％，平均回收率为99．7％。该方法简单实用，可为24-表芸苔素内酯及其他芸苔素甾醇的质量控制提供一种准确可行的检测方法。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定心脑补益口服液中黄芪甲苷含量

目的探讨心脑补益口服液中黄芪甲苷含量测定的方法。方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法,色谱柱为Shimadzu C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(32:68),流速1.0 mL/min。结果黄芪甲苷进样量在1.78～8.90μg范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.999 8,n=5);平均回收率为100.46%,RSD=1.28%(n=6)。结论所用方法快速简便、准确可靠,能有效控制心脑补益口服液的质量。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC—ELSD）法测定金银花中绿原酸及木犀草苷的方法。方法采用Chromasil C18色谱柱（4．6mm×250mm／5．0μm）为色谱柱，用乙腈（A）-0．5％冰醋酸（B）为流动相梯度洗脱，以蒸发光散射检测器检测绿原酸和木犀草苷。梯度程序为：0min（A：10％，B：90％）→16min（A：25％，B：75％）→22 min（A：50％，B：50％）；流速1．0ml·min^-1；检测器漂移管温度110℃，载气流速3．0ml·min^-1。结果绿原酸及木犀草苷的回归方程分别为：lgA=1．34lgm＋4．360，r=0．9995；lgA=1．653lgm＋5．327，r=0．9996。线性范围分别为5．0—45μg和0．4—3．6μg；平均回收率分别为99．94％（RSD=1．43％，n=5）和100、85％（RSD=1．78％，n=5）。结论该方法操作简便、结果准确，专属性强，分离效果和重现性好，可有效缩短总分析时间。为较全面控制金银花药材的质量控制提供了简便可靠的方法。