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介绍一种改进的、简便的凝胶迁移滞留试验法 被引量:8
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作者 龙友明 郑吉顺 +1 位作者 陈垦 姜英华 《放射免疫学杂志》 CAS 2004年第1期21-23,共3页
目的 :改进凝胶迁移滞留试验 (EMSA)方法 ,运用该法检测新蛋白。方法 :抽提与定量核蛋白、DNA探针标记与纯化 ,探针与蛋白质的结合、电泳及放射自显影。结果 :采用本法简便、节约、灵敏度高、图像清晰、有可比性及重复性 ,成功运用于NF-... 目的 :改进凝胶迁移滞留试验 (EMSA)方法 ,运用该法检测新蛋白。方法 :抽提与定量核蛋白、DNA探针标记与纯化 ,探针与蛋白质的结合、电泳及放射自显影。结果 :采用本法简便、节约、灵敏度高、图像清晰、有可比性及重复性 ,成功运用于NF-κB及POT蛋白的检测。结论 :此法在本实验组运用过 ,可靠 ,值得应用与推广。 展开更多
关键词 迁移滞留试验 DNA探针 定量核蛋白 NF-ΚB 自显影
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凝胶迁移阻滞法分析人类端粒酶的DNA结合特性 被引量:1
2
作者 周俊宜 周俊梅 +5 位作者 谢金卫 周世豪 杜贻鹏 谢奇峰 陶莎 罗超权 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期582-584,共3页
目的采用凝胶迁移阻滞法分析研究人类端粒酶DNA结合特性。方法以地高辛标记的人端粒序列寡核苷酸与人端粒酶提取物进行结合反应,以未参与结合反应的单纯标记寡核苷酸作为参照。实验所设的3组样品中,第一组和第二组标记寡核苷酸加端粒酶... 目的采用凝胶迁移阻滞法分析研究人类端粒酶DNA结合特性。方法以地高辛标记的人端粒序列寡核苷酸与人端粒酶提取物进行结合反应,以未参与结合反应的单纯标记寡核苷酸作为参照。实验所设的3组样品中,第一组和第二组标记寡核苷酸加端粒酶,第一组显示一条阻滞性条带,第二组显示两条条带,前方的一条与第一组条带平行,为单纯探针条带,后方的一条迁移率被阻滞,应为探针与纯化的蛋白复合体相结合的结果;第三组为标记寡核苷酸加端粒酶阴性洗涤液,只显示单一探针条带。结果只有人端粒序列寡核苷酸与人端粒酶提取物结合反应管显示特异的凝胶迁移阻滞性电泳条带。结论人端粒酶具有和端粒DNA片段结合的特性。 展开更多
关键词 端粒酶 迁移阻滞 DNA结合特性
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HA20-lys10在大肠埃希菌中的融合表达纯化和凝胶阻滞试验
3
作者 孙兴会 张宇清 +4 位作者 王霞 侯敏 谭理 李平 朱运松 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期32-35,共4页
目的 表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力。方法 用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lys10,并克隆于pET32a(+)原... 目的 表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力。方法 用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lys10,并克隆于pET32a(+)原核表达载体。将重组表达质粒pET-HA-K转化大肠埃希菌BL21(DE3),当A(Abs)_(600nm)达到0.6时,加入终浓度为1mmol/L IPTG诱导目的蛋白的表达。表达产物用亲和层析一步法进行纯化,然后用凝胶阻滞试验观察重组蛋白结合质粒的能力。结果 IPTG诱导后可获得相对分子质量约为27 000的目的蛋白,表达蛋白以可溶形式存在,占菌体蛋白20%以上。表达菌超声后,表达产物经亲和层析一步纯化后可获得纯度达85%以上目的蛋白。凝胶阻滞试验发现,纯化的重组蛋白在一定条件下可以与质粒结合,使质粒的迁移率明显改变。结论 融合蛋白HA20—lys10有望用于受体介导基因转移,以提高基因转移的效率。 展开更多
关键词 HA20-Iys10 大肠埃希菌 阻滞试验 融合基因 基因表达 基因纯化
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玉米转录因子zmCBF1的凝胶阻滞分析 被引量:3
4
作者 杨红梅 王磊 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第6期81-83,共3页
凝胶阻滞试验是分析核酸与蛋白质相互作用的有效方法,在转录因子的功能分析中得到了广泛应用。以玉米转录因子zmCBF1与顺式元件CRT的结合为例,建立了用于转录因子分析的GRA/EMSA实验体系,并对其在应用中可能出现的问题进行了分析。
关键词 阻滞实验 电泳迁移率变动实验 转录因子 顺式元件
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从非变性聚丙烯酰胺凝胶中快速高效回收DNA片段 被引量:2
5
作者 周颐 王忆平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期194-198,共5页
获得特异性的DNA是开展多种分子生物学试验的前提,具有高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化特异性DNA的首选。借助液氮对凝胶的固化作用,介绍了通过研磨破坏聚丙烯酰胺凝胶结构回收纯化DNA的方法。将通过该方法回收纯化的DNA和采用琼脂... 获得特异性的DNA是开展多种分子生物学试验的前提,具有高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化特异性DNA的首选。借助液氮对凝胶的固化作用,介绍了通过研磨破坏聚丙烯酰胺凝胶结构回收纯化DNA的方法。将通过该方法回收纯化的DNA和采用琼脂糖凝胶电泳回收纯化的DNA,经由聚丙烯酰胺凝胶电泳的进一步检测,结果显示,该方法与琼脂糖凝胶电泳回收法相比,所获得DNA的纯度高,特异性好,且效率相当。在提高DNA特异性的同时也兼具了经济高效耗时少等优点,可以广泛应用。 展开更多
关键词 非变性聚丙烯酰胺 琼脂糖 小片段DNA回收纯化 阻滞试验
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EMSA法分析STAT5信号分子与周期蛋白cyclin D1的相互作用 被引量:1
6
作者 郭德煌 邱丽玲 +3 位作者 柳晓兰 罗庆良 董波 毛秉智 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第6期31-33,共3页
利用蛋白凝胶电脉迁移率变动分析法 (EMSA)分析STAT5信号分子与周期蛋白cyclinD1的相互作用。探针位于cyclinD1启动子区的 - 2 48到 - 2 2 0之间 ,该区域包含SATAT5与cyclinD1的结合序列TTN5AA。STAT5与cyclinD1共形成a、b两条蛋白滞后... 利用蛋白凝胶电脉迁移率变动分析法 (EMSA)分析STAT5信号分子与周期蛋白cyclinD1的相互作用。探针位于cyclinD1启动子区的 - 2 48到 - 2 2 0之间 ,该区域包含SATAT5与cyclinD1的结合序列TTN5AA。STAT5与cyclinD1共形成a、b两条蛋白滞后带 ,当用点突变的探针作用时 ,仅剩下滞后带a。 展开更多
关键词 电脉迁移率变动分析 STAT5 周期蛋白D1 信号分子 相互作用 细胞 emsa
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小麦WPBF与高分子量谷蛋白基因上游Prolamin-Like box的特异结合 被引量:4
7
作者 卫晓彬 王亚楠 +3 位作者 张超 单丽伟 唐如春 范三红 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期7-15,共9页
【目的】克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础。【方法】利用RT-PCR... 【目的】克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增得到WPBF编码区,将其连接到pET-21a-MBP载体中,并分别在E.coliT7 Express和Origami B(DE3)菌株中诱导表达。依次利用Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,最后通过凝胶迁移阻滞试验(EMSA)对重组蛋白的DNA结合特性进行分析。【结果】在33℃的Origami B(DE3)菌株中表达含MBP和His双标签的重组WPBF大部分以可溶性形式存在,其表达量占细菌总蛋白的48.0%。重组WPBF和含HMW-GS上游Prolamin-Like box的两类DNA探针能发生特异结合,但重组WPBF和含"TGCAAAG"基序DNA探针的结合强度高于其和含"TGCAAG"基序DNA探针的结合。【结论】建立了优化的WPBF原核表达系统,并获得具有生物活性的重组蛋白;重组WPBF能与HMW-GS启动子来源的两种Prolamin-Like box特异性结合,但结合能力存在差异。 展开更多
关键词 小麦 WPBF 表达纯化 HMW-GS Prolamin—Like BOX 迁移阻滞试验
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棉花GhGT-2转录因子的克隆及其功能分析 被引量:4
8
作者 李月 刘晓东 +3 位作者 谢宗铭 董永梅 武冬梅 陈受宜 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第24期4872-4884,共13页
【目的】棉花是重要的纤维作物,其生长常遭受非生物逆境危害,严重影响棉花的生长和产量。Trihelix转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中扮演重要作用。克隆棉花Trihelix转录因子基因并分析其表达特性和功能,为最终利用转基因手段改良棉花... 【目的】棉花是重要的纤维作物,其生长常遭受非生物逆境危害,严重影响棉花的生长和产量。Trihelix转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中扮演重要作用。克隆棉花Trihelix转录因子基因并分析其表达特性和功能,为最终利用转基因手段改良棉花抗逆性奠定基础。【方法】通过BLAST分析比对,从棉花EST数据库中获得1个高度同源基因,通过基因序列分析,发现其属于Trihelix转录因子GT-2亚家族,命名为GhGT-2。以棉花叶片总RNA为模板,根据EST序列设计引物,利用RT-PCR结合RACE技术,获得GhGT-2的编码序列。使用MEGA5对蛋白序列及其同源序列进行多序列比对分析,并构建同源物种间系统进化树,通过SMART网站(http://smart.emblheidelberg.de/)进行蛋白结构预测。以陆地棉品种新陆早26号为研究材料,在棉花15 d苗龄时(一对真叶期),分别对其植株进行非生物胁迫和ABA处理0、1、3、6和12 h,然后采集相应时段棉苗叶片。另外采集同一品种棉花的不同发育时期的根、茎、叶、花、开花后当天胚珠以及开花后12 d(12 days post anthesis,DPA)纤维等不同组织样品,利用实时荧光定量PCR方法分析GhGT-2在棉花不同组织间的表达差异及其在低温、干旱、高盐和ABA处理下的表达模式。将GhGT-2克隆至GFP表达载体pBI221,和GAL4 DNA结合结构域载体,在拟南芥原生质体中验证GhGT-2在细胞内的定位情况和转录激活活性。利用凝胶迁移试验(EMSA)检测DNA结合元件。【结果】克隆了棉花GhGT-2的cDNA全长序列。该基因cDNA全长1 579 bp,开放阅读框为1 428 bp,编码475个氨基酸的蛋白,推导编码蛋白质的分子量为54.07 kD,等电点为8.96。SMART蛋白结构预测发现,该蛋白含有2个Trihelix家族典型的SANT蛋白结合域。系统进化树分析表明,GhGT-2属于Trihelix转录因子GT-2亚家族,与拟南芥AtGTL1、白杨PtaGTL1亲缘关系最近。实时荧光定量PCR表明,GhGT-2在棉花的根、茎、叶、花、开花后当天胚珠以及开花后12 d(12 DPA)纤维中均有表达,其中,在叶中表达量最高,在根中表达量最低。在冷胁迫下,GhGT-2除在3 h时表达量接近0 h外,在1、6和12 h的表达量均低于0 h,呈现抑制表达特征。在高盐、干旱和ABA处理3种胁迫下,GhGT-2在1 h的表达量均低于0 h,但3、6和12 h的表达量均高于0 h,表现为先抑制后上调表达特征。推测该基因可能参与棉花ABA信号通路中对逆境胁迫的抗性反应。利用拟南芥原生质体分析,GhGT-2主要定位于细胞核中,转录激活活性不明显。凝胶阻滞(EMSA)分析发现,GhGT-2可以结合GT元件GT2-Box、GT3-Box、GT-1b(BoxⅡ)和MYB元件MBS1、MRE1、MRE3、MRE4。【结论】获得棉花GhGT-2的全长cDNA序列,其编码蛋白含有2个SANT蛋白结合域,属于棉花Trihelix转录因子GT-2亚家族。在干旱、高盐和ABA逆境胁迫下,GhGT-2属于依赖于ABA胁迫响应基因调控网络,推测GhGT-2在陆地棉的非生物胁迫适应过程中可能具有重要的作用。 展开更多
关键词 棉花 Trihelix转录因子 非生物胁迫 亚细胞定位 转录激活 迁移试验
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马尾松毛虫质多角体病毒NS5蛋白的表达和功能初步分析 被引量:2
9
作者 张万菊 赵淑玲 +5 位作者 张小霞 汤显春 肖宇宙 梅春蕾 孙修炼 彭辉银 《中国病毒学》 CSCD 2006年第4期401-404,共4页
马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株第9个片段编码非结构蛋白NS5,利用pET-32a(+)载体带有组氨酸标记的重组蛋白进行表达,获得纯化的重组蛋白。利用凝胶电泳阻滞检测试验(EMSA)检测蛋白和核酸的结合作用,结果表明NS5蛋白能与病毒基因组dsRN... 马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株第9个片段编码非结构蛋白NS5,利用pET-32a(+)载体带有组氨酸标记的重组蛋白进行表达,获得纯化的重组蛋白。利用凝胶电泳阻滞检测试验(EMSA)检测蛋白和核酸的结合作用,结果表明NS5蛋白能与病毒基因组dsRNA结合。 展开更多
关键词 马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV) 原核表达 迁移阻滞试验(emsa)
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康氏木霉中调控纤维素酶形成的两个调控因子的克隆及功能性分析 被引量:3
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作者 凌敏 覃拥灵 +1 位作者 李楠 梁智群 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1808-1812,共5页
锌指蛋白ACEI和Xyr1是里氏木霉中调控纤维素酶和木聚糖酶形成的两个调控因子,它们能竞争性结合木聚糖酶基因xyn1的启动子。为进一步研究ACEI和Xyr1调控纤维素酶基因表达的机制,本研究利用PCR技术扩增康氏木霉ACEI和Xyr1 DNA结合区的基... 锌指蛋白ACEI和Xyr1是里氏木霉中调控纤维素酶和木聚糖酶形成的两个调控因子,它们能竞争性结合木聚糖酶基因xyn1的启动子。为进一步研究ACEI和Xyr1调控纤维素酶基因表达的机制,本研究利用PCR技术扩增康氏木霉ACEI和Xyr1 DNA结合区的基因序列,并使其在大肠杆菌中得到表达。凝胶迁移率移动试验表明ACEI和Xyr1的DNA结合区均可与纤维素酶基因cbh1启动子的287 bp序列特异性结合。提示ACEI与Xyr1不仅能竞争性结合xyn1启动子,也能竞争性结合cbh1启动子。 展开更多
关键词 调控因子 纤维素酶 迁移率移动试验
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圆锥小麦ramosa2的克隆及其重组蛋白的DNA结合特性分析 被引量:2
11
作者 唐如春 杨宇衡 +1 位作者 范三红 郭蔼光 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期439-446,共8页
【目的】从四倍体圆锥小麦中克隆ramosa2(TtRa2),分析其序列特征、组织表达特异性和体外活性,为阐明ramosa2与麦类作物穗形态建成关系奠定基础。【方法】利用半定量RT-PCR分析ramosa2在不同组织中的表达水平,将其重组到pET-21a-MBP载体... 【目的】从四倍体圆锥小麦中克隆ramosa2(TtRa2),分析其序列特征、组织表达特异性和体外活性,为阐明ramosa2与麦类作物穗形态建成关系奠定基础。【方法】利用半定量RT-PCR分析ramosa2在不同组织中的表达水平,将其重组到pET-21a-MBP载体并在T7 Express菌株中诱导表达。利用Amylose亲和层析柱纯化重组蛋白,通过凝胶阻滞试验对其DNA特异结合能力进行鉴定。【结果】TtRA2含有LOB和RA2结构域,属于Ⅰ类LBD蛋白家族成员。TtRa2在幼穗中高丰度表达,而在根、茎、叶、种子中未检测到表达。融合的TtRA2主要以可溶性形式存在,其表达量占总蛋白的68.6%。重组TtRA2可与包含核心序列"GCGGCG"的DNA探针特异性结合,两者形成的复合体的解离常数约为10 nmol.L-1。【结论】TtRa2参与圆锥小麦穗形态建成,其编码产物具备RA2-like转录因子的典型特征,具有类似拟南芥LOB的DNA结合特性。 展开更多
关键词 圆锥小麦 ramosa2 原核表达 LOB结构域 迁移阻滞分析
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N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍诱导共表达的蛋白基因启动子区的转录因子结合部位分析 被引量:2
12
作者 刘天婵 余应年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1953-1960,共8页
目的 :分析甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法 :用进化足迹法 ,结合转录因子数据库的搜索 ,预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的... 目的 :分析甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法 :用进化足迹法 ,结合转录因子数据库的搜索 ,预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的转录因子结合部位 ,在MNNG处理细胞中是否确实有相关转录因子的反应。结果 :预测出 11个共同存在于这些蛋白编码基因启动子区的转录因子结合部位 ,其中除已知转录因子激活蛋白 1(activatorprotein 1,AP1)在MNNG处理后被激活外 ,用凝胶阻滞试验又发现在MNNG处理细胞的核提取液中有 2个转录因子—核因子Y(nuclearfactor,NFY)和GATA结合因子 (GATAbindingfactor,GATA)的活性升高。结论 :进化足迹法可以有效地降低转录因子结合部位预测结果中的假阳性率。NFY和GATA转录因子结合部位可能参与对MNNG诱导的共表达蛋白的共调控。 展开更多
关键词 进化足迹法 转录因子结合部位 阻滞试验 甲基硝基亚硝基胍
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与大白菜温度敏感胞质雄性不育系育性转化相关的同工酶分析初报 被引量:3
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作者 张少丽 张鲁刚 +1 位作者 吉雪花 张剑 《中国农学通报》 CSCD 2005年第5期90-93,共4页
以经过低温处理发生育性转化的大白菜胞质不育系(AT系)、未经处理的不育系(A系)及对应的保持系(B系)6叶苗龄期的根,叶和花期的大、中、小花蕾为试材,采用薄层垂直板聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳的方法,分析了POD、ATP、AMY、EST同工酶。结... 以经过低温处理发生育性转化的大白菜胞质不育系(AT系)、未经处理的不育系(A系)及对应的保持系(B系)6叶苗龄期的根,叶和花期的大、中、小花蕾为试材,采用薄层垂直板聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳的方法,分析了POD、ATP、AMY、EST同工酶。结果表明:POD、ATP、AMY同工酶与大白菜不育性没有显著关系;苗期A系与B系酯酶同工酶也无差异,小花蕾差异很大,B系酶活性明显强于A系,且B系比A系多5条α-EST带,其迁移率分别为0.62、0.68、0.72、0.75、0.83等,B系比A系多4条β-EST带,其迁移率分别为0.68、0.72、0.75、0.83。A系经低温处理(9℃下处理18d)发生育性转化后,迁移率为0.83的α-EST带消失,可能与不育性转化有关。结合试验结果还对细胞质雄性不育产生的机理进行了探讨。 展开更多
关键词 胞质雄性不育系 性转化 大白菜 同工酶分析 温度敏感 聚丙烯酰胺 细胞质雄性不育 初报 相关 EST同工酶 胞质不育系 酯酶同工酶 迁移 低温处理 试验结果 POD ATP 保持系 不连续 不育性 生育 花蕾 花期 苗期
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NF-κB在冠心病中的表现 被引量:1
14
作者 王伶 胡坚 +1 位作者 刘东 苏海 《江西医学检验》 2003年第6期451-453,共3页
目的研究冠心病的病人外周血单个核细胞中NF-κB水平的变化。方法用凝胶迁移率试验(EMSA)检测冠心病患者60例和健康对照组14例静脉血单个核细胞中的NF-κB中的含量。结果冠心病组的NF-κB相对于健康对照组,明显升高,有显著性差异(31.07&... 目的研究冠心病的病人外周血单个核细胞中NF-κB水平的变化。方法用凝胶迁移率试验(EMSA)检测冠心病患者60例和健康对照组14例静脉血单个核细胞中的NF-κB中的含量。结果冠心病组的NF-κB相对于健康对照组,明显升高,有显著性差异(31.07±15.98vs4.41±3.88,P<0.01)。结论冠心病病人除了有炎症反应蛋白的增加,还有早期的炎症前细胞激动因子的转录因子NF-κB的激活。 展开更多
关键词 NF-KB 冠心病 外周血 单个核细胞 迁移试验 检测
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Zif268的锌指DNA结合区在大肠杆菌中的功能性表达
15
作者 赵志虎 胥全彬 马清钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期352-355,共4页
锌指蛋白是最大的蛋白家族 ,是识别核酸最常见的、最有效的结构元件。通过选择合适的表达载体及诱导表达条件 ,实现了小鼠转录因子Zif2 6 8的锌指DNA结合区在大肠杆菌中的部分可溶性表达。凝胶迁移率移动试验证实纯化的可溶部分锌指DNA... 锌指蛋白是最大的蛋白家族 ,是识别核酸最常见的、最有效的结构元件。通过选择合适的表达载体及诱导表达条件 ,实现了小鼠转录因子Zif2 6 8的锌指DNA结合区在大肠杆菌中的部分可溶性表达。凝胶迁移率移动试验证实纯化的可溶部分锌指DNA结合区可以特异性识别、结合其天然靶序列 ,提示锌指DNA结合区在大肠杆菌中得到了功能性表达。锌指DNA结合区在大肠杆菌中的功能性表达成功为锌指蛋白 DNA相互作用的胞内遗传筛选模型的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 锌指蛋白 可溶性表达 迁移率移动试验
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斑马鱼胸苷酸合成酶与自身mRNA的相互作用
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作者 宋春霞 牛荣丽 +2 位作者 杜长青 杨少丽 林秀坤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1321-1326,共6页
斑马鱼(zebrafish,Danio rerio)是生物学领域中公认的研究脊椎类生物的模式生物.胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)是DNA从头合成的限速酶,多年来一直作为肿瘤化疗的重要靶酶.前期的研究表明,人和大肠杆菌中TS能与自身的mRNA结合,... 斑马鱼(zebrafish,Danio rerio)是生物学领域中公认的研究脊椎类生物的模式生物.胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)是DNA从头合成的限速酶,多年来一直作为肿瘤化疗的重要靶酶.前期的研究表明,人和大肠杆菌中TS能与自身的mRNA结合,在翻译水平上具有反馈抑制自调控现象.斑马鱼作为药物模型的研究已成为热点研究领域,为了探讨斑马鱼的胸苷酸合成酶的调控规律,以及与人TS的相关性,利用原核表达,纯化获得高均一性斑马鱼TS蛋白,采用凝胶迁移研究了TS和其mRNA的体外结合,采用免疫共沉淀:RT-PCR技术研究了它们在体内的相互作用,实验结果表明,斑马鱼的TS在体内外均与自身的mRNA存在特异性的相互作用.研究说明,斑马鱼和人的TS具有高度生物学过程相关性,为构建斑马鱼抗肿瘤药理模型提供了理论基础. 展开更多
关键词 斑马鱼 胸苷酸合成酶 迁移(emsa) 蛋白质和RNA相互作用 免疫共沉淀 RT-PCR
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人LPL基因调控序列的结构特点和体内外功能研究 被引量:1
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作者 史元元 Enerb.,S 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1995年第1期10-15,共6页
在克隆了人LPL基因5′端、3′端和基因间调控序列的基础上,构建了多种含CAT报告基因的表达重组子。经对人LPL不同缺失变异型启动子功能的体内、外分析,发现在5′端序列中存在着与组织特异性表达和分化有关的Lp-α、L... 在克隆了人LPL基因5′端、3′端和基因间调控序列的基础上,构建了多种含CAT报告基因的表达重组子。经对人LPL不同缺失变异型启动子功能的体内、外分析,发现在5′端序列中存在着与组织特异性表达和分化有关的Lp-α、Lp-β,以及位于—702、—486、—666和—430区的调控结构。转基因小鼠体内的pHLPL4.0+intron和pHLPL4.0+3′,不仅呈现了很强的启动活性,而且对—4.0kb序列中的负调节区具有极好的抑制作用。 展开更多
关键词 脂蛋白脂肪酶 转基因 小鼠 DNA 迁移试验
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豚鼠气单胞菌CB101的GlcNAc利用系统及调控蛋白NagC对chiI转录的调控
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作者 盖英宝 李强 +1 位作者 王峰 王风平 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期286-291,共6页
L8和L10是豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)CB101的两株转座子突变株,突变位置发生在nagA基因,可以组成型表达几丁质酶.我们构建了基因文库,利用Southern杂交从中筛选到一个克隆子包含了三个基因:nagB、nagA和nagC.序列分析显示nagBAC的... L8和L10是豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)CB101的两株转座子突变株,突变位置发生在nagA基因,可以组成型表达几丁质酶.我们构建了基因文库,利用Southern杂交从中筛选到一个克隆子包含了三个基因:nagB、nagA和nagC.序列分析显示nagBAC的转录方向相同,而且基因的间隔仅有几个碱基.根据已有报道我们推测NagC是几丁质酶的转录调控蛋白,转座子插入nagA破坏了下游的调控蛋白基因nagC的转录和表达,从而几丁质酶成为组成型表达.我们通过构建NagC缺失突变株、凝胶阻滞迁移以及对NagC氨基酸序列的分析初步证明了NagC属于ROK(repressors,opening reading frames,and kinases)家族的调控蛋白,是chiI的转录阻遏因子. 展开更多
关键词 转座子 nagC缺失突变株 阻滞迁移 ROK 调控蛋白
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A new evaluation method of gel's dynamic sealing characteristic in porous media
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作者 吴志伟 岳湘安 +2 位作者 李立峰 张义 杨志国 《Journal of Central South University》 SCIE EI CAS 2014年第8期3225-3232,共8页
Water shutoff through injection wells is one of the most important techniques used for water injection profile control and modification in severely heterogeneous reservoirs,aiming at stabilizing oil production.It has ... Water shutoff through injection wells is one of the most important techniques used for water injection profile control and modification in severely heterogeneous reservoirs,aiming at stabilizing oil production.It has been widely reported that the effectiveness and efficiency of water shutoff using gel is mostly dependent on the gel dynamic sealing properties in the porous media.Firstly the gelation strength and gelation time of polymer gel were evaluated.Then,core flowing experiments were conducted before and after gelation in a 32 m long sand pack.In addition,water flooding core experiments were also carried out in a long core of 80 cm before and after injecting gel system to check the reliability of this evaluation method.The experimental results show that moderate-strength gel can be formed at 65 °C.According to the integrated evaluation of the plugging coefficient,plugging strength and water breakthrough time,the gel particles are capable of migrating to a distance of 7.47 m from the injection point of the 32 m long sand pack during the water injection process after gelation.Based on sands gelation status and effluent analyses,the effective migration distance of the gel particles is 4-14 m.Through the core flooding experiments using the 80 cm heterogeneous core,it is evidenced that the gel can be formed in the deep reservoir(40.63% of total length) with the plugging strength as high as 6.33 MPa/m,which leads to extra oil recovery of 10.55% of original oil in place(OOIP) by water flooding after gel treatment. 展开更多
关键词 化时间 评价方法 多孔介质 密封性能 迁移距离 岩心驱替试验 吸水剖面 强度
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甘蔗杆状病毒P2蛋白核酸结合活性分析及关键结构域鉴定 被引量:1
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作者 娄义念 梁凯莉 +2 位作者 刘靖颖 王致远 许雄彪 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1353-1363,共11页
甘蔗杆状病毒(sugarcane bacilliform virus,SCBV)是广泛分布于世界甘蔗种植区的严重危害甘蔗种植的植物病毒之一。研究SCBV编码的病毒蛋白功能对于了解该病毒致病机制及抗病育种具有重要意义。本实验室前期从云南勐海的一株Badila甘蔗... 甘蔗杆状病毒(sugarcane bacilliform virus,SCBV)是广泛分布于世界甘蔗种植区的严重危害甘蔗种植的植物病毒之一。研究SCBV编码的病毒蛋白功能对于了解该病毒致病机制及抗病育种具有重要意义。本实验室前期从云南勐海的一株Badila甘蔗中分离获得了SCBV的全长基因组序列,并开展了其开放阅读框2(open reading frame 2, ORF2)编码的未知蛋白P2的功能研究。通过原核表达SCBV P2蛋白并经体外核酸亲和结合试验分析,发现SCBV编码的P2蛋白能以序列非特异性方式与同源或异源核酸亲和结合。进一步对P2蛋白中预测的coiled-coil like domain及C-端保守的脯氨酸、赖氨酸富集区域进行缺失及点突变分析,以及凝胶阻滞试验发现,随着C-端逐步截短,P2突变体蛋白与核酸结合的活性也逐渐减弱,其C-端保守的含脯氨酸、赖氨酸的21个氨基酸(amino acids,aa)对P2蛋白与核酸结合是必需的。同时,在P2蛋白与核酸的相互作用中,coiled-coil like domain被证明是不可或缺的。进一步酵母双杂交实验证明P2蛋白能与自身互作,且P2 C-端保守的21个氨基酸及coiled-coil like domain的缺失或替换直接影响了P2蛋白的自身互作。综上所述,本研究发现SCBV编码的P2蛋白是一个序列非特异性的核酸结合蛋白,且coiled-coil like domain和C-端保守的富含脯氨酸、赖氨酸区域通过影响其自身互作而影响其核酸结合活性。研究结果为进一步深入研究P2蛋白功能奠定了基础。 展开更多
关键词 甘蔗杆状病毒 核酸结合 阻滞试验(emsa) coiled-coil like domain
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