RGD-葡激酶的凝胶过滤层析法复性及其纯化

构建的溶栓和抗栓双重功能的RGD 葡激酶突变体 (RGD Sak)在大肠杆菌中高表达 ,目的蛋白质以包涵体形式存在。为获得有活性的蛋白质 ,需要对包涵体进行变复性。利用凝胶层析方法对包涵体中RGD Sak进行复性 ,并与稀释复性法进行比较 ,发现凝胶柱复性方法具有操作周期短、简便、成本低而高效等优点。复性后蛋白质用Q SepharoseFF离子交换进一步纯化 ,纯度达 95 % ,酪蛋白凝胶板活性测定表明两种复性法得到的蛋白质比活性相当。圆二色谱测定显示两种复性法得到的蛋白质的二级结构成份和谱形一致 ,说明在两种复性过程中完成了RGD

一种新型提取SOD的方法——串联凝胶过滤层析法

目的:建立串联凝胶过滤层析法,一步即可从猪血中提取纯酶。方法:猪血中粗酶液的分离采用经典的有机溶剂(乙醇-氯仿)的方法进行。后在室温下用葡聚糖G100-G50进行柱层析,层析液用pH 7.6,0.02 mol/L-1的磷酸盐缓冲液。首次过柱就可生产出一部分纯酶。接着收集不纯的酶液,再进行第2次串联层析,就可把所有的酶液彻底纯化。结果:2次之和的酶液总产率达70%,比活性达4700 u.mg-1。结论:经聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别,该产品是高纯度的,并且高产率。

两步串联层析法纯化鼠抗人CD28单克隆抗体2F5

目的建立从小鼠腹水中纯化鼠抗人CD28单克隆抗体(mAb)2F5的两步串联层析法。方法将含mAb2F5的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换预处理后,先经固相化金属螯合亲和层析法(immobilizedmetalaffinitychromatography,IMAC)纯化,去除大部分杂蛋白,再经凝胶过滤层析法(gelfiltration,GF)精细纯化,并探讨了上样的流速和洗脱液的种类对mAb2F5纯度的影响。纯化的mAb2F5的生物学活性用3H-TdR掺入法进行分析。结果以两步串联层析法纯化的鼠抗人CD28mAb2F5的纯度大于90%,总回收率达70%。纯化的mAb2F5在体外对PBTC具有明显的促增殖作用;而且其促增殖作用的活性优于ProteinG亲和层析法(affinitychro-matography,AC)纯化所获得mAb。结论建立的两步串联层析纯化方法操作简便,所得mAb的纯度高、生物学活性好。

两步串联层析法纯化鼠抗人CD80单克隆抗体4E5

采用阴离子交换与凝胶过滤两步串联层析法，纯化了小鼠腹水来源的CD80阻断型单克隆抗体4E5。腹水样品经离心、过滤预处理后，在Tris-HCl缓冲溶液（pH8．0，50mmol／L）条件下，上阴离子交换柱对目的单抗进行捕集，采用0-0．5mol／L NaCl浓度分步洗脱；含目的单抗的洗脱馏分再上凝胶过滤柱纯化，用PB缓冲溶液（pH7．2，20mmol／L）洗脱，获得目的单抗4E5，其生物学活性高、纯度大于95％，抗体总回收率达61％。

IgG的初步分离与ELISA法效价鉴定的综合性实验设计与探索

目的设计并探索开展一个综合性实验,包含抗血清的纯化和酶联免疫吸附实验（ELISA）等知识和技能。方法用盐析法对兔抗人全血清中的Ig G进行粗分离,凝胶过滤层析法脱盐,并用自制ELISA包被板,摸索最佳包被、封闭及酶标二抗显色的条件,对分离产物进行效价和相对纯度的测定。结果 ELISA法测得抗血清分离产物的效价在1：4 000~1：8 000;分离产物中特异性Ig G纯度均高于该稀释度的抗血清。结论该实验易于实施,结果稳定易出,有效利用时间。

几种提纯RHDV方法的比较研究

运用离子交换层析法、凝胶过滤层析法和密度梯度离心法对已作初步处理的RHDV分别进行提纯,并通过血凝性鉴定、抗原蛋白含量检测、ELISA和SDS-PAGE凝胶电泳等方法检测其纯度。结果表明,通过Sephadex-200凝胶过滤层析法所提纯病毒的血凝性和蛋白浓度最高;稀释至相同的蛋白浓度之后,该法所提纯的病毒ELISA检测的OD值最大;SDS-PAGE电泳条带1条,经免疫转印分析证明,该条带为RHDV蛋白特异性条带。表明通过该法提纯的病毒,回收率最高、蛋白最纯。

蛋白聚合体的快速分析法——Superdex 200 10/300 GL的应用介绍

蛋白质在发酵和纯化过程中经常会形成聚合体．聚合体在功能上与单体存在差别且容易诱导免疫反应。国家规定生物药品中必须去除。本文主要介绍了使用凝胶过滤层析法检测和分析蛋白聚合体。

蛋白聚合体的快速分析法

蛋白质在发酵和纯化过程中经常会形成聚合体，聚合体在功能上与单体存在差别且容易诱导免疫反应，国家规定生物药品中必须去除。本文主要介绍了使用凝胶过滤层析法检测和分析蛋白聚合体。

香菇C_(91-3)菌丝发酵液中蛋白的分离纯化及其抗肿瘤机理研究

目的研究香菇C91-3菌丝体发酵液中的粗蛋白LFP91-3的分离纯化方法,提取具有抗肿瘤活性的蛋白组分,并初步鉴定其药效及特性。方法 LFP91-3经盐析、透析、Sephadex G-100凝胶过滤层析分离。用考马斯亮蓝法测定各管收集液中的蛋白浓度,依此绘制洗脱曲线,按曲线对收集液分组;用MTT比色法分别测定各组蛋白收集液对肿瘤细胞的生长抑制作用。对抑瘤率最大的一组各管收集液分别做SDS-PAGE电泳银染,取电泳条带相对较单一的峰尖部数管收集液合并,即为本实验的提取蛋白,以MTT比色法测定其对肿瘤细胞的生长抑制作用。用考马斯亮蓝法和硫酸-苯酚定糖法测定提取蛋白中蛋白和糖的比例。流式细胞仪检测提取蛋白诱导肿瘤细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率;透射电镜观察经该蛋白作用的肿瘤细胞的凋亡形态。结果 LFP91-3经分离纯化,可得Ⅰ～Ⅳ共4组蛋白峰,且第3组的收集液抑瘤率最高。SDS-PAGE电泳结果显示第3峰顶部23～26管收集液主要含有19 kDa左右的蛋白,其他分子量的蛋白含量极低。测得该蛋白中蛋白和糖比例约为3∶1。MTT法显示提取蛋白在体外能明显抑制鼠肉瘤细胞株S180细胞的生长。流式细胞仪检测结果表明提取蛋白能在体外诱导S180细胞凋亡。透射电镜下,经提取蛋白作用的S180细胞,呈明显的凋亡形态。结论粗蛋白LFP91-3经盐析、透析、Sephadex G-100凝胶过滤层析分离共得到4组蛋白,第3组对S180细胞的抑制作用最强,其中第23～26管收集液主要含有分子量为19 kDa左右的蛋白,而且含有糖成分,提示可能为糖蛋白。该提取蛋白对S180细胞的生长具有较强的抑制作用,此作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

重组产几丁质酶C工程菌包涵体的复性

将重组产几丁质酶C(Chi C)的菌体通过固定金属鳌合层析(IMAC),对目的蛋白进行初步纯化;然后采用透析法、凝胶过滤柱层析法和金属鳌合柱层析法对包涵体进行复性.结果表明,逐渐降低变性剂尿素浓度进行透析复性,酶液的酶活力为58.85μkat.L-1,比活为0.425 mkat.g-1,蛋白回收率为95.3%.使用SepHacry S-200作为复性凝胶介质复性,酶液的酶活力为30.37μkat.L-1,比活为0.620 mkat.g-1,蛋白回收率为72.9%.通过金属螯合层析法复性,酶液的酶活力为55.59μkat.L-1,比活为1.917 mkat.g-1,蛋白回收率为43.2%.

β-内酰胺酶纯化与单酰胺菌素的酶动力学研究

用离子交换层析法和凝胶过滤层析法对标准β—内酰胺酶K1,P99,TEM—1,SHV-1和β—内酰胺酶K-CAZ进行纯化,纯化倍数分别为131,43,197,50和132,在等电聚焦电泳上均呈现单一条带,达到了纯化要求。采用聚丙烯酰胺等电聚焦电泳和凝胶过滤层析法对五种纯化的β—内酰胺酶分离鉴定,测得等电点(6.54,8.62,5.41,7.60,5.50)及分子量(27000,30200,28400,

三聚氰胺单克隆抗体不同纯化方法的比较

为了建立更适用于三聚氰胺单克隆抗体的纯化方法,分别采用了硫酸铵两次沉淀法、正辛酸-硫酸铵沉淀法、凝胶过滤层析法、亲和层析法、阴离子交换层析法对三聚氰胺单克隆抗体进行纯化。对纯化后的三聚氰胺单克隆抗体的纯度、浓度、效价进行鉴定,对比不同纯化方法之间的差异。结果证明亲和层析法对于三聚氰胺单克隆抗体纯化最为适宜。由于亲和层析法纯化纯度高,快速便捷,对三聚氰胺单克隆抗体损伤小,最为推荐。研究者也可结合自身条件,参考文中数据结果,根据实验需要自行选择适合自身的纯化方法。

巨分子促甲状腺激素的筛查策略

巨分子促甲状腺激素（TSH）是TSH与抗TSH免疫球蛋白形成的大分子复合物，是一种少见的实验室干扰物，可引起TSH假性升高。为了避免误诊亚临床甲状腺功能减退症，临床遇到单纯TSH升高需考虑巨分子TSH的存在。制定巨分子TSH筛查策略是至关重要的。凝胶过滤层析法有助于发现这种罕见的物质。