凝胶过滤色谱-多角度激光散射法测定琥珀酰明胶自由氨基修饰度

琥珀酰明胶作为血浆代用品的临床疗效与其分子量分布和修饰度密切相关。本研究利用高效凝胶过滤色谱-多角度激光散射法(HPSEC-MALLS)并结合2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)衍生法,探索建立一种测定琥珀酰明胶修饰度的方法。实验利用TNBS将琥珀酰明胶衍生,通过HPSEC-MALLS测定琥珀酰明胶的分子量变化,计算出琥珀酰明胶的修饰度。实验以人血清白蛋白为模型进行了方法验证,结果表明:该方法能较好地表征人血清白蛋白在TNBS衍生过程中的分子量变化,实验值与根据其氨基酸组成计算值一致。实验在HPSEC-MALLS测定琥珀酰明胶及TNBS衍生后琥珀酰明胶分子量及分布的基础上,利用凝胶过滤色谱分子量-保留时间拟合曲线,计算得到琥珀酰明胶的自由氨基修饰度为38%。结果表明利用高效凝胶过滤色谱-多角度激光散射法结合2,4,6-三硝基苯磺酸衍生法测定琥珀酰明胶的修饰度是可行的。

β-内酰胺抗生素在Superdex peptide凝胶过滤色谱柱上的色谱行为

目的 :通过研究 β 内酰胺抗生素与Superdexpeptide凝胶介质的相互作用 ,为建立和优化 β 内酰胺抗生素中高分子杂质的分离分析方法提供理论参考。方法 :考察 8种 β 内酰胺抗生素在Superdexpeptide凝胶介质中不同色谱条件下的色谱行为 ,并与其在TSKG2 0 0 0SW亲水性多孔硅胶介质中的色谱行为比较。结果 :β 内酰胺抗生素在Superdexpeptide和TSKG2 0 0 0SW介质中的保留行为受到流动相缓冲盐组分、pH值、离子强度的影响。结论 :β 内酰胺抗生素在凝胶介质中受到分子排阻、吸附作用的共同影响 ,不能简单地以保留体积判定 β

葡聚糖凝胶过滤色谱柱法测定两种氨基酸锌螯合物螯合率的差异性

微量元素氨基酸螯合物的螯合率常用来反映微量元素氨基酸螯合物的品质,采用葡聚糖凝胶过滤色谱柱法测定蛋氨酸锌、苏氨酸锌两种氨基酸锌螯合物的螯合率,发现该法测定结果与其他测定方法分析结果一致,表明此法适用于测定蛋氨酸锌的螯合率;但测定苏氨酸锌螯合物的螯合率时,测定结果与其他测定方法分析结果不一致,结合葡聚糖凝胶过滤色谱柱法测定过程,表明此法不适用于测定苏氨酸锌的螯合率。

凝胶过滤色谱-串联质谱法测定纺织品中的烷基酚聚氧乙烯醚

建立了纺织品中烷基酚聚氧乙烯醚的凝胶过滤色谱-串联质谱(GFC-MS/MS)分析方法。纺织品样品采用加速溶剂萃取法,以无水乙醇为提取溶剂进行提取,提取液经Sep-Pak Carbon/NH2石墨化碳黑/氨基复合型固相萃取柱净化。烷基酚聚氧乙烯醚经Shodex MSpak GF-310 2D色谱柱(150×2.0 mm)分离后,在多反应监测(MRM)模式下进行串联质谱定性及定量分析。方法对壬基酚聚氧乙烯醚(NPnEO)和辛基酚聚氧乙烯醚(OPnEO)的定量限均为0.2 mg/kg,在0.2～5 mg/kg的3个添加水平范围内,NPnEO的平均回收率为84.2%～93.5%,相对标准偏差(RSD)为3.9%～7.5%;OPnEO的平均回收率为85.5%～96.1%,RSD为3.4%～8.1%。该方法能够满足纺织品中烷基酚聚氧乙烯醚的检测要求。

凝胶过滤色谱和Bradford法测定发酵类抗生素中蛋白残留量(英文)

目的 以发酵类抗生素盐酸林可霉素为例 ,建立一个快速、简单、灵敏度高的可用于发酵类抗生素中蛋白残留量控制的方法。方法 利用凝胶过滤色谱 (GFC)首先将蛋白质与抗生素分离 ,收集蛋白组分 ,再利用蛋白检测方法Bradford法 (考马氏亮兰染色法 )对残留的蛋白进行定量 ;色谱柱为SuperdexTM PeptideHR 1 0 30 ;检测波长为 2 1 4nm ;流速为 1mL·min- 1 ;流动相为 0 0 1mol·L- 1 磷酸盐缓冲液 ;进样量为 5 0 0 μL。结果 本方法蛋白 (BSA)的平均回收率大于 90 %,蛋白浓度在 0 - 1 2 μg·mL- 1 之间符合曲线方程y=- 0 0 0 2 4x2 +0 0 6 4 2x +0 0 0 2 9,r2 =0 9999;检测限为 3ng·mL- 1 (相当于盐酸林可霉素中蛋白的残留量为 7× 1 0 - 7)。结论 本方法简便 ,快速 ,灵敏 ,可以用于控制发酵类抗生素中蛋白的残留量。

HPLC凝胶过滤色谱法测定牛奶及其乳制品中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白

建立了一种基于凝胶柱高效液相色谱的分析方法,可以一次性定量分离牛奶及乳制品中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白.组分分离度达到1.0,达到基线分离,回收率大于90%,相对标准偏差0.4%~3.1%.该方法不需对样品进行离心,简化了操作程序,减少了有效成分的流失,提高了蛋白质的回收率,具有准确、灵敏和迅速等特点,可用于牛奶及其乳制品的质量控制和定量检测.

高效凝胶过滤色谱法（光电二极管阵列检测器）分离、测定巴豆毒蛋白

巴豆毒蛋白粗提液在高效蛋白柱上分离，用光电二极管阵列检测器给出光谱信号，判断所需蛋白的峰，并利用光谱图和反相高效液相色谱来确认分离峰的纯度；在高效蛋白柱上测定了巴豆毒蛋白的分子量；利用离子交个邻苯二甲醛柱后衍生法测定了巴豆毒蛋白的氨基酸含量。

QuEChERS法联合在线凝胶过滤色谱-气相色谱-质谱联用法快速测定鱼肉中16种农药残留量

目的：采用 QuEChERS 前处理方法和在线凝胶过滤色谱-气相色谱-质谱(GPC-GC/MS)联用法对鱼肉样品中的16种有机磷、菊酯和氨基甲酸酯等农药残留进行测定。方法首先用QuEChERS 方法进行样品前处理,即乙腈提取,提取溶液经脱水后离心,用分散性吸附剂去除离心提取液中的干扰基质(如油脂和色素等),然后直接进行在线GPC-GC/MS联用法分析。结果在线GPC-GC/MS系统中的GPC能弥补QuEChERS方法去除干扰物质不彻底的问题,从而降低了分析背景,改善了峰形,提高了分析结果的准确性和相关质谱图的匹配性。在加标0.01 mg/kg情况下,鱼肉样品的回收率为80%~120%,相对标准偏差(RSD)均小于20%。线性范围0.01~0.05μg/mL,相关系数0.9961~0.9998。结论本研究建立的方法步骤简单、可操作性强、仪器自动化程度高,具有检出限低、准确度高、精密度好的特点,应用于日常检测可大大降低检测成本,缩短分析周期。

凝胶过滤色谱分离大豆抗氧化肽活性的研究

利用木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽的水解液,水解液经Sephadex G-25凝胶过滤色谱进行分子量分级,根据分离图谱确定柱层析的最佳条件。在最佳条件下绘制标准曲线,并根据标准曲线判断分离组分的分子量分布。采用铁离子还原/抗氧化能力测定法(FRAP)、二苯基苦基苯肼法(DPPH)以及金属铜离子螯合能力测定法研究不同分子量大豆肽的抗氧化能力,并对抗氧化活性最佳的肽段进行进一步的HPLC分离和氨基酸组成分析。

SDS-PAGE电泳和高效凝胶过滤色谱法研究人参蛋白热稳定性

目的研究人参蛋白在不同加热温度及时间下的热稳定性。方法采用中性缓冲液抽提和硫铵分级沉淀法提取人参蛋白,在不同加热温度及时间条件下,对人参蛋白进行SDS-PAGE电泳和高效凝胶过滤色谱分析。结果人参蛋白随着加热温度的升高而发生聚集和解聚;在50℃时,人参蛋白会形成可溶性的大分子聚合物,这一聚合物的浓度随加热时间的延长而不断升高。结论人参中各种蛋白亚基的热敏感性各不相同。

人工伴侣与凝胶过滤色谱耦合作用促进高浓度溶菌酶复性研究

研究了人工伴侣系统,即十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β 环糊精(β CD)促进高浓度变性 还原溶菌酶的氧化复性。确定CTAB与β CD的浓度比为1∶4,CTAB与变性溶菌酶的结合时间在10—50min内复性收率较高。同时发现,利用人工伴侣和凝胶过滤色谱的耦合作用可有效提高溶菌酶的复性收率,在连续复性操作条件下可使进料质量浓度为1mg/mL的变性酶获得87%的总复性收率。

高效凝胶过滤色谱填料KH-s-GFC300的合成与评价

以碱溶法制备的高孔隙度硅胶为基质,与γ-环氧丙基丙氧基三甲氧基硅烷配基进行共价键合,经过酸性水解,使其转化为二醇基,制成了高效亲水凝胶色谱填料.键合反应中采用70 ℃回流冷凝管,使生成的甲醇可顺利地排到体系外,促使反应向有利于键合的方向进行,以获得较高的配基密度.研究表明,水解反应条件与配基密度以及柱效密切相关.当配基密度为2.6～3.5 μmol/m2时,才能显示出较高的柱效.蛋白质分离实验结果显示,此填料的相对分子质量排阻极限为300 000,牛血清白蛋白的回收率为99%.

凝胶过滤色谱分离纯化玉米蛋白酶解产物研究

研究了凝胶过滤色谱的分离条件如洗脱速度、待分离样品的浓度和待分离样品的体积对玉米蛋白酶解产物分离纯化的影响,确定了凝胶过滤色谱分离纯化玉米蛋白酶解产物的最佳试验条件。同时进一步研究了玉米蛋白酶解产物的分子量与其抗氧化活性之间的关系,研究表明,玉米蛋白酶解产物的分子量与抗氧化能力之间具有相关性,即分子量越小,抗氧化能力越强。

蛋白质凝胶过滤色谱上样方法的改进

凝胶过滤色谱因其操作方法简单、重复性强等特点在生物大分子的分离纯化中被广泛使用,特别在基因工程蛋白质类药物的精细纯化中起着难以替代的作用。但由于蛋白质凝胶过滤色谱要求样品上样体积较小及洗脱流速较小时才能获得理想的分辨率,这使得凝胶过滤色谱经常成为蛋白质大规模纯化工艺中的限速步骤。本文介绍一种改进的上样方法,在不降低分辨率的前提下,可将单位时间内凝胶过滤柱的产量提高两倍。

凝胶过滤色谱法研究酶解过程中木聚糖分子结构的变化

采用凝胶过滤色谱法研究了木聚糖在酶解过程中分子量分布的变化。结果表明,木聚糖酶对高分子量组分的木聚糖的降解能力较差,而主要降解分子量介于15000～3000之间组分的木聚糖,使得这部分木聚糖变为分子量更低的木聚糖组分。随着酶解时间的延长,酶解得率上升,酶解产物中低聚木糖含量增多,未被酶解的木聚糖的平均聚合度上升,当酶解时间超过4h时,这种变化趋势缓慢。随着酶解轮次的增加,酶解产物中可溶性木聚糖的含量越来越少,木聚糖被降解的难度越来越大。在实际生产中,用来作为低聚木糖生产的木聚糖其聚合度应在20～100之间,酶解时间以4h为宜,重复利用未水解木聚糖的轮次以2轮为宜。

凝胶过滤色谱测定高分子量聚乙烯醇分子量和分子量分布

用凝胶过滤色谱对高分子量聚乙烯醇分子量、分子量分布进行剖析。采用Plaquagel-OH色谱柱,0.25mol/LNaNO3,0.01mol/L Na2HPO4-NaH2PO,pH=7的缓冲溶液流动相,流速1ml/min,示差折光检测器,柱温30℃,聚环氧乙烷作标准物。该方法能显著缩短分析时间,提高准确性,可用于对高聚合度聚乙烯醇进行研究和指导生产。

复合肽螯合锌有效螯合率测定方法研究—凝胶过滤色谱络合滴定法

本文通过模拟动物胃肠道内pH的环境来处理螯合物样品,使螯合物样品中的非络合态以及较小结合力的络合态金属元素以离子状态存在,再通过凝胶过滤法对螯合态和游离态的金属离子进行分离,测定各组分中金属元素的含量,即可计算出样品有效螯合率。具体测定方法为:样品溶解处理时pH调至3.0,离心后的上清液pH调回中性,上柱洗脱时碱性洗脱液为pH 9.0的Clark-lubs缓冲液,酸性洗脱液为pH 2.0HCl溶液。该方法得到的结果变异系数在2%2.5%之间,精密度较好。

高效凝胶过滤色谱法测定菊糖聚合度

菊糖属于天然大分子多糖,其生理活性与性质受聚合度的影响。以OHpak SB-802.5 HQ为色谱柱,进样量为20μL,柱温为30℃,流动相为0.3 mol/L NaNO3溶液,流速为0.3 mL/min,通过GPC软件拟合三次方程标准曲线,利用高效凝胶色谱方法检测了9个样品的分子量并计算了其聚合度。结果表明,9个样品的菊糖聚合度在10~29,同种原材料的不同批次和不同品种间聚合度均存在差异。该方法为分析样品中菊糖的结构性质及控制产品质量提供了参考依据。

基于凝胶过滤色谱的β2微球蛋白标准品单体定量检测方法

β2微球蛋白(B2M)标准品是研究透析相关淀粉样变和评估血液透析器透过效率的重要试剂。B2M易于聚集的特性导致其作为标准品的单体浓度降低,使得检测结果准确性下降。为了准确评价B2M标准品的质量,该研究建立了基于凝胶过滤色谱的B2M样品中非聚集单体的定量检测方法。使用TSKgel SuperSW2000 (30 cm×4.6 mm, 4μm)凝胶筛分色谱柱,流动相为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS, pH 7.2～7.4),流速为0.5 mL/min,柱温为25℃。使用紫外检测器,检测波长为280 nm,外标法定量。在0.05～0.50 g/L的B2M单体质量浓度范围内线性良好,相关系数为0.994 8。定量限(信噪比为10)为0.08 g/L,添加水平为0.10～0.30 g/L时,回收率为85.0%～96.7%,相对标准偏差为1.7%～3.3%。使用该方法对实验室自制重组人B2M标准品进行了质量检测,结果显示,该方法处理简单,准确度高,稳定性好,且不受溶液中B2M二聚体的干扰,适用于B2M标准品的质量分析。

凝胶过滤色谱-蒸发光散射法监测麦冬多糖色谱分离的研究

目的探讨高效凝胶过滤色谱-蒸发光散射检测法(HPGPC-ELSD)用于监测多糖分离纯化的可行性和优点。方法以麦冬多糖为模型多糖,比较DEAE SepharoseTMFast Flow、Sephadex G-50和G-25柱色谱的纯化效果,比较分别以HPGPC-ELSD和传统的蒽酮-硫酸法测定结果为收集标准时的纯化情况。结果通过HPGPC-ELSD测定确知,DEAE Sepharose可将麦冬多糖粗提物中的非中性糖部分除去;Sephadex G-50和G-25均不能够很有效地将粗多糖中的麦冬多糖与低聚糖和单糖分离。结合HPGPC-ELSD和蒽酮-硫酸法的优点,将其合理组合用于监测麦冬多糖的凝胶色谱分离,可以同时确保多糖色谱分离纯化的速度和质量。结论以HPGPC-ELSD测定结果作为收集标准特别适合于较难分离或纯化要求较高的多糖类成分的分离纯化。