凝血因子Ⅷ和凝血因子Ⅸ活性检测影响因素的分析

目的 验证离心力对凝血因子FⅧ(FⅧ)活性和凝血因子FⅨ(FⅨ)活性检测的影响。方法 用全自动血凝分析仪测定室温700 g、1500 g、396 g和4℃1000 g、1500 g离心15 min以及4℃2700 g离心10 min,不同离心力条件下即刻和冷冻后48 h FⅧ和FⅨ的活性并进行数据统计分析。结果 6种不同离心方法得到的血浆,不管是立即检测还是冻存后检测,FⅧ和FⅨ的活性水平在不同离心力条件下没有显著性差异(P>0.05),同一离心力条件下冷冻后FⅧ活性水平跟即刻检测结果有统计学差异(P<0.05),同一离心条件下FⅨ活性在即刻和冷冻后检测结果无统计学差异(P>0.05)。结论 从离心机类型、离心力转速到离心时间和离心温度多方面分析,在一定离心力范围内不同离心力对FⅧ活性和FⅨ活性检测的影响不大,冻融会影响凝血因子Ⅷ活性水平检测,凝血因子Ⅸ活性检测不受冻融影响。

人凝血因子Ⅸ-R338A高活性突变体在毕赤酵母中的表达及活性测定

目的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)在人类内源性凝血过程中起着非常重要的作用。hFⅨ表达量绝对或相对不足会导致B型血友病。本研究用毕赤酵母生产重组高活性突变体hFⅨ-R338A。方法首先构建pPICZaA-hFⅨ-R338A酵母分泌表达载体,其次将其用电转化入毕赤酵母SMD1168中,再次利用G418抗药性的能力筛选表达量高的单克隆重组菌株,培养并将表达产物纯化,稀释后检测其凝血活性。结果通本研究获得的重组SMD1168-hFⅨ-R338A表达量达到(90-120)mg/L;比活力约为人血中野生型hFⅨ凝血活性的(38.93±5.1)%,比野生型的酵母重组hFⅨ高6.85倍。结论人凝血因子Ⅸ高活性突变体R338A是潜在的天然凝血因子替代品。

人凝血因子Ⅸ-V107A-R338A高活性突变体在毕赤酵母中的表达及活性测定

目的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)在人类内源性凝血过程中起着非常重要的作用。hFⅨ表达量绝对或相对不足会导致B型血友病。本研究用毕赤酵母生产重组高活性突变体hFⅨ-V107A-R338A。方法首先构建pPICZaA-hFⅨ-V107A-R338A酵母分泌表达载体,其次将其用电转化入毕赤酵母SMD1168中,再次利用G418抗药性的能力筛选表达量高的单克隆重组菌株,培养并将表达产物纯化,稀释后检测其凝血活性。结果通过本研究获得的重组SMD1168-hFⅨ-V107A-R338A表达量达到80-120mg/L;活力约为人血中野生型hFⅨ凝血活性的(44.06±2.3)%,比野生型的酵母重组hFⅨ高7.75倍,比单突变R338A高13.17%。结论人凝血因子Ⅸ高活性突变体V107A-R338A是潜在的天然凝血因子替代品。