两个复合杂合突变导致遗传性凝血因子V缺陷症家系的表型与基因突变分析

目的:对两个由F5基因复合杂合突变导致的遗传性凝血因子V(FV)缺陷症家系进行表型和基因型分析,初步探讨其分子致病机制。方法:检测两个家系各成员外周血的血浆FV活性(FV:C)和FV抗原(FV:Ag)等凝血指标。通过PCR扩增F5基因的所有外显子及其侧翼区域,并进行测序。利用生物信息学软件辅助分析突变对蛋白功能的影响。使用PyMOL软件分析突变前后FV蛋白质的空间结构变化。通过凝血酶生成实验评估突变蛋白的功能变化。结果:表型检测显示两个先证者FV:C和FV:Ag均同步下降,表现为I型FV缺陷症。基因分析显示,先证者A第3外显子存在c.332G>T杂合错义突变(p.Ser111Ile)及第25外显子存在c.6665A>G杂合多态性(p.Arg2222Gly);先证者B第3外显子存在c.286G>C杂合错义突变(p.Asp96His)及第13外显子存在c.2393-2393del C杂合缺失突变(p.Pro798Leufs*13)。生物信息学分析显示,p.Ser111Ile和p.Pro798Leufs*13突变均为致病性突变。蛋白模型分析显示,p.Ser111Ile突变导致氨基酸间的氢键发生改变;p.Pro798Leufs*13突变产生了截断蛋白。凝血酶生成实验表明,先证者A和B的凝血功能已受到影响。结论:这四种突变可能是造成该两个家系FV水平下降的主要原因,其中p.Ser111Ile突变鲜见报道。

IL-6、IL-10与类风湿关节炎疾病活动度、自身抗体及凝血功能的相关性

目的:探讨血清IL-6、IL-10水平与RA患者疾病活动度、自身抗体、凝血功能的相关性。方法:选取就诊的172例活动性类风湿关节炎(RA)患者作为RA组;另选取172名健康体检者为对照组。收集两组对象血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、自身抗体(RF-IgM、RF-IgG、RF-IgA、Anti-CCP)、凝血功能(PT、APTT、TT、FIB、D-D)等临床指标,所有患者均进行疾病活动度评分(DAS28),并按DAS28评分分为高疾病活动组、中疾病活动组、低疾病活动组三组;通过流式微球捕获芯片技术(CBA)测定患者血清中IL-6、IL-10水平;比较RA组及健康对照组血清IL-6、IL-10水平、自身抗体及凝血功能的差异;比较RA各疾病活动组间IL-6和IL-10水平、自身抗体及凝血功能的差异;分析IL-6、IL-10水平与自身抗体的相关性;分析IL-6、IL-10水平与凝血功能的相关性。结果:上述各指标RA组均高于健康对照组(P<0.05);高疾病活动组IL-6水平高于中低疾病活动组(P<0.05);各组间IL-10水平无统计学差异(P>0.05);高疾病活动组RF-IgM及RF-IgA水平、FIB及D-D水平均高于中低疾病活动组(P<0.05);IL-10水平与RF-IgM、RF-IgA、PT、APTT正相关(P<0.05),与TT负相关(P<0.05);IL-6与纤维蛋白原(FIB)及D-二聚体(D-D)正相关(P<0.05),与RF及Anti-CCP均无相关性(P>0.05);结论:IL-6可作为疾病活动性指标之一;IL-10可作为RA诊断参考指标之一;IL-6和IL-10升高的RA患者更易出现凝血功能异常。

凝血因子V基因Leiden突变和凝血酶原基因G20210A突变与下肢深静脉血栓形成关系的探讨

目的 :探讨凝血因子V基因G16 91A突变 (Leiden突变 )和凝血酶原基因G2 0 2 10A突变与下肢深静脉血栓形成的关系。方法 :采用PCR RFLP技术对 86例下肢深静脉血栓形成患者和 10 0例正常对照的健康人群进行凝血因子V基因G16 91A突变和凝血酶原基因G2 0 2 10A突变检测。结果 :86例下肢深静脉血栓形成患者和 10 0例正常对照组中均未检出凝血因子V基因G16 91A突变和凝血酶原基因G2 0 2 10A突变。结论 :凝血因子V基因G16 91A突变和凝血酶原基因G2 0 2

结缔组织病合并获得性凝血因子V缺乏1例

凝血因子V是凝血过程中必不可少的合成凝血酶原复合物的组成成分。获得性凝血因子V缺乏症是一种罕见的血液系统疾病。本文报道了1例结缔组织病合并获得性凝血因子V缺乏症患者,通过激素和免疫抑制治疗,患者凝血功能逐渐恢复,考虑发生获得凝血因子V缺乏可能与自身免疫性疾病有关。本文旨在为临床医生的诊断和治疗提供思路,综合文献分析如下。

血栓及血栓前状态与凝血因子V基因多态性和APCR及HHcy的相关性研究

目的:探讨血栓患者与高同型半胱氨酸血症(HHcy)、活化蛋白C抗性(APCR)及凝血因子v基因多态性的关系。方法:300例健康查体者为正常对照;纳入研究的223例血栓患者中,经计算机断层显像(CT)的脑梗塞(CI)80例、心肌梗塞(MI)82例和静脉血栓栓塞(VTE)61例;另纳入研究的270例血栓前状态患者中,妊高症(PTH)76例、慢性阻塞性肺疾病(COPD)62例、糖尿病(DM)60例和癌症(CA)72例。以循环酶法和APTT凝固法分别测定病例组和正常对照血浆中HHcy及APCR,并用限制性内切酶片段多态性(RFLP)测定FV G1691-A、G1091-C、A1090-G等3种基因多态性的发生情况。结果:静脉血栓患者APCR阳性率最高(62.29%),正常对照组APCR阳性很低(7.33%),而其HHcy阳性分别为68.42%及10.00%。发现3例FV基因杂合突变静脉血栓患者为APCR阳性。结论:静脉血栓患者HHcy阳性率明显高于正常对照,HHcy是引起静脉血栓患者血栓形成的重要原因之一,静脉血栓患者存在APCR,而APCR阳性可能与凝血因子V基因多态性有关。

海南地区静脉血栓栓塞症患者活化蛋白C抵抗与凝血因子V基因多态性研究

目的了解海南地区静脉血栓栓塞症(venous thromboembolism,VTE)患者及健康人群活化蛋白C抵抗(activated protein C resistance,APCR)情况以及可能的凝血因子V基因缺陷(FV Leiden、FV HongKong/Cambridge)。方法收集2014年1月至2017年1月在海南省人民医院住院的海南籍汉族VTE患者共计101名以及海南籍健康人群104名,检测两组人群中是否存在APCR现象,用多聚酶链反应-限制性内切酶长度多态性分析(PCR-RLFP)以及基因测序方法检测FV Leiden、FV HongKong/Cambridge基因。结果 VTE组APCR阳性率明显高于对照组(P <0. 05)。在101名VTE患者当中检出1例杂合突变FV Leiden和3例FV HongKong基因型,未发现纯合突变FV Leiden以及FV Cambridge基因型。对照组人群中未发现上述异常基因。结论 APCR可能是导致海南地区人群VTE发病的危险因素,FV Leiden基因在海南人群中少见,FV HongKong可能是海南地区VTE人群较特异的致病基因。

肝移植出血特点及活化重组人凝血因子VⅡ在移植中的应用(英文)

背景:如何评估肝移植过程中的出血、止血、凝血功能以及使用怎样的止血措施解决凝血问题,目前还没有常规止血指导方案。目的:探讨肝移植过程中各时间段出血特点并观察活化重组人凝血因子VⅡ在肝移植中的应用效果。设计、时间及地点:回顾性病例分析及对比观察实验,2001-04/2006-07中山大学附属第二医院普通外科完成。对象:2001-04/2003-03接受肝移植患者15例为回顾性研究对象;2003-03/2006-07接受肝移植的28例患者,随机均分为2组:活化重组人凝血因子VⅡ组和对照组。方法:对前期15例肝移植患者出血规律进行回顾性分析并统计各个时间段出血特点。对后期28例患者进行对比观察,活化重组人凝血因子VⅡ组移植前10min静脉推注活化重组人凝血因子VⅡ70～80μg/kg,推注速度为3～5min。对照组同样方式推注50mL的生理盐水。主要观察指标:15例接受肝移植患者各时期的出血量;14例患者使用活化重组人凝血因子VⅡ前及用药后30min的凝血酶原时间、活化的部分凝血活酶时间及血总量。结果:广泛渗血是造成肝移植过程中出血的主要原因,在病肝切除阶段的广泛渗血是主要的出血时间段,活化重组人凝血因子VⅡ可以较好地改善多种凝血功能指标,使血栓弹力图指标r,k,α角度和最大振幅及常规指标凝血酶原和部分凝血活酶时间改善。活化重组人凝血因子VⅡ组较对照组移植过程出血明显减少;活化重组人凝血因子VⅡ组较对照组移植时间明显缩短;活化重组人凝血因子VⅡ组14例在观察期间均未发生血栓并发症。结论:肝移植切肝时间相的广泛渗血为肝移植主要出血时间。活化重组人凝血因子VⅡ可以成功的地应用于肝移植。

凝血因子VR_2等位基因多态性在血栓相关性疾病患者中的分布

目的 :通过检测血栓相关性疾病患者的凝血因子V(coagulationfactorV)R2 等位基因多态性 ,探讨R2单体型与血栓形成的相关性。方法 :采用PCR 酶切法对 10 0个脑血栓患者 ,96个心肌梗塞患者 ,45个深静脉血栓患者 ,80个系统性红斑狼疮患者 ,以及 98个正常对照进行FVR2 等位基因检测。结果 :首次发现 2例系统性红斑狼疮患者基因型为R2 等位基因杂合子。结论 :中国汉族人群血栓形成的遗传分子背景与FVHR2 等位基因可能没有相关性。

两例先天性凝血因子V缺乏症基因突变的鉴定

目的探讨先天性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺乏症的分子发病机制。方法采用一期法检测血浆FⅤ活性, ELISA法检测血浆FⅤ的抗原含量,PCR法扩增FV基因的25个外显子及其侧翼序列,DNA测序并与Genebank校对确定基因异常。结果两例患者血浆FⅤ活性和抗原含量均为2％。病例1在FⅤ基因23外显子G 69969 T的纯合突变,导致G 2107 V;病例2由13外显子双杂合突变所致,其中一突变C 45533 T导致R 740 Ter,另一突变位点G 45366 A导致C 684 Y,这是国际上第一个位于13外显子的错义突变位点。分子结构分析表明684 Cys突变Tyr后,不能与603 Cys形成二硫键,影响了A2区β环状结构的形成,导致FⅤ的稳定性降低。结论FⅤ基因G 69969 T、C 45533 T及G 45366 A突变与先天性FⅤ缺乏症有关。

猪凝血因子V的制备及其活性分析

从猪血浆中制备猪凝血因子V,并分析凝血因子V加速凝血酶原活化的促凝活性。采用聚乙二醇沉淀、柠檬酸钡吸附、DEAE纤维素离子交换层析等方法,制备了猪凝血因子V。经SDSPAGE检测,猪凝血因子V得以成功制备,收率为每升血浆收90.2mg,纯度为64.4%。经纤维蛋白凝结实验分析,采用上述方法制备的猪凝血因子V具有较高的促凝血酶原活化活性。

凝血因子V基因突变(1691G/A)与脑血栓、深静脉血栓相关性的研究

本文采用PCR扩增、限制性酶切及电泳分型等方法 ,检测了凝血因子V1691(G→A)突变在中国汉族人群体中的分布特点 ,并探讨了该突变同脑血栓、深静脉血栓等血栓性疾病的风险相关性。结论如下 :1 中国汉族人群中约有 1 96%携带突变基因 1691A ,墨西哥人中为 1 88% ,美国白人中为 1 89% ,美国黑人中为 0 % ,资料表明瑞典人群中约为 7% ,此结果提示该基因频率随种族、地区的不同而存在着差异。 2 深静脉血栓患者的FactorV 1691A基因频率为 0 .0 761与正常对照组(0 0 0 98)比较 ,统计结果RR =8.9798(u =2 .6648>2 .5 8,P <0 .0 1)两者差异显著 ,此结果表明该突变是静脉血栓的主要的风险因子。 3 脑血栓患者的FactorV 1691A基因频率为 0 .0 0 675 ,与正常对照组 (0 0 0 98)比较 ,统计结果RR =0 .6845 (U =-0 2 984<1.96 ,P >0 .0 5 ) ,此结果表明 ,该突变可能不是脑动脉血栓的主要的风险因子。

易栓性疾病患者血浆中凝血因子V基因三种多态性和APC—R、LA的检测

目的 了解易栓性疾病患者凝血因子Ⅴ基因三种多态性和狼疮抗凝物质(LA)、活化蛋白C抵抗(APC-R)的发生率。方法 测定237例易栓性疾病(包括90例脑梗塞、59例冠心病、57例高血压、31例深静脉血栓)患者和正常对照血浆中LA、APC-R,并用限制性内切酶片段多态性方法测定FV G1691→A、C1091→C、A1090→G三种基因多态性的发生情况。结果 脑梗塞组LA阳性者有41例(45.6％),APC-R阳性者3例(3.3％);冠心病组LA阳性者有24例(40.7％),APC-R未见阳性;高血压组LA阳性者有22例(38.6％),APC-R阳性者有4例(7.0％);深静脉血栓组LA阳性者有13例(41.9％),APC-R阳性者1例(3.2％);对照组未见阳性、三种基因多态性都未见阳性。结论 易栓性疾病患者LA阳性率明显高于正常对照,LA可能是引起易栓性疾病患者血栓形成的重要原因之一,易栓性疾病患者存在APC—R,但可能和凝血因子Ⅴ基因三种多态性无关。

习惯性流产妇女中凝血因子V基因三种多态性和APC-R、LA的检测

目的 研究习惯性流产妇女与活化蛋白C抵抗 (APC R)、狼疮抗凝物质 (LA)和凝血因子Ⅴ (FⅤ )基因多态性的关系。方法 测定习惯性流产妇女 (未妊娠期 )和正常对照妇女的APC R、LA ,并用限制性内切酶片段多态性的方法检测FⅤG16 91→A、G10 91→C、A10 90→G 3种基因多态性的发生情况。结果 习惯性流产妇女的APC R和 3种FⅤ基因多态性测定未见阳性 ,LA阳性率达 15 .6 %。结论 中国妇女习惯性流产与APC R和 3种FⅤ基因多态性可能关系不大 。

凝血因子V基因Leiden突变和早产儿脑室内出血的关系研究

目的研究凝血因子V基因Leiden突变和早产儿脑室内出血的关系。方法采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态分析的方法,对54例脑室内出血的早产儿及57例无脑室内出血的早产儿进行等位基因检测,并进行对比分析。结果54例脑室内出血组中有6例为基因Leiden突变杂合子(11%),而无脑室内出血的早产儿中的57例中只有1例为基因Leiden突变杂合子(1.8%),两组之间差异显著,χ2=4.11,P<0.05。结论凝血因子V基因Leiden突变携带者患脑室内出血的早产儿风险高于无脑室内出血的早产儿组。

遗传性凝血因子V缺陷症的诊断

目的对遗传性凝血因子V(FV)缺陷症进行诊断。方法通过检测先证者及家系成员的活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、FV促凝活性(FV∶C)和FV抗原(FV∶Ag)等进行临床表型诊断,应用聚合酶链反应(PCR)方法对先证者F5基因的25个外显子及其侧翼序列进行扩增,PCR产物进行直接测序以发现其基因突变,进行家系调查以期发现遗传规律。结果先证者APTT和PT显著延长,FV∶C为3.5%,FV∶Ag为1.47%。F5基因测序发现,先证者F5基因外显子区共有7处与GenBank AY364535序列不同的位点,其中外显子10区的C38591T杂合突变导致产生1个终止密码(R506Term),外显子13区的C47504T纯合变异导致编码氨基酸L1369F替换,该变异被证实为基因多态性。家系分析表明,前者遗传于先证者母亲,后者遗传于其父母双亲。结论通过表型检测、家系调查和基因诊断,明确该先症者为遗传性凝血因子V缺陷症,C38591T杂合突变产生终止密码是导致先证者FV缺陷的原因之一。

中国心肌梗死人群凝血因子V Leiden突变检测

目的对中国心肌梗死人群进行凝血因子Ｖ（ＦＶ）基因突变检测．方法在５０例心肌梗死患者和 １００例正常对照者中，运用多聚酶链反应一变性梯度凝胶电泳技术（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）检测ＦＶ基因Ｌｅｉｄｅｎ突变所在的１０号外显子。结果未检测到Ｌｅｉｄｅｎ突变，但发现１０号外显子存在一个新的多态性１６２８Ｇ→Ａ（Ａｒｇ→Ｌｙｓ），此多态性为首次报道，且频率在心梗组和对照组间有极显著差异。结论中国人群中不存在Ｌｅｉｄｅｎ突变，但１６２８Ｇ→Ａ多态性可能是中国人群冠心病心梗发病的危险因素。

先天性凝血因子V缺陷症的分子发病机制

先天性凝血因子V缺陷症是一种少见的常染色体隐性遗传性出血性疾病,其出血症状的异质性较大,人们对其分子发病机制知之甚少。近年来随着FV基因的破析,使人们有可能在分子水平对先天性V因子缺乏症进行研究,并发现了多种FV基因的突变形式。这将有利于阐明先天性因子V缺陷症临床表现的差异并最终治愈这一疾病。

凝血因子V Leiden与妊娠病理

多种异常妊娠的发生与胎盘梗塞关系密切,新近研究表明,凝血因子V的Leiden点突变对血栓有促进作用,可能参与复发性流产等异常妊娠的发病过程。