重症患者凝血酶原复合物合理应用中国专家共识

凝血酶原复合物(PCC)是以维生素K依赖性凝血因子为主要成分的血液制品。虽然PCC已在临床应用70多年,安全性已得到明显提升,且已经广泛应用于重症患者凝血功能障碍或大出血的治疗,但若使用方法不当,可能会减弱止血效果或增加血栓形成的风险。为了规范PCC的合理使用,中国医药教育协会血栓与止血危重病专业委员会、全军重症医学专业委员会及中国研究型医院学会血栓与止血专业委员会组织制定此专家共识,包括定义、适应证、监测与评价等3个部分,共10条建议,旨在帮助临床医师合理使用PCC,以提高重症患者救治水平。

基于加权TOPSIS法的人凝血酶原复合物的药物利用评价

目的建立人凝血酶原复合物(PCC)药物利用评价(DUE)标准细则,利用加权优劣解距离(TOPSIS)法对PCC的使用情况进行评价,为其临床合理应用提供参考依据。方法以药品说明书为基础,参考相关资料,建立PCC的DUE标准细则,采用加权TOPSIS法对徐州医科大学附属医院2021年1—12月使用PCC的住院患者病历进行用药合理性评价。结果共纳入121份病历,三级指标中相对权重较大的依次为凝血功能、给药剂量、给药间隔、给药疗程、疾病诊断、病程记录和药物相互作用,其权重分别为0.0952,0.0913,0.0913,0.0913,0.0897,0.0841和0.0817。用药合理性评价:21例(17.36%)合理,39例(32.23%)基本合理,61例(50.41%)不合理。不合理用药主要表现在适应证、用法用量和药物相互作用3个方面。结论PCC的DUE标准细则综合多个评价指标,主次清晰,具有科学性和可操作性。PCC在适应证、给药剂量及药物相互作用方面存在不合理用药,应进行药学干预,促进其合理使用。

纤维蛋白原结合凝血酶原复合物对妇产科大出血的治疗效果及临床观察

目的:分析妇产科大出血患者治疗时,使用纤维蛋白原与凝血酶原复合物治疗的效果。方法:选取200例妇产科大出血患者,均为本院妇产科于2021年1月至2022年12月收治,取奇偶分组法分组。对照组治疗时使用凝血酶原复合物药物,在此基础上给予观察组的取纤维蛋白原结合输注治疗方案。结果:观察组的好转率值、再手术率值均显示优于对照组,P<0.05;治疗后两组的各项凝血指标水平值均显示降低,且观察组的降低幅度更大,P<0.05;两组治疗后不同时刻的出血量对比,观察组明显低于对照组,治疗后不同时间段的纤维蛋白原水平值均高于对照组,P<0.05。结论:在对妇产科大出血患者治疗时,将纤维蛋白原和凝血酶原复合物联合使用,其凝血功能、纤维蛋白原水平明显提升,好转率较高,出血量和再手术率均较低。

人凝血酶原复合物中枸橼酸离子含量检测方法的比较

目的:建立并优选检测人凝血酶原复合(PCC)中枸橼酸离子含量的方法。方法:分别建立离子交换色谱法和比色法检测PCC中枸橼酸离子含量。并分别对两种方法的重复性、准确度、中间精密度、线性进行了验证,对离子交换色谱法的专属性、耐用性进行了验证。结果:离子交换色谱法和比色法所得结果均符合《中华人民共和国药典》通则3108的要求,可用于PCC枸橼酸离子含量的测定。其中二者重复性分别为0.178%和1.857%;准确度均在92%~105%,符合中国药典要求;中间精密度为0.336%和2.05%;枸橼酸离子浓度与峰面积和紫外吸光度呈线性关系,相关系数分别为0.99980、0.99589;离子交换色谱法检测专属性良好,枸橼酸出峰时间不受其他试剂影响,经不同批号色谱柱测试,该方法耐用性佳。结论:离子色谱法和比色法均可用于PCC中枸橼酸离子含量测试,但离子交换色谱法操作简单,测试时间短,准确度高,更适应于PCC中枸橼酸离子含量的测定。

高收率人凝血酶原复合物生产工艺优化

目的确定从人血浆中高效提取人凝血酶原复合物的最佳工艺条件。方法以人血浆为原料,人凝血酶原复合物收率为评价标准,通过实验设计(DOE),正交实验以及单因素实验对制备工艺参数进行研究优选。结果最佳工艺条件为:选用DEAE-Sephadex A50凝胶,将凝胶平衡至pH7.6,然后按血浆重量1.7~2.5 g/L加入去除冷沉淀的血浆中吸附40 min;3倍凝胶体积的洗涤液(0.15~0.175 mol/L)NaCl洗涤3次,洗脱液(0.5~2.0 mol/L)NaCl洗脱3~5次;添加稳定剂(肝素35 IU,NaCl)0.1 mol/L超滤透析。结论使用上述优化后工艺生产,最终产品收率(以人凝血因子Ⅸ计)可达到62~63万IU/吨血浆,适合大规模生产。

人凝血酶原复合物中人凝血因子Ⅺ残留量检测方法验证

目的 建立酶联免疫吸附法(ELISA)测定人凝血酶原复合物中人凝血因子Ⅺ残留量的方法,并进行方法验证。方法 人凝血因子Ⅺ将与包被在微滴定板上的捕获抗体结合并发生反应。经过适当的洗涤步骤后,生物素一抗结合到捕获的蛋白质上。过多的一抗被洗掉,结合的抗体与辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素反应,加入TMB底物显色,置于酶标仪450 nm波长处检测。对该检测方法的稀释可靠性、准确度、专属性、重复性、中间精密度、线性、范围、耐用性进行验证。结果 该方法准确度、专属性良好,平均回收率为109.2%, RSD值为6.93%;重复性RSD为6.78%,中间精密度RSD为6.75%,精密度良好;线性相关系数r=0.999 9,线性范围内准确度、精确度良好;耐用性验证了孵育时间和试剂盒开启有效期,结果显示孵育时间变化RSD为6.62%,说明该检测方法孵育时间控制在28~32 min,对结果无显著影响;试剂盒开启后按条件保存7 d,前后检测结果RSD为3.84%,说明试剂盒开启后按条件保存7 d对FⅪ检测结果无影响;上述两者结果表明该方法耐用性良好。稀释可靠性结果显示该检测方法检测PCC中FⅪ残留量时存在“钩状”效应,可以通过稀释100~200倍解决。结论 该方法能够满足实验室人凝血酶原复合物中人凝血因子Ⅺ残留量的测定。

改良凝胶吸附法制备的凝血酶原复合物

采用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ凝胶从人血浆中吸附制备经Ｓ／Ｄ病毒灭活处理后的ＰＣＣ制品，ＤＥＡＥ洗脱液经Ｓ／Ｄ处理（０．３％磷酸三丁脂和１％Ｔｗｅｎ８０，６～８ｈ，２４℃）后，使所加入具有感染剂量（＞１０６）的标志病毒ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ、ＨＩＶ均被有效灭活；ＰＣＣ制品中Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ因子的比活性（Ｕ／ｍｇ）分别为０．７９９±０．３４９、０．３４３±０．２５２、０．７４７±０．３４８、０．５８０±０．１９９（ｎ＝７），均比传统ＰＣＣ提高１．５～２．５倍（其中ＦⅨ∶Ｃ的比活性提高有显著性，ｔ＝３．１０５，Ｐ＜０．０１），同时也优于国内同类制品（ｔ＝２．３６０，Ｐ＜０．０５），对其杂蛋白（ＡＴ－Ⅲ、Ｆｎ、ＰＫＡ、Ｐｌｇ、ⅧＲ∶Ａｇ抗Ａ、抗Ｂ凝集素）的分析也反映出ＰＣＣ纯度有所提高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＩＥ、ＣＩＥ电泳图谱及ＨＰＬＣ层析图谱证实上述结果，ＰＣＣ中ＴＮＢＰ残留量≤１０μｇ／ｍｌ，Ｔｗｅｅｎ８０残留量≤１００μｇ／ｍｌ，均在安全范围内。

抗磷脂酰丝氨酸/凝血酶原复合物抗体对血清学阴性抗磷脂综合征的诊断价值研究

目的·研究抗磷脂酰丝氨酸/凝血酶原复合物抗体(anti-phosphatidylserine/prothrombin antibody,aPS/PT)、IgA型抗心磷脂抗体(anti-cardiolipin antibody,aCL)及IgA型抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-glycoproteinⅠantibody,aβ2-GPI)对血清阴性抗磷脂综合征(seronegative antiphospholipid,SNAPS)的诊断价值。方法·选取86例抗磷脂综合征(antiphospholipid,APS)患者(APS组)、48例SNAPS患者(SNAPS组)、79例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者(SLE组)和85例健康者(健康对照组),应用ELISA法测定IgG型和IgM型aPS/PT、IgA型aCL和IgA型aβ2-GPI 4种抗磷脂抗体。计算这4种抗体用于诊断SNAPS的敏感度及特异度,并做受试者工作特征(ROC)曲线,以及分析4种抗体与SNAPS临床表现的相关性。结果·SNAPS组aPS/PT总检出率为52.1%,其中IgG型a PS/PT检出率为29.2%,IgM型aPS/PT检出率为35.4%,IgA型aβ2-GPI检出率为16.7%,IgA型aCL未检出;SNAPS组IgG型和IgM型aPS/PT,以及IgA型aβ2-GPI检出率显著高于健康对照组(均P=0.000)。IgG型aPS/PT用于诊断SNAPS的ROC曲线下面积最大,其次为IgA型aβ2-GPI,分别为0.753和0.725。IgG型aPS/PT(OR=5.54,95%CI1.67～17.33,P=0.003)和IgA型aβ2-GPI(OR=3.43,95%CI 0.86～11.53,P=0.041)与静脉血栓风险均呈正相关,IgM型aPS/PT与妊娠丢失风险正相关(OR=5.11,95%CI 1.31～21.29,P=0.004)。结论·IgG/IgM型aPS/PT和IgA型aβ2-GPI可作为SNAPS实验室诊断潜在的补充指标,IgG/IgM型aPS/PT对于临床评估SNAPS患者血栓形成和妊娠丢失的风险也有一定的应用价值。

膜径向离子交换色谱分离凝血酶原复合物

利用径向离子交换色谱法分离纯化了Nitschmann组分Ⅲ中的凝血酶原复合物 ( prothrombincomplexconcentrate ,PCC) ,流动相为pH 7.5的Tris HCl缓冲液 ,色谱柱为XK 1 6DEAEfastflowSepharose ( 0 .8cmi.d .× 5cm)及膜DEAE径向色谱柱 ( 3.0cmi.d .× 5.8cm)。通过改变不同上样流速及洗脱流速 ,研究了流速对所分离的凝血酶原复合物的蛋白质量浓度及凝固活性的影响 ,为今后在血浆蛋白分离纯化中进一步推广使用径向色谱技术和放大实验提供了依据。

洗脱条件及其因素对凝血酶原复合物有效成分的影响

目的探讨洗脱条件及其因素对凝血酶原复合物(PCC)中凝血因子(F)Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及蛋白(P)C、S、Z、抗凝血酶(AT)8种有效成分收率及比活的影响。方法选择洗脱条件中柠檬酸钠、NaCl、pH 3种可变因素,每因素取3水平,根据正交表配制不同洗脱体系;采用DEAE-Sephadex A-50凝胶,相同平衡、洗涤条件及上述不同洗脱体系,批式吸附法制备PCC浓缩物;检测浓缩物中8种成分的活性或含量,获得各成分的收率及比活;正交试验分析不同洗脱条件及其因素对8种成分收率及比活的影响。结果不同洗脱条件8种成分收率及比活有一定差异,2.4 mol/L NaCl条件比活总体较高。在所考察范围内,柠檬酸钠对FⅡ、FⅨ、FⅩ、PC、AT收率和PC、PS、AT比活有较大影响;NaCl对FⅦ、FⅩ、PS、PZ收率和FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、PZ比活有较大影响。不同水平条件,柠檬酸钠及NaCl含量越高,4种凝血因子收率与比活越高,但对4种抗凝蛋白收率及比活影响无规律;pH6.6水平,4种凝血因子收率较高,pH6.9,其比活较高,pH对4种抗凝蛋白收率与比活的影响无规律。结论洗脱条件中高浓度的NaCl可提高PCC的整体比活;低浓度的柠檬酸钠对PCC有效成分收率及比活也有较大影响;pH对PCC中凝血因子(FⅡ,Ⅶ,Ⅸ,Ⅹ)收率及比活的影响分别有共性,对抗凝蛋白(PC,PS,PZ,AT)的影响则无规律。

冷沉淀与凝血酶原复合物联合在大出血中的应用

目的:通过冷沉淀(CRYO)与凝血酶原复合物(PCC)联合和单独使用在大出血中疗效比较,探讨成分输血在创伤性失血中的联合应用。方法:对照组分别输注CRYO、PCC,观察组联合输注CRYO+PCC。测定两组输注前1h和输注后2～5h相关指标,活化部分凝活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)变化情况。结果:观察组比对照组APTT、TT、PT明显缩短,FIB显著升高,差别有显著性意义(P<0.01)。结论:联合应用冷沉淀与凝血酶原复合物在创伤性失血患者治疗中,联合输注组比单独输注组疗效更显著。

制备结合凝血酶原复合物超声造影剂的初步实验研究

目的以超声空化栓塞肿瘤微循环为目的,制备一种结合凝血酶原复合物(PCC)的超声造影剂,评价其理化性质。方法采用机械振荡整合法和表面吸附法分别制备结合PCC的负电荷脂膜超声造影剂(浮选法洗涤)。观察并检测洗涤前后微泡大小、形态、浓度、荧光亮度,微泡与PCC的结合率及Ⅸ因子的活性。结果结合PCC微泡的浓度、形态与普通微泡比较无明显差异,但易静置分层。微泡与PCC的结合率及Ⅸ因子活性:两种制备方法间比较无明显差异(P>0.05),洗涤前与相同浓度的PCC比较Ⅸ因子活性无明显差异(P>0.05),但洗涤后结合率均值由洗涤前的96%左右降为82%左右(P<0.05),活性由90%左右降为19%左右(P<0.01)。结论机械振荡整合法与表面吸附法均可制备结合PCC的超声造影剂,微泡与PCC结合率较高,洗涤前能保持Ⅸ因子较高的活性,两种方法间比较无明显差异。

凝血酶原复合物制备过程吸附条件的研究

目的探讨凝血酶原复合物制备过程凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的吸附条件,提高活性收率。方法选择DEAE-SephadexA-50凝胶平衡体系中柠檬酸钠、氯化钠、pH 3种可变因素,每因素取3水平,根据L9(33)正交表设计试验,配制平衡液,分别对DEAE-SephadexA-50凝胶进行平衡处理后,按1.67g/L加入等量健康人混合去冷沉淀血浆,4℃搅拌,吸附凝血因子;吸附后凝胶洗涤、洗脱,检测洗脱液中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ活性并进行活性回收率正交试验直观分析,获得较优吸附条件并进行验证。此外,分析吸附平衡体系电导率与4种因子活性收率间关系。结果柠檬酸钠、氯化钠、pH对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ吸附影响不同;在所考察范围内,pH对4种凝血因子吸附影响效应趋势一致,pH越低,吸附效果越佳;柠檬酸钠及氯化钠浓度对4种凝血因子吸附影响效应趋势不一致,柠檬酸钠浓度越高,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ吸附越佳,而凝血因子Ⅸ在(0.012～0.02)mol/L水平较佳;氯化钠浓度越低,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ吸附越佳,而凝血因子Ⅹ在(0.1～0.14)mol/L水平较佳;平衡体系电导率与4种因子活性收率间不存在线性关系。结论吸附条件中pH及柠檬酸钠浓度对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ吸附效果影响较大。柠檬酸钠(0.02～0.028)mol/L,氯化钠(0.02～0.06)mol/L,pH6.6～6.9条件,4种凝血因子吸附效果相对较佳。电导率对4种因子吸附效果影响不明显。

采用两步凝胶吸附法制备人凝血酶原复合物的工艺研究

目的应用两步凝胶色谱法制备高纯度、高安全性的人凝血酶原复合物(PCC)制剂。方法检测合格的健康人血浆经离心去除冷沉淀后,采用DEAE-Sephadex A50进行吸附色谱,经洗涤、洗脱得到洗脱液,加入0.3%的磷酸三丁酯和1%的吐温80(S/D)进行病毒灭活;灭活后的制品再重新进行二次吸附色谱,洗涤、洗脱去除残留的S/D试剂的同时,进一步提高制品的纯度、效价等质量指标。结果最终制品的回收率达70%,比活、S/D残留量等各项指标达到药典标准。结论用所建立的工艺制备的PCC制剂的比活及安全性指标高于传统工艺制得产品。

凝血酶原复合物对新生儿缺氧缺血性脑病凝血功能的影响

目的 了解在维生素K1治疗的基础上加用凝血酶原复合物 (PCC)对新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)凝血功能的影响。方法 将 5 5例胎龄 36～ 4 0周新生儿HIE患儿分成维生素K1组 (A组 )和维生素K1+PCC(B组 ) ,比较两组凝血酶原时间 (PT)、凝血酶原国际标准化比值 (INR)、凝血酶原百分活动度 (PT % )、部分凝血活酶时间 (PTT)、凝血酶时间 (TT)、纤维蛋白原 (FIB)等凝血功能分析结果 ,并对PT延长者予PCC后再进行复查。结果 B组与A组相比 ,仅FIB明显降低 (P =0 .0 0 5 4 ) ,而PT、INR、PT %、PTT、TT均无显著差异 ;对PT延长者给予PCC后 ,PT、PT %可恢复到正常范围 (P =0 .0 4 6 7,0 .0 0 0 98) ;比较A、B组脑CT检查 ,蛛网膜下腔出血的发生率无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 对新生儿HIE在给予维生素K1治疗基础上若PT无明显延长可不必加用PCC。

凝血酶原复合物的临床应用

在过去的20年中，维生素K拮抗药（ vitamin K antagonist，VKA）的临床应用逐渐增加，从1993年到2008年增加了300％。 VKA能够降低房颤及使用人工心脏瓣膜患者的卒中风险、预防复发性静脉血栓的发生、治疗遗传性凝血障碍［1］。大量临床试验研究结果表明，目前常用的VKA华法林会增加患者的出血风险，每年有1％～3％应用华法林的高危患者发生致命性出血［2］。国际标准化比值（ interna-tional normalized ratios，INR）大于4将增加颅内出血（ intracranial hemorrhage ， ICH ）的绝对风险。 ICH发生后最初20 h内INR持续升高将增加血肿扩大的风险，血肿扩大是导致死亡的独立危险因素［3］。

人凝血酶原复合物分离纯化工艺的研究进展

人凝血酶原复合物(PCC)为人血浆中微量蛋白组份,其浓缩制剂由凝血因子II、VII、IX、X组成,在临床上具有治疗乙型血友病等疾病的确切疗效。本文综述了近来PCC及FIX浓缩制剂分离纯化工艺的研究进展及结合蛋白新型分离纯化技术的发展情况,讨论了该产品制备新工艺的开发方向。

大孔阴离子交换树脂从血浆中分离凝血酶原复合物

优化了CG-6型大孔阴离子交换树脂从人血浆中吸附和分离凝血酶原复合物的工艺条件。考察了其对血浆中总蛋白和凝血酶原复合物的吸附情况及吸附等温线,以及影响凝血酶原复合物活性的因素。结果表明0.05 mol/L Tris-柠檬酸体系中,分别加入0.3mol/L蔗糖和甘露醇可使凝血酶原复合物的活性保持率由未加时的(51.1±5.0)%提高到(60.9±5.7)%和(83.7±6.7)%。