一种新的蛇毒凝血酶原激活物的分离纯化及特征

为获得矛头蝮蛇(Bothrops atrox)蛇毒凝血酶原激活物并研究其基本性质,采用SP SepharoseFast Flow,DEAE-Sepharose Fast Flow和SP Sepharose High Performance等层析方法从巴西矛头蝮蛇蛇毒中分离纯化得到1种单一组分的凝血酶原激活物(prothrombin activator,FⅡA).还原性SDS-PAGE结果显示,其分子质量约为72 kD,等电点为6.67.HPSEC显示纯度大于95%.该酶是1种N连接的糖蛋白,N末端氨基酸序列为ALVLIAFAQYLQQCP,获得登录号为:B3A0N1.其活性可被EDTA-Na2抑制,PMSF对其活性无影响,对凝血酶原的激活过程无需Ca2+、FⅤa、磷脂的参与,为P-Ⅰ金属蛋白酶,对凝血酶原的激活方式与FⅩa相似.本研究纯化与鉴定的新凝血酶原激活物为其药学研究及临床应用提供参考.

蛇毒凝血酶原激活组分的研究概况

蛇毒是一类复杂的具有多种生物学活性的蛋白质和蛋白多肽.目前已经分离纯化出许多作用于血液凝固酶促级联反应过程中的一个或多个环节的蛇毒组分,包括FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ等激活剂以及直接使纤维蛋白原凝聚的蛇毒凝血酶样酶.蛇毒蛋白中有一类凝血毒素作用于血液凝固酶促级联反应,发挥止血作用,作用方式：（1）激活内源性和外源性凝血途径中的各种凝血因子,从而促进血液凝固.（2）激活凝血酶原,从而发挥凝血作用.（3）直接使纤维蛋白原变成纤维蛋白,即类似凝血酶样作用[1].现已在临床上广泛使用的立止血是从巴西矛头蝮蛇的毒液中分离、提纯而得到的一种高纯度蛇毒凝血毒素制剂.目前还没有蛇毒凝血因子激活组分,特别是蛇毒凝血酶原激活酶被开发上市为止血制剂.因此开发蛇毒凝血酶原激活酶有着重要的意义.现就近年来对蛇毒凝血酶原激活组分的研究概况综述如下.

急性冠脉综合征并糖尿病患者凝血-纤溶功能的研究

目的 研究冠心病、糖尿病患者的血栓形成异常状态 ,探讨凝血、纤溶机能及血管内皮功能变化在冠心病、糖尿病的发生发展中的作用。方法 检测 2 5例急性冠脉综合征患者 (A组 )、15例Ⅱ型糖尿病患者 (B组 )和 15例急性冠脉综合征合并Ⅱ型糖尿病患者 (C组 )的血浆凝血因子Ⅶ(CoagulationfactorⅦ ,FⅦ )、vonWillebrand因子 (vWF)水平及纤溶酶原激活物抑制因子 1(PlasminogenActivatorInhibitor 1,PAI 1) ,与对照组 2 0例健康人比较 ,A、C组中 15例还检测了常规治疗 10～ 14d后的各指标水平。结果 A组的三项指标皆较对照组明显升高 ;C组FⅦ水平高于B、D组 ,PAI 1水平与B组相似 ,明显高于对照组 ,vWF水平低于A、B组 ,差别无显著性 ;B组FⅦ水平近似于对照组 ,PAI 1和vWF水平升高。在B、C组中 ,FⅦ与血清总胆固醇水平呈正相关 (r =0 6 3 ,P <0 0 0 1) ,与高密度脂蛋白水平呈负相关 (r=- 0 5 2 ,P <0 0 0 1)。在正常对照组中 ,vWF与FⅦ水平呈负相关 (r =- 0 5 6 ,P <0 0 5 )。A、C两组中 15例患者在经治疗后vWF水平显著降低而FⅦ水平略升高 (P <0 0 5 ) ,PAI 1活性无变化。结论 急性冠脉综合征及糖尿病患者具有血栓前状态的特征性改变 ,血浆FⅦ、PAI 1及vWF水平可能是急性冠脉综合征的预测因子 。

CCR2b和CCR1拮抗剂RS504393对LPS诱导小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨CC趋化因子受体（CCR）2b和CCR1的特异性拮抗剂RS504393在细菌脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤中的作用及其机制。方法体外实验选用A549细胞系，应用LPS（10μg／mL）刺激合并RS504393（10μg／mL）治疗6h后，流式细胞仪技术检测CCR1和CCR2的表达，EHSA法检测细胞培养上清液内白介素（IL）-8的浓度；体内实验选用C57BL／6J小鼠，腹腔注射RS504393（5mg/kg）预处理30min后经鼻滴入LPS（5mg／kg），LPS刺激4h后收集BALF和肺脏标本，计数BALF内细胞总数，应用BCA法检测BALF内蛋白浓度，Realtime—RTPCR和EHSA法检测BALF和肺脏IL-1β凝血酶原激活物抑制物（PAI）-1和单核细胞趋化蛋白（MCP）-2的表达。多组间差别比较采用单因素方差分析（One—way ANOVA procedures），两组间差别比较采用成组t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果A549细胞经LPS刺激后与对照组相比，CCRI、CCR2和108的表达明显升高，RS504393治疗可明显降低它们的表达。在LPS诱导肺损伤模型中，与对照组相比，BALF内细胞总数和蛋白浓度明显升高，BALF和肺脏内IL-1β PAl—1的mRNA和蛋白表达显著增加，经RS504393治疗后均显著下降；LPS刺激使BALF内MCP-2升高，RS504393治疗使其进一步增加。结论CCR2和CCR1在急性肺损伤的发病中充当着重要角色，应用CCR2b和CCR1的拮抗剂RS504393治疗急性肺损伤有一定的应用前景。