含RGD序列水蛭素嵌合抗栓剂的构建与表达

通过对水蛭素及一些含有精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 (RGD)序列的多肽类血小板聚集抑制剂结构与功能的分析 ,设计并构建了两个在水蛭素C端融合RGD序列的嵌合分子。嵌合体基因分别重组到表达载体pET 2 1a(+ )中并转化大肠杆菌BL2 1(DE3)。经限制酶消化和DNA序列分析 ,证明两种重组质粒与设计完全一致。由于RGD 水蛭素嵌合基因上游连接了金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)的信号肽序列 ,在IPTG诱导下两种嵌合分子都获得了分泌表达 ,表达产物主要集中在细胞周质空间。通过离子交换层析和凝胶过滤层析分别对两种嵌合体蛋白进行纯化 ,纯化产物在Tricine SDS PAGE中都显示为单一条带。活性分析结果表明两种嵌合体蛋白在保留水蛭素抗凝血酶活力的同时 ,还呈现抗血小板聚集活性。

蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性

蕲蛇粗毒经DEAE -SephadexA - 5 0、POROS 5 0HS及TSKG30 0 0SW分离纯化 ,得到 1个具有凝血酶活力的峰 .该峰经SDS -PAGE和PAGE检测均为一条带 ,分子量约 2 8.0kDa ,加DTT处理后 ,拆分为约 14.8kDa的亚基 .其凝血酶活力为 14.7NIHu/mg ,精氨酸酯酶活力为 2 1.98TAMEμmol/mg·min .该组分具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,但没有明显的出血反应 .肝素不影响该组分的凝血酶和精氨酸酯酶活性 ,EDTA、PMSF、DFP则会产生不可逆抑制作用 ,表明该组分属于金属蛋白 .