凝血酶滴定法测定水蛭素活性的改进

目的 :通过改进 ,建立一种简便经济且重复性和准确度好 ,又省时的凝血酶滴定法测定水蛭素活性。方法 :用Markwardt提出的凝血酶滴定法和改进后的滴定法分别对同一批样品进行滴定比较 ,论述改进后的滴定法的过程和优点。结果 :改进后 ,配制不同浓度梯度的凝血酶溶液 ,采用逐步缩小活性范围 ,多次换试管重滴的浓度梯度法 ,结果重复性和准确度较好 ,省时。

凝血酶滴定法测定宽体金线蛭抗凝血活性的影响因素

对测定宽体金线蛭抗凝血活性的凝血酶滴定方法的影响因素进行分析。方法：用白瓷点滴板代替试管进行滴定反应（简称白瓷板法），考察白瓷板法和常规的试管法、不同凝血酶滴定间隔时间和凝血酶浓度对抗凝血活性测定的影响。结果：在同样条件下，白瓷板法测定抗凝血活性的精确度和稳定性较试管法高。用白瓷板法测定，宽体金线蛭样品浓度在一定范围内（0．125～0．333g·ml^-1）、凝血酶浓度为20u·ml^-1或10U·ml^-1时，每隔1min滴加1次，每次5μ1，样品浓度与消耗的凝血酶体积呈线性相关，r值分别为0．961和0．992；所测得样品的抗凝血活性分别为（33．08±2．64）和（31．24±1．32）U·g^-1．RSD分别为8．0％和4．2％；对于0．333g·ml^-1的样品，其测量产生的理论误差不大于10％和5％。结论：白瓷板法可用于测定宽体金线蛭样品的抗凝血活性，用10U·ml^-1的凝血酶溶液，每分钟滴加一次，每次5山进行测定，其线性和精确度均较好。

凝血酶滴定法测定云南菲牛蛭中水蛭素含量的改进研究

目的改进原云南省菲牛蛭质量标准中水蛭素的含量测定方法。方法考察白瓷板法代替原试管方法、两种浓度的凝血酶溶液、几种滴定体积对含量测定的影响;用原方法和改进后的方法分别对五批样品进行滴定比较。结果改进后,用白瓷板法测定,配制两种浓度的凝血酶溶液(40NIH·m L-1与20NIH·m L-1),采用几种滴定体积(1~5μL),每1min滴加1次,先滴加高浓度凝血酶溶液初测消耗的凝血酶溶液体积后,再用两种浓度的凝血酶溶液重新进行精确测定;增加空白对照实验,限定反应时间为10min;菲牛蛭样品浓度在0.00678~0.0597g·m L-1(r=0.9983)内与消耗的凝血酶单位量呈线性相关;五批样品的含量为156.68~234.25U·g-1,RSD均小于5%;含量供试品溶液在4℃下24h内稳定。结论改进后的方法简便、快速,重复性和准确度较原方法好,可作为一种新的云南菲牛蛭水蛭素含量测定方法。

抗凝血酶滴定法优化水蛭煮散提取工艺

目的:优选水蛭煮散的提取工艺。方法:利用抗凝血酶滴定法测定水蛭中抗凝血酶活性物质含量。以粉碎度为指标,筛选粉碎设备,考察水分对水蛭煮散粉体的影响;以浸膏得率和抗凝血酶活性物质转移率为评价指标,通过单因素试验考察粉碎度、浸泡时间、加水量、煎煮次数、煎煮温度及时间对提取工艺的影响,并与传统饮片进行比较。结果:水蛭煮散的最佳提取工艺为取水蛭最粗粉,加20倍量水浸泡10 min,于100℃煎煮提取3次,每次20 min;抗凝血酶活性物质转移率达93.31%,高于传统饮片的52.44%。结论:优选的提取工艺稳定可行,水蛭煮散具有效率高、时间短、能耗低、环保等优点,为水蛭煮散的工业化生产和新药开发提供参考。

脑血康分散片的制备及其抗凝血酶活性测定

目的制备脑血康分散片并测定其抗凝血酶活性。方法采用水提醇沉法提取水蛭浸膏,以微晶纤维素作为主要辅料制备脑血康分散片,采用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性。结果所制备的脑血康分散片抗凝血酶活性为23.3~29.2 U/片。结论该制剂工艺简单、操作方便;凝血酶滴定法简单且准确,可作为脑血康分散片质量控制的一个指标。

血蛭康胶囊提取工艺优化及其体外抗凝、溶栓活性研究

目的优化血蛭康胶囊提取工艺,并评价其体外抗凝、溶栓活性。方法在单因素试验基础上,以渗漉体积流量、乙醇体积分数、浸泡时间、乙醇用量为影响因素,阿魏酸提取率、干膏得率的综合评分为评价指标,正交试验优化提取工艺。采用凝血酶滴定法考察体外抗凝活性,血凝块溶解法考察体外溶栓活性。结果最佳条件为4倍量70%乙醇浸泡24 h,渗漉体积流量2 mL/min,综合评分为108.49分。胶囊体外抗凝活性值为240 U/g。与阴性组比较,血蛭康胶囊中、高剂量组小鼠血凝块溶解率升高(P<0.05,P<0.01)。结论该方法稳定可行,可用于提取体外抗凝、溶栓活性良好的血蛭康胶囊。

蜈蚣药材薄层鉴别及抗凝活性定量的研究

目的:对蜈蚣药材的薄层鉴别及抗凝活性定量方法进行研究,为该药材质量控制标准的完善提供依据。方法:对蜈蚣药材中游离精、丝氨酸进行薄层层析,筛选供试品制备方法及展开剂系统;以凝血酶滴定法测定蜈蚣药材抗凝活性,筛选药材前处理方法。结果:蜈蚣药材经甲酸及95%乙醇(1∶1)超声处理后,以正丁醇-乙酸-水(12∶5∶4)体系于硅胶G板上进行薄层层析,经茚三酮显色后,斑点清晰,杂质及拖尾影响较小,目标成分分离度较好;以凝血酶滴定法测定蜈蚣药材抗凝活性,结果重现性较好,超声法提取药材中的抗凝成分,操作简单,耗时较短,所制供试品抗凝血酶活性为(14.00±1.53)U/g;另测3批不同批次蜈蚣药材抗凝活性分别为:(13.00±0.58)U/g、(17.00±1.15)U/g、(15.67±1.53)U/g。结论:所选择的薄层鉴别及抗凝活性定量方法可作为完善蜈蚣药材质量标准的依据。

地龙抗凝活性物质提取方法研究

目的比较不同提取方法对两种不同品种的地龙——广地龙和沪地龙提取物抗凝活性的影响,分别确定两种地龙的最佳提取方法。方法应用凝血酶滴定法分别比较两个不同品种地龙干品水煎煮、0.9% NaCl煎煮、70%乙醇回流提取、石油醚脱脂后水煎煮、石油醚脱脂后0.9% NaCl煎煮及石油醚脱脂后70%乙醇回流提取6种不同提取方法提取物中抗凝活性物质的差异。结果以宽体金钱蛭为阳性对照,与空白组、阴性组对照后,两种地龙分别在6种提取方法下提取物均表现抗凝活性,并且两种地龙均是石油醚脱脂后0.9% NaCl煎煮提取物中抗凝活性最强。结论不同品种的地龙抗凝活性强度与提取前处理、提取方法有密切联系,干品石油醚脱脂有利于地龙抗凝活性物质的提取。

活血通脉胶囊制备工艺及质量标准研究

目的探讨活血通脉胶囊的制备工艺及质量标准。方法采用显微镜观察与TLC法对活血通脉胶囊进行定性鉴别,用凝血酶滴定法测定活血通脉胶囊的含量。在高温、高湿、强光3个影响因素下,从性状、水分、崩解时限、含量等方面考察活血通脉胶囊的稳定性。结果该产品每1g含抗凝血酶活性不低于16.0U,在高温、高湿、强光条件下,稳定性良好。结论制备工艺合理,检测方法可用于活血通脉胶囊的质量控制。

酶解水蛭地龙混合药渣的工艺研究及其产物的抗凝活性评价

[目的]考察蛋白酶酶解水蛭地龙混合药渣的工艺条件,评价其酶解产物的抗凝活性。[方法]分别采用碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶对混合药渣进行酶解实验。采用凝血酶滴定法和纤维蛋白原平板溶圈法评价酶解产物的体外抗凝活性,以确定最佳酶种类。溶液pH、酶底比、酶解时间、酶解温度为考察因素,单因素实验优化酶解工艺。[结果]与药渣对照组和蛋白酶对照组对比发现,水蛭地龙混合药渣酶解液显示出较强抗凝活性。其中,碱性蛋白酶酶解产物的抗凝效果最好。其最佳工艺条件为酶底比0.95%、pH 11.4、酶解温度45℃,酶解时间4 h。[结论]经碱性蛋白酶酶解后,水蛭地龙药渣酶解液的抗凝活性最强。实验为废弃药渣的再利用提供实验依据和开发方向。

铅污染对水蛭的体外抗凝血活性的影响

目的探讨重金属铅污染对水蛭抗凝血活性的影响。方法选取市场上主流的水蛭品种—蚂蟥Whitmania pigra Whitman,将蚂蟥种苗随机分为正常对照组、铅低残留组、铅中残留组、铅高残留组各70条,分别养殖在含有原始土壤、低剂量硝酸铅土壤、中剂量硝酸铅土壤、高剂量硝酸铅土壤的水族箱中。50 d后获得不同程度铅污染的水蛭样品,分别采用凝血酶滴定法和凝血酶时间(TT)法评价其抗凝血活性。结果凝血酶滴定法测定结果显示,与生理盐水相比,各组水蛭样品均显示出抗凝血活性,且效价均高于药典对水蛭药材的规定(3 U/g);与正常对照组相比,铅高残留组水蛭的U值较低(P<0.01)。TT法结果显示,与生理盐水相比,各组水蛭样品均能延长TT;其中铅高残留组水蛭的TT较正常对照组水蛭的短(P<0.01)。结论铅污染可降低水蛭的抗凝血活性。

水蛭胶囊质量标准研究

目的:建立水蛭胶囊的质量标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)对水蛭胶囊中的水蛭进行定性鉴别,采用凝血酶滴定法对水蛭胶囊抗凝血酶活性进行测定。结果:水蛭的TLC色谱斑点清晰,分离度好。水蛭胶囊抗凝血酶活性均值为142.0 U/g。结论:本研究建立的质量标准方法简便、准确,可用于水蛭胶囊的质量控制。

基于抗凝血酶活性效价的麝香质量生物评价方法研究

该文尝试建立麝香体外抗凝血酶活性效价测定方法,探索品种和产地对麝香抗凝血酶生物活性的影响,为麝香质量生物评价提供科学依据。采用凝血酶滴定法,考察麝香供试品溶液浓度、纤维蛋白原浓度、凝血酶浓度、凝血酶滴定时间间隔对麝香抗凝血酶活性测定的影响,并比较不同品种和产地麝香抗凝血酶活性的大小。结果显示,麝香供试品溶液浓度在一定范围内（0.010.02 g·m L-1）,纤维蛋白原浓度为0.5%,凝血酶浓度为10 U·m L-1,滴定间隔时间为1 min,每次滴定2μL时,麝香供试品溶液浓度与凝血酶消耗体积呈良好的线性关系（r=0.991 4）。不同产地林麝麝香抗凝血酶活性效价为（105.0±10.4）U·g-1,马麝麝香抗凝血酶活性效价为（102.4±5.5）U·g-1,原麝（安徽）麝香抗凝血酶活性效价为（97.7±6.6）U·g-1,人工麝香抗凝血酶活性效价为（58.6±6.4）U·g-1。结果表明,抗凝血酶活性效价测定方法简便、快速、准确、可靠,可用于麝香质量生物评价;品种和产地对麝香抗凝血酶活性影响较大,在麝人工饲养时应注意品种和产地的选择;人工麝香和天然麝香的抗凝血酶活性差异较大,提示人工麝香处方配比可能有待进一步优化。

宽体金线蛭抗凝血活性物质的提取方法

目的:比较不同提取方法对宽体金线蛭提取物抗凝活性的影响,确定抗凝活性物质的较佳提取方法。方法:应用凝血酶滴定法、APTT试剂盒法、PT试剂盒法等3种检测方法比较干品冷提、干品热提、干品脱脂后热提及鲜品冷提等提取物中抗凝活性的差异。结果:与空白对照组比较,各种提取方法所得提取物均具有明显的抗凝活性,各种检测方法所得结果一致。其中,水蛭鲜品和干品脱脂后提取物中抗凝活性较强。结论:水蛭提取物的抗凝活性强弱与原料的处理和提取方法有关。水蛭干品脱脂有利于提高提取物的抗凝活性。凝血酶滴定法可作为提取物抗凝活性的初步检测方法,其结果稳定,易于操作。APTT、PT试剂盒法可作为抗凝活性进一步检测的方法。