子痫前期孕妇胎盘组织中miR-377-3p、血小板凝血酶蛋白1 mRNA表达分析

目的 观察子痫前期(PE)孕妇胎盘组织中微小RNA-377-3p(miR-377-3p)和血小板凝血酶蛋白1(THBS1)的表达变化,分析二者与PE发病的关系。方法 选择PE孕妇65例纳入PE组,其中重度PE 30例、轻度PE 35例;选择同期正常分娩孕妇40例纳入对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组孕妇胎盘组织中的miR-377-3p和THBS1 mRNA,分析miR-377-3p、THBS1 mRNA表达与PE孕妇临床病理参数的关系,采用双荧光素酶实验验证miR-377-3p对THBS1 mRNA的调控作用。结果 PE组孕妇胎盘组织中miR-377-3p表达低于对照组,且轻度患者低于重度患者(P均<0.05);PE组THBS1 mRNA表达高于对照组,且轻度患者高于重度患者(P均<0.05)。PE组胎盘组织中miR-377-3p表达与收缩压、舒张压和24 h尿蛋白呈负相关(r分别为-0.339、-0.530、-0.541,P均<0.05),与血小板计数呈正相关(r=0.439,P<0.05);THBS1 mRNA表达与收缩压、舒张压和24 h尿蛋白呈正相关(r分别为0.397、0.306、0.467,P均<0.05),与血小板计数呈负相关(r=-0.289,P<0.05)。miR-377-3p与THBS1存在潜在的互补结合位点,miR-377-3p可负向调节THBS1 mRNA表达。结论 PE孕妇胎盘组织中miR-377-3p表达下调、THBS1 mRNA表达上调,二者异常表达可能与PE严重程度及妊娠结局有关;miR-377-3p可能通过靶向调控THBS1 mRNA表达影响PE的发生发展。

利用互补核酸杂交富集金胶实现信号扩增的电化学凝血酶蛋白生物传感器研究

介绍了一种利用互补核酸杂交富集金胶实现信号扩增的蛋白质生物传感器.以凝血酶蛋白为研究对象,利用凝血酶蛋白相对应的两段核酸适配体,将适配体Ⅰ固定在磁性颗粒上,用于特异性地捕获蛋白,将适配体Ⅱ标记金胶作为检测信标.由凝血酶蛋白和相对应的两段核酸适配体构建三明治结构的凝血酶蛋白生物传感器.另外,再通过信标金胶上过剩的核酸适配体链与另一段标记有金胶的互补核酸进一步杂交,获得金胶的选择性聚集,实现了信号扩增.通过信号扩增,使此传感器的灵敏度大大提高,对凝血酶蛋白的检测下限可达到4.52×10-15mol/L.平行测定浓度为7.47×10-14mol/L的凝血酶8次,其RSD为3.0%.该生物传感器对凝血酶蛋白有很好的特异性,其它蛋白如溶菌酶和牛血清白蛋白的存在对于检测没有影响.

异常凝血酶蛋白在HBV相关肝癌中的诊断价值研究

目的:探究异常凝血酶蛋白在HBV相关肝癌中的诊断价值。方法:收治原发性肝癌患者120例,其中HBV相关肝癌60例作为观察组,非HBV相关肝癌60例作为对照组。比较两组PIVKA-Ⅱ、AFP水平。结果:观察组PIVKA-Ⅱ、AFP水平明显高于对照组(P<0.05)。PIVKA-Ⅱ诊断HBV相关肝癌的准确率高于AFP(P<0.05)。结论:HBV相关肝癌患者PIVKA-Ⅱ和AFP水平均较高,且PIVKA-Ⅱ诊断的准确率更高。

白蛋白和凝血酶原时间比率对肝癌手术预后的预测价值

目的探讨肝癌患者行肝切除术前白蛋白和凝血酶原时间比率(APT)对预后的预测价值。方法选择2014年1月至2020年12月在广西医科大学第一附属医院治疗的272例经临床病理证实的肝细胞癌患者。建立ROC曲线,确定最佳截断值,将患者分为高低APT水平组,通过COX分析筛选肝癌患者的预测术后预后因素,K-M曲线分析APT对肝癌术后预后的影响。结果根据最佳截断值2.981,将APT分成高低水平组,曲线下面积为0.751(P<0.05)。总胆红素、凝血酶原时间(PT)、甲胎蛋白(AFP)等与APT水平分组均无明显相关(P>0.05),APT水平与肝癌患者预后呈正相关(P<0.05)。COX回归分析显示,总胆红素、AFP、肝硬化等与肝癌患者预后无关,而高低APT水平与肝癌预后相关[Exp(B)=4.32,95%CI:1.824~10.27,P=0.001]。结论APT是肝癌手术预后有效的预测指标。

沙库巴曲缬沙坦钠片联合恩格列净对糖尿病肾病合并高血压病患者肾血流动力学及血清凝血酶调节蛋白水平的影响

目的探讨沙库巴曲缬沙坦钠片联合恩格列净对糖尿病肾病合并高血压病患者肾血流动力学及血清凝血酶调节蛋白水平的影响。方法选择2020年6月至2022年7月河北省沧州市中心医院收治的158例糖尿病肾病合并高血压病患者为研究对象,按照随机数字表法将患者分为联合治疗组和恩格列净组,各79例。恩格列净组在常规治疗基础上口服恩格列净治疗;联合治疗组在恩格列净组基础上给予沙库巴曲缬沙坦钠片治疗。2组均持续治疗6个月。比较2组治疗前后血糖、血压指标、体质量、肾血流动力学指标、肾功能指标及凝血酶调节蛋白水平。比较2组临床疗效及不良反应发生情况。结果治疗后,2组收缩压、舒张压、空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、体质量、全血高切黏度、全血低切黏度、纤维蛋白原、血小板聚集率、血肌酐、血尿素氮、尿蛋白排泄率、凝血酶调节蛋白水平均低于治疗前,估算肾小球滤过率均高于治疗前,且联合治疗组变化均优于恩格列净组(均P<0.05)。联合治疗组总有效率高于恩格列净组[96.2%(76/79)比82.3%(65/79)],差异有统计学意义(P=0.005)。联合治疗组总不良反应发生率低于恩格列净组[5.1%(4/79)比7.6%(6/79)],但差异无统计学意义(P=0.513)。结论沙库巴曲缬沙坦钠片联合恩格列净可降低糖尿病肾病合并高血压病患者血糖、血压、血清凝血酶调节蛋白水平,减轻肾功能损伤,改善肾血流动力学,提高临床疗效。

超声心动图联合血清凝血酶敏感蛋白1、甲壳质酶蛋白40浓度对高血压性心脏病患者的诊断价值

目的分析超声心动图联合血清凝血酶敏感蛋白1(thrombospondin-1,TSP-1)、甲壳质酶蛋白40(chitinase protein 40,YKL-40)浓度检测对高血压性心脏病患者的诊断价值。方法选择2021年1月至2022年6月四川友谊医院收治的高血压性心脏病患者98例(心脏病组)进行研究,患者入组均接受超声心动图检查。酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清TSP-1、YKL-40浓度。Pearson法分析高血压性心脏病患者血清TSP-1、YKL-40浓度与超声心动图各项参数的相关性,采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评估血清TSP-1、YKL-40浓度诊断高血压性心脏病的可靠性。结果与对照组相比,心脏病组患者的收缩压、舒张压、左心房前后直径(left atrial anteroposterior diameter,LAD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVESD)、左心房内径指数(left atrial inner diameter index,LADI)、室间隔舒张末期厚度(end-diastolic interventricular septum thickness,IVST)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)、左心室后壁舒张末期厚度(left ventricular posterior wall end-diastolic thickness,LVPWT)、左心室舒张晚期峰值流速(diastolic advanced stage filling peak rate of flow,VA)值较高,二尖瓣血流舒张早期左心室充盈峰速(peak velocity of left ventricular filling during early diastole,VE)值、峰值速度比率(ratio of E velocity to A velocity,E/A)较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,心脏病组患者血清TSP-1、YKL-40浓度较高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson法分析显示,血清TSP-1、YKL-40浓度与LAD、LVESD、LADI、IVST、LVEDD、LVPWT、VA值均呈正相关(P<0.05),与VE值、E/A均呈负相关(P<0.05)。超声心动图评估患者发生高血压性心脏病的准确度为88.00%,血清TSP-1、YKL-40浓度对高血压性心脏病诊断的准确度为81.00%、82.50%。超声心动图联合血清TSP-1、YKL-40浓度对高血压性心脏病诊断的准确度为91.50%,其灵敏度为95.92%,特异度为87.25%。结论高血压性心脏病患者血清中TSP-1、YKL-40浓度升高,血清TSP-1、YKL-40浓度对高血压性心脏病有一定诊断价值,超声心动图联合血清TSP-1、YKL-40浓度可明显提高高血压性心脏病诊断的准确性。

不同Child-Pugh分级肝硬化患者血清TSP-1、球蛋白/胆碱酯酶的表达水平差异及其疾病预后危险因素分析

目的分析不同Child-Pugh分级肝硬化患者血清凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)、球蛋白/胆碱酯酶的表达水平差异及其疾病预后危险因素。方法回顾性选取2020年2月至2023年2月新疆医科大学第一附属医院收治的70例肝硬化患者作为主要研究对象,根据Child-Pugh分级将其分为Child-Pugh A级组(n=20),Child-Pugh B级组(n=34),Child-Pugh C级组(n=16),另选取同期在本院进行体检的50名健康人群作为对照组。采用酶联免疫吸附试验法检测4组及肝硬化不同预后患者的血清TSP-1、球蛋白、胆碱酯酶、球蛋白/胆碱酯酶表达水平;采用双变量Spearman相关性检验血清TSP-1、球蛋白、胆碱酯酶、球蛋白/胆碱酯酶与肝硬化患者Child-Pugh分级和预后的相关性;建立多因素Logistic模型分析影响肝硬化患者预后的独立危险因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TSP-1、球蛋白/胆碱酯酶对肝硬化预后的预测价值。结果与对照组比较,Child-Pugh A级组、Child-Pugh B级组、Child-Pugh C级组患者的血清TSP-1、球蛋白、球蛋白/胆碱酯酶表达水平较高,血清胆碱酯酶表达水平较低;与Child-Pugh A级组患者比较,Child-Pugh B级组、Child-Pugh C级组患者的血清TSP-1、球蛋白、球蛋白/胆碱酯酶表达水平较高,血清胆碱酯酶表达水平较低;与Child-Pugh B级组比较,Child-Pugh C级组患者的血清TSP-1、球蛋白、球蛋白/胆碱酯酶表达水平较高,血清胆碱酯酶表达水平较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清TSP-1、球蛋白、球蛋白/胆碱酯酶表达水平较高,血清胆碱酯酶表达水平较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。肝硬化患者血清TSP-1、球蛋白/胆碱酯酶与Child-Pugh分级和预后均呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic分析结果显示,Child-Pugh分级、TSP-1、球蛋白/胆碱酯酶均是影响肝硬化患者预后的独立危险因素(P<0.05)。血清TSP-1、球蛋白/胆碱酯酶与TSP-1+球蛋白/胆碱酯酶预测肝硬化患者预后的曲线下面积值分别为0.814、0.824、0.885。结论血清TSP-1、球蛋白/胆碱酯酶异常表达与肝硬化Child-Pugh分级及其预后均存在一定关联,可作为肝硬化患者的Child-Pugh分级及预后的辅助预测指标。

凝血酶调节蛋白联合中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚氨酶4预警非瓣膜性房颤合并急性缺血性脑卒中患者缺血事件复发

目的研究凝血酶调节蛋白(TM)联合中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)预警非瓣膜性心房颤动(NVAF)合并急性缺血性脑卒中(AIS)患者缺血事件复发风险。方法纳入2020年8月至2023年2月期间于天津市西青医院就诊的NVAF合并AIS患者164例为患者组,男71例,女93例,年龄51~83岁。采用Shine i2900型全自动化学发光免疫分析仪测定血浆TM水平;采用TECAN Sunrise酶标仪测定血清PAD4水平。以Kruskal-Wallis H检验进行多组间比对,以Mann-Whitney U检验进行两组间数据比对;用Friedman秩和检验进行同组内各时间节点数据比较;用ROC曲线分析诊断性能;用Logistic回归进行关联性分析;用Kaplan-Meier曲线进行生存分析,Cox比例风险回归模型获得HR值。结果在治疗前和治疗后,复发组血浆TM水平均高于未复发组(P值均<0.001);未复发组在治疗后血浆TM水平显著低于治疗前(P<0.001),复发组治疗后TM水平与治疗前差异无统计学意义(P=0.166)。AIS患者组在治疗前、后的血清PAD4水平均显著高于健康对照组(P值均<0.001)。治疗前,未复发组血清PAD4水平与复发组间的差异无统计学意义(P=0.093);治疗后,复发组显著高于未复发组(P<0.001);未复发组在治疗后血清PAD4水平低于治疗前(P<0.001),复发组在治疗后显著高于治疗前间(P<0.001)。治疗前,血浆TM的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))为0.885,临界值为13.04TU/mL;治疗后,AUC^(ROC)为0.909,临界值为10.52TU/mL。治疗前,血清PAD4的AUC^(ROC)为0.606,临界值为11.45ng/mL;治疗后,AUC^(ROC)为0.939,临界值为10.00ng/mL。TM与PAD4联合评估的治疗前AUC^(ROC)为0.877,治疗后AUC^(ROC)为0.976。用Logistic回归做多元分析,AIS患者治疗后的TM和PAD4水平均与充血性心力衰竭和高血压有显著相关性(P<0.05)。生存分析显示,治疗后,TM、PAD4以及两项指标联合评估,均可有效预测患者在随访期内缺血事件复发的累积风险(Log-rankχ^(2)分别为20.597、5.836和27.786,P值分别为<0.001、0.016和<0.001)。Cox回归模型显示,TM与PAD4联合评估可有效预测AIS患者随访期内的缺血事件复发风险(HR=1.397)。结论NVAF并发AIS患者TM和PAD4水平显著增高,并随病情发展趋势而改变,通过对上述两项指标的动态监测和联合评估,可有效预警AIS患者缺血事件复发的风险,为临床早期识别和及时干预提供依据。

血清凝血酶敏感蛋白-2和分泌型卷曲相关蛋白5在射血分数保留的心力衰竭患者中表达变化及其与超声心动图参数的相关性

目的检测凝血酶敏感蛋白-2(TSP-2)、分泌型卷曲相关蛋白5(sFRP5)在射血分数保留心力衰竭(HFpEF)患者血清中表达水平,并探讨其与超声心动图参数相关性。方法选取2019年8月至2021年8月四川友谊医院收治的HFpEF患者90例为研究组,另取同期体检者90例为对照组。收集患者一般资料,酶联免疫吸附试验检测各组血清中TSP-2、sFRP5的表达水平;超声心动图检测并分析心功能相关指标:左心室舒张末期容积(EDV)、左心室收缩末期容积(ESV)、每搏量(SV)、左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS);Pearson法分析血清TSP-2、sFRP5与超声心动图参数相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TSP-2、sFRP5水平对HFpEF的诊断效能;多因素logistic回归分析HFpEF发生的影响因素。结果与对照组比较,研究组患者血清TSP-2水平升高[(28.18±6.05)ng/ml比(20.79±5.20)ng/ml],sFRP5水平降低[(30.72±6.46)ng/ml比(38.64±9.16)ng/ml],差异有统计学意义(P<0.05);研究组EDV、ESV高于对照组[(116.25±18.25)ml比(95.62±12.25)ml,(78.21±13.36)ml比(67.32±8.89)ml],LVEF、FS、SV低于对照组[(61.02±6.37)%比(63.46±8.35)%,(24.05±6.77)%比(36.74±6.19)%,(62.67±10.08)ml比(71.06±7.33)ml],差异有统计学意义(P<0.05);研究组NYHA分级Ⅳ、Ⅲ级患者血清TSP-2水平高于Ⅰ、Ⅱ级,Ⅳ级患者血清TSP-2水平高于Ⅲ级(P<0.05);NYHA分级Ⅳ、Ⅲ级患者血清sFRP5水平低于Ⅱ、Ⅰ级,Ⅳ级血清sFRP5水平低于Ⅲ级(P<0.05);经Pearson相关性分析发现,研究组患者血清中TSP-2水平与LVEF、FS、SV呈负相关(r=-0.566,-0.561,-0.533,P<0.05),与EDV、ESV呈正相关(r=0.504,0.607,P<0.05),血清sFRP5水平与LVEF、FS、SV呈正相关(r=0.572,0.594,0.552,P<0.05),与EDV、ESV呈负相关(r=-0.569,-0.631,P<0.05);血清TSP-2联合sFRP5诊断HFpEF的曲线下面积为0.927,优于单一指标TSP-2、sFRP5检测(Z/P=3.047/0.002、3.752/0.000);回归分析显示,LVEF、TSP-2、sFRP5是HFpEF发生的影响因素(P<0.05)。结论血清TSP-2、sFRP5在HFpEF患者中分别呈高水平、低水平,与NYHA分级及超声心动图参数密切相关,并对HFpEF患者有一定临床诊断价值。

血小板凝血酶蛋白1下调对肺腺癌A549细胞生物学功能的影响

目的观察血小板凝血酶蛋白1（THBS1）表达下调对肺腺癌A549细胞的细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。 方法采用Western blot法检测肺腺癌细胞株A549、H1299、H358、H1975、PC9、PG49及Calu3中THBS1蛋白的表达水平，脂质体将THBS1小干扰RNA（siRNA）和对照siRNA分别转染至THBS1蛋白表达水平最高的A549细胞，Western blot检验转染THBS1 siRNA组、对照组和未转染组细胞中THBS1蛋白的表达，然后采用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组细胞的增殖，采用流式细胞术分析各组细胞的细胞凋亡及细胞周期分布。 结果不同肺腺癌细胞株中THBS1蛋白的表达水平不同，其中A549细胞（1.120±0.087）表达最高（F＝358.087，P＝0.000）。与未转染组A549细胞和对照组比较：转染THBS1 siRNA组中A549细胞中THBS1蛋白表达量（0.053±0.023）显著降低（P＝0.000），细胞增殖能力减弱（P＝0.000），细胞的凋亡率[转染THBS1 siRNA组早期、中晚期及总凋亡率分别为（17.00±1.33）%、（3.70±0.56）%和（20.71±0.78）%升高（F值分别为115.899、14.418和167.329，P值分别为0.000、0.005和0.000]，G0/G1期细胞百分比（68.43±2.26）%显著升高（F＝46.521，P＝0.000），S期细胞百分比（22.33±2.15）%降低（F＝16.621，P＝0.004），G2/M期细胞百分比（9.23±2.35）%降低（F＝9.282，P＝0.015），以上差异均有统计学意义。 结论沉默THBS1基因，降低肺腺癌A549细胞中THBS1蛋白表达可以减弱细胞的增殖能力，促进细胞凋亡并抑制细胞周期进程。

经皮人工血栓抽吸联合利伐沙班对深静脉血栓患者凝血酶调节蛋白、P-选择素的影响

目的探讨经皮人工血栓抽吸联合利伐沙班对深静脉血栓(DVT)患者的治疗效果及对凝血酶调节蛋白(TM)、P-选择素(P-selectin)的影响。方法选取2019年6月至2021年6月保定市第四中心医院收治的110例DVT患者,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组55例。比较两组患者的临床疗效、凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)]、血小板参数[血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)]水平、血清学指标[凝血酶调节蛋白(TM)、P-选择素、血栓前体蛋白(TpP)]水平及不良反应发生情况。结果观察组患者的总有效率高于对照组患者,差异有统计学意义(P﹤0.05)。治疗后,两组患者的PT、TT、APTT均长于本组治疗前,FIB水平低于本组治疗前,且观察组患者的PT、TT、APTT均长于对照组患者,FIB水平低于对照组患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。治疗后,两组患者的PLT、PDW、MPV水平均低于本组治疗前,且观察组患者的上述指标水平均低于对照组患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。治疗后,两组患者的TM、P-选择素、TpP水平均低于本组治疗前,且观察组患者的上述指标水平均低于对照组患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。治疗期间,两组患者的不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论经皮人工血栓抽吸联合利伐沙班对DVT患者的溶栓效果显著,能够改善患者的凝血功能和血小板参数水平,降低血清学指标水平,安全性较高,可临床推广。

凝血酶蛋白酶激活受体-1作为转移性黑色素瘤治疗潜在靶点的研究进展

黑色素瘤由于转移性强,成为皮肤癌中死亡率最高的恶性肿瘤之一,目前没有有效的治疗方法。凝血酶蛋白酶激活受体-1(PAR-1)在黑色素瘤的发病过程中起到重要作用,PAR-1通过激活肿瘤细胞黏附和侵袭以及新生血管因子生成促进黑色素瘤转移。PAR-1有望成为治疗转移性黑色素瘤药物新靶点。

凝血酶原国际标准化比值/白蛋白、终末期肝病模型联合血清钠和高密度脂蛋白胆固醇联合检测对慢加急性肝衰竭患者预后的预测价值

目的 探讨凝血酶原国际标准化比值/白蛋白(PTAR)、终末期肝病模型联合血清钠(MELD-Na)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)联合检测对慢加急性肝衰竭(ACLF)患者预后的预测价值。方法 回顾性分析154例ACLF患者的临床资料,根据确诊第90天的预后情况分为生存组(95例)和死亡组(59例)。比较2组患者入院时的临床基线指标。分析PTAR、HDL-C、MELD-Na之间的相关性。分析ACLF患者预后的影响因素。绘制PTAR、HDL-C、MELD-Na单项及联合预测(PTAR+MELD-Na+HDL-C)模型的受试者工作特征(ROC)曲线,评估其对ACLF患者预后的预测效能。根据联合模型的截断值(0.530),将患者分为A组(<0.530,n=47)和B组(≥0.530,n=107)。采用Kaplan-Meier曲线分析比较2组生存率。结果 2组患者年龄、总胆红素(TBil)、白蛋白(ALB)、血肌酐(Cr)、凝血酶原时间(PT)、血清钠(Na+)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、PTAR、HDL-C、MELD-Na比较,差异有统计学意义(P<0.05)。PTAR与MELD-Na呈正相关(r=0.407,P<0.001);PTAR、MELD-Na与HDL-C呈负相关(r=-0.316、-0303,P<0.001)。年龄、TBil、PT、PTAR、MELD-Na是ACLF患者预后的独立影响因素(P<0.05), HDL-C是ACLF患者预后的有效预测因子。PTAR、HDL-C、MELD-Na的曲线下面积(AUC)分别为0.722、0.717、0.738;联合预测模型的AUC为0.801(95%CI:0.722~0.881,P<0.001),敏感度为0.627,特异度为0.916,约登指数为0.543,截断值为0.530。Kaplan-Meier曲线分析显示,A组患者累计生存率高于B组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 PTAR、HDL-C、MELD-Na均是ACLF患者近期预后的独立影响因素,上述三者联合预测模型对ACLF患者预后的预测价值较好。

MCAO大鼠不同时相凝血酶mRNA、凝血酶蛋白的变化规律探讨

目的：通过观察大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠模型不同时相神经功能缺失评分以及脑组织凝血酶mRNA和蛋白的表达,探讨MCAO大鼠缺血后神经功能缺损症状及凝血酶的变化规律,为药物研究确定最佳观察时间点。方法：雄性SD大鼠35只,随机分为假手术组和缺血后不同时相（1、6、12、24、48、72h）组,每组5只。对缺血后不同时相组采用线栓法制造MCAO大鼠模型,各组在取材前均进行神经功能缺失评分,用荧光定量实时PCR法检测大鼠脑组织凝血酶mRNA的表达水平;Western blot法检测大鼠脑组织凝血酶蛋白表达水平。结果：假手术组大鼠无神经功能损伤的症状,缺血后1~72h组大鼠表现为对侧前爪内收、向对侧转圈行走、向对侧倾倒等,以缺血后24h最为显著;大鼠脑缺血后1h凝血酶基因表达即增强且于24h达峰值;凝血酶蛋白的表达在脑缺血后1h即增多,持续上升到24h,然后维持在较稳定的高水平。结论：MCAO大鼠在急性脑缺血后凝血酶mRNA、凝血酶蛋白表达均增强,其峰值均集中在缺血后24h,此时大鼠神经功能缺损症状也最为显著,提示凝血酶可能参与了急性脑缺血的病理损害,缺血后24h可作为药物研究的最佳观察时间点。

采用超低场生物力谱技术研究核酸适配体与凝血酶蛋白的相互作用

蛋白质和核酸是构成生命体最为重要的两类生物大分子,它们之间的相互作用是分子生物学研究的中心问题之一,也是许多生命活动的重要组成部分。本文基于一种全新的超低场生物力谱技术,以凝血酶蛋白为研究对象,考察了凝血酶与其对应的核酸适配体之间的相互作用。结果表明,凝血酶蛋白与核酸适配体之间的结合力大小约为80 p N。同时,在分子水平上获得了凝血酶蛋白与核酸适配体之间的解离动力学信息。

益气活血法对脑出血大鼠脑内凝血酶敏感蛋白-1及其受体CD36表达的影响

目的通过观察益气活血法对脑出血大鼠脑内损伤区凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)及其受体CD36表达的影响,初步探讨益气活血法治疗脑出血的机制。方法将155只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组;用Ⅶ型胶原酶诱导脑出血大鼠模型,再对相应的组分别灌服补阳还五汤及该方的益气药组和活血药组,在不同的时间点取脑组织并用免疫印迹(Western-blotting)分析鼠脑TSP-1及CD36的表达。结果正常组和假手术组不同时间点TSP-1和CD36表达无明显变化。模型组TSP-1在脑出血后4 d达高峰,CD36分别在脑出血后4、28 d达高峰。益气活血组1 d TSP-1表达低于模型组(P<0.01),4 d TSP-1和CD36表达均低于模型组(P<0.01),28 d CD36表达高于模型组(P<0.01)。结论益气活血法有可能通过影响脑出血后损伤区TSP-1及其受体CD36的表达,降低其对血管新生的抑制作用,促进新生血管成形、成熟和脑组织修复。

中西医结合治疗支原体肺炎的疗效及对血浆凝血酶调节蛋白和D-二聚体的影响

目的：探讨中西医结合治疗支原体肺炎的临床疗效及对血浆凝血酶调节蛋白和D-二聚体的影响。方法：选择院内收治的128例支原体肺炎患者作为观察对象，随机将其分为观察组和对照组各64例，给予对照组院内常规抗支原体感染治疗，观察组在对照组基础上联合应用中草药进行治疗，对比两组临床治疗效果及对血浆凝血酶调节蛋白和D-二聚体的影响。结果：观察组总有效率为95．31％，显著高于对照组的79．69％，比较差异有统计学意义（P〈0．05）；治疗后两组血浆凝血酶调节蛋白和D-二聚体指标水平均显著低于治疗前，比较差异均有统计学意义（P〈0．05），而观察组降低的更为明显，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：对于支原体肺炎感染的患者而言，综合应用中西医结合疗法进行治疗，不仅可获得较为满意的临床治疗效果，而且还能降低患者血浆凝血酶调节蛋白和D-二聚体的水平，更加有利于患者的恢复。

凝血酶敏感蛋白-1在2型糖尿病心肌病大鼠心肌中的表达及意义

目的:探讨凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)在2型糖尿病心肌病(DCM)发病中的作用。方法:采用高脂高热量饮食诱导出胰岛素抵抗,加小剂量链脲佐菌素注射建立DCM动物模型,12周后采用Masson染色、免疫组织化学染色、实时定量逆转录-聚合酶链反应、Western blotting技术,检测左室心肌胶原含量、TSP-1mRNA和蛋白质表达水平的变化。结果:DCM大鼠左室心肌组织胶原含量明显高于对照组(11.01±3.05vs16.92±3.18,P<0.01),TSP-1mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组(0.0089±0.0034vs0.0141±0.0037,P<0.05;96.38±16.80vs129.98±16.96,P<0.05);TSP-1mRNA水平与血糖、心肌组织胶原含量、LVEDP均呈正相关(r=0.762,P<0.01;r=0.717,P<0.05;r=0.658,P<0.05);与LVSP、-dp/dtmax均呈负相关(r=-0.605,P<0.05;r=-0.694,P<0.05);TSP-1蛋白质表达水平与血糖、心肌组织胶原含量、LVEDP均呈正相关(r=0.735,P<0.01;r=0.750,P<0.01;r=0.716,P<0.05);与LVSP、-dp/dtmax均呈负相关(r=-0.633,P<0.05;r=-0.669,P<0.05)。结论:心肌组织TSP-1高表达在DCM心肌间质纤维化的发生中起着重要的作用。

人凝血酶敏感蛋白1抗血管生成活性片段重组腺病毒高效制备

目的构建人凝血酶敏感蛋白1(thrombospondin1,TSP1)抗血管生成片段重组腺病毒。方法采用RT-PCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增编码TSP1抗血管生成活性片段(TSP1f)的cDNA序列,并将其克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV上,以线性化重组穿梭载体与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组并酶切鉴定筛选正确重组子,用线性化重组质粒转染人胚肾293细胞,制备重组腺病毒ADV-TSP1f,最后以PCR及Westernblot方法鉴定TSP1抗血管生成片段的表达。结果细菌内同源重组共获得43个卡那霉素抗性克隆,经酶切鉴定表明其中直径最小的10个均为正确重组子,该重组质粒转染293细胞所获得的重组腺病毒可高效表达TSP1抗血管生成片段,纯化后病毒滴度为1.0×1011pfu/mL。结论细菌内同源重组法构建重组腺病毒高效快捷,所获得的ADV-TSP1f可进一步应用于抗肿瘤血管生成的基因治疗研究。

银屑病辨证分型与血小板凝血酶敏感蛋白及CD36分子表达的关系

近几年的研究表明,血小板活化可能在银屑病的发生与发展中起了重要作用.笔者采用流式细胞术和特异性单克隆抗体,对不同证型银屑病患者血小板凝血酶敏感蛋白(Thrombospondin,TSP,又称P10)及CD36(Ⅳ)分子的表达进行了定量研究,旨在为本病中医辨证分型提供客观指标,更好地指导本病的辨证论治.