凝血酶蛋白酶激活受体-1作为转移性黑色素瘤治疗潜在靶点的研究进展

黑色素瘤由于转移性强,成为皮肤癌中死亡率最高的恶性肿瘤之一,目前没有有效的治疗方法。凝血酶蛋白酶激活受体-1(PAR-1)在黑色素瘤的发病过程中起到重要作用,PAR-1通过激活肿瘤细胞黏附和侵袭以及新生血管因子生成促进黑色素瘤转移。PAR-1有望成为治疗转移性黑色素瘤药物新靶点。

血清基质金属蛋白酶-9、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体及纤溶酶原激活物抑制因子-1联合检测预测老年慢性心力衰竭患者预后的价值

目的 探讨血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)及纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达与老年慢性心力衰竭(CHF)患者心功能分级及预后的关系。方法 选取廊坊市中医医院收治的108例CHF患者及同期50例健康体检者分别作为研究组和对照组。采集受试者血液标本,测定血清MMP-9、suPAR及PAI-1水平。比较不同纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级患者及不同预后患者的血清指标差异,并分析各血清指标对不良预后的预测价值。结果 与对照组相比,研究组血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。NYHA分级Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平呈逐渐升高趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访1年的结果显示,预后良好65例,预后不良43例,预后不良率为39.81%(43/108)。与预后良好患者相比,预后不良患者的年龄更大,合并高血压率更高,左室射血分数(LVEF)更低,左室舒张末期内径(LVEDD)、MMP-9、suPAR及PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、MMP-9、suPAR、PAI-1均是老年CHF患者预后不良的危险因素,LVEF是老年CHF患者预后不良的保护因素(P<0.05)。血清MMP-9、suPAR、PAI-1单独检测及3项联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.711、0.829、0.768和0.840,3项联合检测的敏感度为88.21%,特异度为79.46%。结论 老年慢性CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1表达水平与心功能分级及预后不良密切相关。

滋阴活血解毒方对局灶性脑缺血大鼠凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体-1 mRNA含量的影响

目的观察滋阴活血解毒方对局灶性脑缺血模型大鼠脑组织凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体(PAR-1)mRNA表达的影响,探讨其脑保护机制。方法将24只大鼠随机分为假手术组、模型组、滋阴活血解毒方组、阿加曲班组,每组分1、3 d两个时间点。滋阴活血解毒方组灌服中药水煎剂,每日剂量32.4 g/kg;阿加曲班组为腹腔注射给药,第1、2日每日剂量为11.16 mg/kg,第3日剂量为3.72 mg/kg。假手术组和模型组均灌服等容量生理盐水,每日剂量为2 mL/100 g。均分2次给药。线栓法制备大脑中动脉闭塞模型。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑组织中凝血酶原mRNA及PAR-1mRNA表达水平。结果与假手术组比较,模型组脑组织中凝血酶原mRNA、PAR-1 mRNA表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01),滋阴活血解毒方组和阿加曲班组能明显下调凝血酶原mRNA、PAR-1 mRNA表达,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论滋阴活血解毒方能抑制脑组织中凝血酶原mRNA和PAR-1 mRNA的表达,减轻凝血酶的毒性反应,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。

蛋白酶激活受体-1在凝血酶诱导大鼠脑损伤及神经再生中的作用

目的:研究蛋白酶激活受体的激活在凝血酶所致大鼠脑损伤中的作用,以及与神经细胞再生的关系。方法:90只成年雄性SD大鼠随机分为5组,分别海马注射生理盐水(NS)、凝血酶以及3种蛋白酶激活受体的特异性激动剂,注射1 d、3 d、7 d后,用HE染色检测海马面积变化,用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色检测星形胶质细胞数量和形态,用Flouro-Jade C染色检测神经元变性,微管相关蛋白(DCX)标记检测神经细胞再生。结果:与NS组比较,注射凝血酶和蛋白酶激活受体-1激动剂后1～3 d出现海马面积显著增大(P<0.05),7 d出现海马面积明显缩小;注射后1～7 d GFAP阳性细胞、Flouro-Jade C阳性细胞增多(P<0.05);注射后3～7 d DCX阳性细胞增多(P<0.05)。而注射蛋白酶激活受体-3激动剂和蛋白酶激活受体-4激动剂均未见上述变化。结论:蛋白酶激活受体-1激活可能参与凝血酶所致的急性期脑损伤以及后期的神经再生。

蛛网膜下腔出血模型大鼠基底动脉蛋白酶激活受体-1的表达

目的探讨蛛网膜下腔出血(SAH)模型大鼠基底动脉PAR1表达与脑血管痉挛(CVS)之间的关系。方法 7周龄清洁级SD大鼠24只,随机数字表法分为正常组、SAH 3 d组、SAH 5 d组、SAH 7 d组,采取二次枕大池注血法建立大鼠SAH模型,观察动物行为学改变,SAH模型大鼠按照分组于术后3、5、7 d分别灌杀动物,显微镜下观察基底动脉组织学形态,并以Image-Pro Plus6.0图像分析软件测量基底动脉管腔横截面积,免疫组化检测基底动脉标本PAR1表达。结果 SAH制模术后参照Endo 4分制方法行神经功能评分SAH 3 d组中2分2只(33.3%),3分4只(66.7%);SAH 5 d组中1分3只(50%),2分3只(50%);SAH 7 d组中1分4只(66.7%),2分2只(33.3%);正常组均为1分。CVS观察:正常组无痉挛,SAH 3 d组出现基底动脉痉挛,SAH 5 d组基底动脉稍舒张,SAH 7 d组痉挛程度较3 d组加重,统计分析显示四组之间的差异有统计学意义(P<0.05),组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。PAR1免疫组织化学结果分析:正常组未见明显表达,SAH模型制作后后3、5、7 d组基底动脉PAR1有阳性表达。统计分析显示四组间PAR1平均光密度差异有统计学意义(P<0.01),组间两两比较显示正常组与SAH 3 d组、正常组与SAH 5 d组、正常组与SAH 7 d组、SAH 3 d组与SAH 5 d组、SAH 3 d组与SAH 7 d组差异具有统计学意义(P<0.01),SAH5 d组与SAH 7 d组相比差异具无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关分析显示PAR1平均光密度与SAH后基底动脉横截面积之间存在负相关(r为-0.779,P<0.01)。结论本实验中SAH大鼠模型基底动脉PAR1表达上调,并与CVS严重程度呈负相关关系,凝血酶受体PAR1在CVS发生发展过程中表达上调,提示凝血酶参与了SAH后CVS的病理过程。

蛋白酶激活受体-1拮抗剂降低心脏骤停后综合征兔血清炎性细胞因子的水平

目的：观察蛋白酶激活受体-1（PAR-1）拮抗剂对心脏骤停后综合征（PCAS）兔血清TNF-α、MCP-1和IL-8的影响。方法大耳白兔30只，随机分为假手术组、PCAS组、PAR-1拮抗剂组。采用窒息性心脏骤停制备兔PCAS模型。 PAR-1拮抗剂组在自主循环恢复后15 min给予PAR-1拮抗剂SCH79797（25μg／kg）静脉滴注，每天一次，其余各组给予等量生理盐水。48 h取股静脉血测定血清 ALT、cTnT、Cys -C 及 NSE，以监测器官功能的变化。采用ELISA测定血清TNF-α、MCP-1及IL-8水平。结果 PAR-1拮抗剂SCH79797可明显减轻心、脑、肝、肾功能障碍。 PCAS组血清TNF-α、MCP-1和IL-8水平均明显高于假手术组（ P＜0．01）。 PAR-1拮抗剂组TNF-α、MCP-1和IL-8水平均明显低于PCAS模型组（ P＜0．05）。结论 PAR-1拮抗剂SCH79797可降低PCAS兔血清TNF-α、MCP-1和IL-8水平，改善心肺复苏后多器官功能障碍。

脑血康对脑出血蛋白酶激活受体-1表达的影响

目的:探讨脑出血后蛋白酶激活受体1(PAR1)的动态表达及脑血康的干预作用。方法:72只大鼠随机分为正常组、脑出血模型6h、24h、3d、7d组和脑血康治疗6h、24h、3d、7d组。用S型胶原酶诱导大鼠脑出血模型。免疫组化方法测定各时间点大鼠脑出血后血肿周围水肿组织PAR1蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测PAR1mRNA表达。结果:正常组大鼠大脑PAR1蛋白和PAR1mRNA表达轻度阳性;模型组6h时PAR1蛋白和PAR1mRNA表达强度开始增强,24h表达进一步增加,于3d达到高峰,然后开始下降,7d时明显下降。在6h、24h、3d、7d各时间点,模型组和脑血康组PAR1阳性细胞数、PAR1mRNA吸光度(A)比值升高,与正常组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);脑血康组PAR1阳性细胞数、PAR1mRNAA比值降低,与模型组各时间点比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:脑出血后PAR1受到凝血酶的持续活化,脑出血后凝血酶的作用可能通过PAR1介导;脑血康可抑制PAR1活化,这可能是脑血康治疗脑出血的主要机制之一。

蛋白酶激活受体2激动剂诱导上皮细胞分泌MCP-1

目的 :探讨蛋白酶激活受体 (PAR) 2激动剂对人上皮细胞单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)分泌的影响 .方法 :人肺上皮细胞系A5 4 9细胞分别接种于 12孔培养板各孔内 ,并分别用不同浓度的PAR 2激动剂 ,反PAR 2激动剂进行刺激 .刺激时间为 2 ,8和 16h .用ELISA方法检测上清液中的MCP 1水平 .结果 :经过 16h的培养 ,PAR 2激动剂SLIGKV和tc LIGRLO均可引起浓度相关性MCP 1释放增加 ,tc LIGRLO引起的最大MCP 1释放量达基础分泌量的 13倍 .反PAR 2激动剂对MCP 1释放的影响较小 .时间相关曲线表明 ,PAR 2激动剂的作用从 2h开始 ,16h达高峰 .结论 :PAR 2激动剂是高效的人肺上皮细胞MCP 1的促分泌剂 .其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用 .

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的探讨蛋白酶激活受体1(PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果经过16h的培养,SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加,增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍,RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放,凝血酶在浓度1kU/L时就可引起IL-8释放量增加,10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰,为基础分泌量的7.5倍。水蛭素可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明,PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加,16h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。

蛋白酶激活受体-1拮抗剂对兔心脏骤停后综合征中肾损伤的保护作用及机制

目的:探讨蛋白酶激活受体-1(PAR-1)拮抗剂对心脏骤停后综合征(PCAS)中肾损伤的影响及机制。方法:将日本大耳白兔随机分为假手术组(n=5)、PCAS组(n=10)、PAR-1拮抗剂组(n=10)。采用窒息性心脏骤停法制备兔PCAS模型。PAR-1拮抗剂组于心肺复苏后10 min给予静脉滴注PAR-1拮抗剂SCH79797(25μg/kg),其余各组给予等量生理盐水静脉滴注。72 h后取股静脉血检测血清肌酐和胱抑素C水平;取肾组织制备石蜡切片后行HE染色;采用TUNEL法测定肾脏细胞凋亡情况;应用Western blot测定肾组织半胱天冬酶(casepase)-3、细胞外调节蛋白激酶(ERK)活化情况。结果:与假手术组相比,PCAS组血清肌酐和胱抑素C水平明显上升,肾组织有大量炎性细胞浸润,凋亡细胞数显著增多,有催化活性的caspase-3裂解片段(cleaved caspase-3)表达增高,磷酸化ERK(p-ERK)表达减少(P<0.05)。与PCAS组相比,PAR-1拮抗剂组肾组织损伤减轻,血清肌酐和胱抑素C水平明显下降,凋亡细胞数减少,cleaved caspase-3表达降低,而p-ERK表达显著增高(P<0.05)。结论:PAR-1拮抗剂SCH79797能抑制PCAS兔肾组织的炎症反应和细胞凋亡,可能与ERK信号通路激活有关。

大鼠脑出血后蛋白酶激活受体-1与细胞凋亡关系的实验研究

目的研究大鼠脑出血(ICH)后血肿周围蛋白酶激活受体-1(PAR-1)、神经细胞凋亡等的表达。方法将60只SD大鼠分为假手术组和ICH组,采用立体定位仪定位注射自体不凝血制造大鼠ICH模型,分别于术后6h、1d、2d、3d、5d、7d处死,免疫组织化学法检测血肿周围PAR-1、TUNEL阳性细胞(凋亡细胞)数及小胶质细胞的表达。结果假手术组PAR-1少量表达,偶见凋亡细胞;ICH组自6h起PAR-1、凋亡细胞及小胶质细胞数量大量增加,3d达高峰,PAR-1在7d基本降至假手术组水平,但凋亡细胞、小胶质细胞仍处于较高水平,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ICH后血肿周围存在大量PAR-1表达上调、神经细胞凋亡、小胶质细胞增加。

蛋白酶激活受体-1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察蛋白酶激活受体-1(proteinase activated receptor-1,PAR-1)在胃癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法:用免疫组化方法检测65例胃癌及其癌旁胃组织中PAR-1的表达情况。结果:PAR-1的表达在胃癌组织中高于癌旁胃组织,随癌组织浸润肌壁程度和淋巴结转移程度的提升而增高,均有明显的统计学意义(P<0.01);PAR-1的表达虽随着癌分化程度降低而增高,但无统计学差异(P>0.05)。结论:PAR-1的表达与胃癌发展及临床病理分期有关,可作为胃癌临床预后标记之一。

尖锐湿疣中蛋白酶激活受体-1表达与血管增生的关系及意义

目的:探讨尖锐湿疣(CA)组织中蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PAR)-1的表达与血管生成的关系及意义。方法:对28例CA患者病变组织行常规组织病理切片和苏木精-伊红染色,并对其进行血管计数,应用反转录(RT)-PCR和免疫组化法检测PAR-1的表达情况,同时以17份正常包皮组织作为对照。结果:CA皮损组织的血管数比正常包皮组织明显增多(t=5.192,P<0.001);CA皮损组织中PAR-1mRNA平均表达水平显著高于正常包皮组织(t=7.26,P<0.001);PAR-1蛋白在CA组织中的表达较正常包皮组织显著增强(χ2=16.218,P<0.001),PAR-1在CA皮损中从基底层至角质层下方均有表达,而正常包皮仅在基底层有弱阳性表达,且PAR-1蛋白表达与血管数存在显著正相关(r=0.823,P<0.001)。结论:PAR-1在CA皮损组织中的过度表达以及与血管数的正相关提示PAR-1与血管生成有关,PAR-1在CA发病中起一定的作用。

蛋白酶激活受体-1在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察并探讨蛋白酶激活受体-1(proteinase activated receptor-1,PAR-1)在结肠癌组织中表达的临床意义。方法:用免疫组织化学方法检测65例结肠癌及其癌旁肠组织中PAR-1的表达情况。结果:PAR-1的表达在结肠癌组织中高于癌旁肠组织,随肌壁癌组织浸润度和淋巴结转移程度的提升而增高,均有显著差异(P<0.01);PAR-1的表达虽随着癌分化程度降低而增高,但无显著差异(P>0.05)。结论:PAR-1的表达与结肠癌发展及临床病理分期有关,可作为结肠癌临床预后指标之一。

TNF-α对凝血酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体表达的影响

目的:探讨TNF-α对凝血酶引起的P815肥大细胞上蛋白酶激活受体表达的影响。方法:用或不用TNF-α预处理肥大细胞后,以不同浓度凝血酶激发P815肥大细胞,用流式细胞术检测肥大细胞上PAR-1,2,3,4表达的变化情况。结果:TNF-α不影响凝血酶作用肥大细胞P815后PAR-1表达;TNF-α预处理后凝血酶作用肥大细胞P815后,PAR-2,3,4表达较基础培养液对照组和非TNF-α处理组增强。结论:促炎因子TNF-α能够调节凝血酶引起的肥大细胞PAR表达进而参与肥大细胞相关的炎症反应。

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h。用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平。结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍。凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用。时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。

星形细胞肿瘤血管内皮生长因子和蛋白酶激活受体-1的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)和蛋白酶激活受体-1(PAR-1)的表达与星形细胞肿瘤病理分级的关系以及两者的相关性。方法:用半定量RT-PCR方法检测50例星形细胞肿瘤和10例正常脑组织中VEGF和PAR-1的表达水平。结果:在正常脑组织中VEGF和PAR-1的表达与星形细胞肿瘤比较差异有统计学意义;VEGF和PAR-1在星形细胞肿瘤Ⅱ级、Ⅲ级与Ⅳ级中的表达水平,差别具有统计学意义。经Spearm an等级相关分析VEGF和PAR-1两者的表达指数正相关(r=0.355,P<0.05)。结论:VEGF和PAR-1的表达与星形细胞肿瘤的侵袭性密切相关,可作为临床判断胶质瘤恶性程度、侵袭性的重要指标。

蛋白酶激活受体-1在肺纤维化大鼠肺组织中的表达

目的探讨在博莱霉素所致大鼠肺纤维化模型肺组织中蛋白酶激活受体-1的表达。方法将体重180-250g的SD清洁级雄性大鼠48只,按完全随机方法分为对照组及博莱霉素(BLM)组,BLM组大鼠气管内注入0.9-1.25ml博莱霉素A5(BLMA5,5mg/kg),对照组在同样条件下向气管内注入等量的生理盐水。两组动物于气管灌注后第7、14、28、40d分别随机处死6只。组化方法检测肺组织PAR-1的表达;Masson染色检测肺组织纤维化,按Ashcroft评分法,评估肺纤维化的严重程度,结果(1)对照组无明显胶原沉积,BLM组随着时间的延长,可见明显胶原沉积,BLM组/对照组两组在第7、14、28、40d肺间质纤维化Ashcroft评分分别为24±3.72/3±0.63、46.4±4.09/4±0.63、69.3±3.78/3±1.41、64.5±5.96/3±1.67,两组有显著性差异(P﹤0.05)。(2)BLM组/对照组两组在第7、14、28、40d平均每高倍镜视野肺组织PAR-1阳性细胞数分别为:9.93±1.47/2.5±1.52、16.67±2.16/1.83±1.17、17.67±2.16/2.17±0.75、16.0±2.28/2.17±1.17。BLM组各时间点肺组织PAR-1阳性细胞数较正常对照组增多,两组具有显著统计学差异(P﹤0.05)。(3)肺间质纤维化程度与PAR-1阳性细胞数呈正相关(r=0.76)。结论博莱霉素所致大鼠肺纤维化模型肺组织中蛋白酶激活受体-1的表达增强;蛋白酶激活受体-1的表达可能在博来霉素所致肺纤维化中其重要作用。

蛋白酶激活受体-2激活剂对人脐静脉内皮细胞释放IL-1α的影响

目的研究蛋白酶激活受体-2(protease-activated receptor-2,PAR2)激活剂对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)释放白细胞介素(IL)-1α的影响。方法分离、培养原代HU-VECs。胰蛋白酶和PAR2激活肽刺激HUVECs 16 h,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HUVECs培养上清中的IL-1α水平。结果胰蛋白酶和PAR2激活肽诱导HUVECs培养上清中IL-1α水平显著升高,升高水平分别为基础水平的4.8和4.6倍。相应浓度的对照肽则不能够诱导HUVECs释放IL-1α。大豆胰蛋白酶抑制剂和PAR2抑制肽能够显著抑制胰蛋白酶和PAR2激活肽诱导的IL-1α分泌。结论 PAR2激活剂能够通过诱导HUVECs释放IL-1α参与炎症反应。

急性肺损伤大鼠蛋白酶激活受体-1表达及其机制

目的探讨肺损伤后蛋白酶激活受体1(protease-activated receptor-1,PAR-1)的表达情况及其与炎症因子之间的关系。方法腹腔注射内毒素的方法复制大鼠肺损伤的模型,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测PAR-1 mRNA表达,HE染色观察肺组织病理变化,酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测炎性因子的改变。结果内毒素肺损伤时,PAR-1 mRNA随着脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预时间的延长表达逐渐增加。肺内肿瘤坏死因子-α(tumor necro-sis factor-α,TNF-α)、金属基质蛋白酶-12(matrix metalloproteinase-12,MMP-12)升高与PAR-1的水平密切相关。结论 PAR-1的表达与TNF-α,MMP-12相关,PAR-1的抑制剂减少了肺组织MMP-12和TNF-α的释放,可能具有抗炎作用。