凝血酶预处理减轻凝血酶所致的脑水肿

目的:探讨凝血酶预处理对脑水肿的影响,检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在脑组织内的表达并分析其与凝血酶所致脑水肿的关系。方法:建立大脑皮质内血肿模型。选择健康成年SD大鼠40只,随机分为作为对照的未预处理组(ST组)和小剂量凝血酶(1U)预处理组(TT组)。观察不同时相脑组织含水量及钠含量的变化及TNF-α在脑组织内的表达。结果:ST组脑组织含水量和钠含量明显高于TT组,且第1天高于第3天。TT组与ST组脑组织内TNF-α阳性表达与含水量的变化相一致。结论:凝血酶预处理可以减轻凝血酶所致的脑水肿;TNF-α的表达与凝血酶所致的脑水肿有关。

凝血酶预处理对大鼠神经细胞凋亡的影响

目的:观察凝血酶预处理对大鼠神经细胞凋亡的影响。方法:成年雄性SD大鼠50只,随机分为5组,每组10只。假手术组(C组):大鼠右侧尾状核注射生理盐水50μL;小剂量凝血酶组(SDT组):大鼠右侧尾状核注射凝血酶1U;大剂量凝血酶组(LDT组):大鼠右侧尾状核注射凝血酶10U;凝血酶预处理组(T-L组):大鼠右侧尾状核注射凝血酶1U,7d后相同部位注射凝血酶10U;凝血酶和水蛭素预处理组(TH-L组):大鼠右侧尾状核注射凝血酶1U和水蛭素1U混合液,7d后相同部位注射凝血酶10U。5组大鼠均于末次注射后36h处死取脑,分别行HE和TUNEL染色,RT-PCR检测caspase-3和bcl-2mRNA。结果:5组细胞凋亡指数(AI)、caspase-2mRNA及bcl-2mRNA表达量差异有统计学意义(F分别为9.60,9.47,7.49,P均<0.05)。与C组相比,LDT组神经细胞大量凋亡(P<0.01),SDT组没有大量细胞凋亡(P>0.05)。T-L组细胞AI较LDT组降低(P<0.01),TH-L组与LDT组AI差异无统计学意义(P>0.05)。与LDT组相比,T-L组caspase-3mRNA表达减少(P<0.01),bcl-2mR-NA表达增加(P<0.01)。结论:大剂量凝血酶(10U)可引起神经细胞凋亡。凝血酶预处理可能通过抑制大剂量凝血酶引起的Caspase-3表达增高和Bcl-2表达下降发挥抗凋亡作用。

凝血酶预处理对海马神经元的保护作用

目的:研究凝血酶预处理(TPC)对大剂量凝血酶(TM)诱导海马神经元凋亡的影响,阐明TPC的保护作用。方法:海马神经元分别经生理盐水(Sham组)、小剂量TM(TPC组)及凝血酶受体激活肽(TRAP组)预处理48h后再加大剂量TM作用24 h。TUNEL法及流式细胞术检测凋亡细胞数和凋亡百分率,应用免疫细胞化学方法检测神经元Bc l-2及Bax蛋白表达。结果:与Sham组比较,TPC组TUNEL阳性细胞数和凋亡百分率明显降低(P<0.01),Bc l-2表达上调,Bax表达明显下调(P<0.01)。与Sham组比较,TRAP预处理组TUNEL阳性细胞数和凋亡百分率明显降低(P<0.01),Bc l-2表达上调,Bax表达明显下调(P<0.01)。TRAP预处理组与TPC组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:TPC可抑制TM导致的神经细胞凋亡,激活PAR-1,促进Bc l-2的表达和降低Bax的表达,可能是TPC抑制细胞凋亡的机制之一。

凝血酶预处理对脑出血大鼠神经细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨凝血酶预处理(TPC)对脑出血(ICH)大鼠神经细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响。方法 60只成年雄性SD大鼠随机平均分为10组:假手术(SO)组、TPC 3 h组、TPC6 h组、TPC 12 h组、TPC 1 d组、TPC 3 d组、TPC 7 d组、TPC 14 d组、TPC 21 d组及ICH组。TPC各组大鼠与ICH组大鼠予以右侧尾状核注射凝血酶10 U诱发脑出血,SO组大鼠予以同部位注射生理盐水50μl,用dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色及免疫组化染色法观察神经细胞凋亡及caspase-3表达的情况。结果 ICH组与TPC各组凋亡细胞及caspase-3表达均明显多于SO组(均P<0.01),TPC 12 h、TPC 1 d、TPC 3 d、TPC 7 d、TPC 14 d和TPC 21 d组细胞凋亡及caspase-3阳性表达明显少于ICH组(均P<0.05),其中TPC 7 d组凋亡细胞数及caspase-3阳性表达最少(P<0.05～0.01)。结论 TPC可减少ICH所致的神经细胞凋亡及caspase-3表达,其中以TPC 7 d的作用最强。

凝血酶预处理对大鼠脑出血后内源性神经再生的影响

目的探讨凝血酶预处理(thrombin preconditioning,TPC)对大鼠脑出血后内源性的神经细胞再生的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)组和TPC组,每组分为3、7、14、21、28 d亚组。应用胶原酶脑内立体定向注射制作脑出血模型。TPC组首先将1U凝血酶立体定向注入右侧纹状体,1 d后再制作脑出血模型。所有大鼠应用Brd U腹腔注射在体标记再生的脑室下带(subventricular zone,SVZ)细胞,应用免疫组织化学技术检测Brd U阳性细胞。结果脑出血后3 d同侧SVZ和基底节Brd U阳性细胞开始增加,但与对照组比较差异没有显著性(P>0.05),7 d时Brd U阳性细胞数增加明显,与对照组比较有明显差异(P<0.05),14 d达到高峰,然后逐渐下降,28 d时Brd U阳性细胞虽然仍有增加,但与对照组比较差异没有显著性(P>0.05)。TPC组3 d时Brd U阳性细胞数目开始增加,与脑出血组和对照组比较,差异均具有显著性(P<0.01),14 d达高峰,一直持续至21 d,28 d时Brd U阳性细胞虽然略有下降,但与对照组和脑出血组比较,仍有统计学差异(P<0.05)。结论凝血酶预处理能够增强脑出血后内源性神经再生,可能为脑出血后内源性神经再生的研究提供新的思路。

凝血酶预处理对大鼠脑出血后SVZ细胞迁移和分化的影响

目的探讨凝血酶预处理(thrombin preconditioning,TPC)对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后侧脑室下带(subventricular zone,SVZ)细胞迁移和分化的影响。方法将90只SD雄性大鼠随机分为3组:TPC组、ICH组、对照组。每组分为3、7、14、21、28 d亚组;应用IV型胶原酶脑内立体定向注射制作脑出血模型,应用Brdu标记新生的SVZ细胞;进行脑片培养,应用时间间隔显微系统动态观察Dil标记的SVZ细胞在活体脑片上的迁移;为了评估迁移至损伤区的SVZ细胞是否具有与其他细胞形成突触的能力,进行Brdu和突触蛋白Ⅰ免疫组织化学双标染色。结果在时间间隔显微系统下观察Dil标记的SVZ细胞向纹状体迁移,动态观察12 h,TPC组3 d SVZ细胞迁移的速度是(4.23±0.25)μm/h,7 d的速度是(6.53±0.37)μm/h,14 d的速度是(8.23±0.47)μm/h,21 d的速度是(7.05±0.31)μm/h,28 d的速度是(5.29±0.20)μm/h,在各个时间点TPC组的迁移速度明显快于脑出血组(P<0.01)。TPC组同侧纹状体Brdu和突触蛋白Ⅰ双标阳性细胞3 d明显增加,14 d达高峰,持续至21 d,然后逐渐减少。脑出血组3 d未见Brdu和突触蛋白Ⅰ双标阳性细胞,7 d可见少数阳性细胞,14 d达高峰,然后逐渐下降,在各个时间点双标阳性细胞与脑出血组比较均明显增加(P<0.01)。TPC使突触蛋白I的表达出现时间更早,持续时间更长。结论 TPC能够促进脑出血后SVZ细胞的迁移和分化。