MCAO大鼠不同时相凝血酶mRNA、凝血酶蛋白的变化规律探讨

目的：通过观察大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠模型不同时相神经功能缺失评分以及脑组织凝血酶mRNA和蛋白的表达,探讨MCAO大鼠缺血后神经功能缺损症状及凝血酶的变化规律,为药物研究确定最佳观察时间点。方法：雄性SD大鼠35只,随机分为假手术组和缺血后不同时相（1、6、12、24、48、72h）组,每组5只。对缺血后不同时相组采用线栓法制造MCAO大鼠模型,各组在取材前均进行神经功能缺失评分,用荧光定量实时PCR法检测大鼠脑组织凝血酶mRNA的表达水平;Western blot法检测大鼠脑组织凝血酶蛋白表达水平。结果：假手术组大鼠无神经功能损伤的症状,缺血后1~72h组大鼠表现为对侧前爪内收、向对侧转圈行走、向对侧倾倒等,以缺血后24h最为显著;大鼠脑缺血后1h凝血酶基因表达即增强且于24h达峰值;凝血酶蛋白的表达在脑缺血后1h即增多,持续上升到24h,然后维持在较稳定的高水平。结论：MCAO大鼠在急性脑缺血后凝血酶mRNA、凝血酶蛋白表达均增强,其峰值均集中在缺血后24h,此时大鼠神经功能缺损症状也最为显著,提示凝血酶可能参与了急性脑缺血的病理损害,缺血后24h可作为药物研究的最佳观察时间点。

大黄虫丸对大鼠脑出血模型神经损伤积分值和脑组织凝血酶受体mRNA表达的影响

目的:观察大黄虫丸对大鼠脑出血模型神经损伤积分和脑组织凝血酶受体(TR)mRNA表达的影响。方法:以雄性Sprauge-Dawley大鼠为实验动物,共分4组,正常组、假手术组、模型组、中药组。模型组和中药组选择胶原酶加肝素联合注射法诱导脑出血大鼠模型,中药组予大鼠大黄虫丸的混悬液2.5mL灌胃,每天1次,正常组、假手术组、模型组予等量的生理盐水灌胃,每天1次,观察各组8、24、48、72h神经损伤积分情况,3天后将大鼠断头处死,快速取出血肿周围组织约100mg,以RT-PCR法测定脑组织中凝血酶受体(TR)mRNA表达。结果:大鼠神经功能缺损体征以造模8h最明显,神经行为三试验(姿势反射、前肢位置试验和杆上平衡试验)积分最高;随时间延长,体征减轻、积分减少。术后24、48、72h中药组神经行为积分均明显低于模型组(P<0.05),而假手术组无偏瘫等神经功能缺损表现,故未进行统计。正常组、假手术组脑组织TRmRNA仅有少量表达,模型组、中药组脑组织的TRmRNA表达明显上调,和正常组、假手术组有明显的的差异(P<0.05)。但中药大黄虫丸能明显的下调脑出血大鼠脑组织TRmRNA的表达和模型组相比P<0.05。结论:胶原酶加肝素联合注射法诱导脑出血大鼠模型血肿周围脑组织凝血酶受体(TR)mRNA表达增高,大黄虫丸对脑出血大鼠脑组织TRmRNA的表达增加有下调作用,并可明显的改善大鼠脑出血模型的神经行为功能的缺损。

滋阴活血解毒方对局灶性脑缺血大鼠凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体-1 mRNA含量的影响

目的观察滋阴活血解毒方对局灶性脑缺血模型大鼠脑组织凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体(PAR-1)mRNA表达的影响,探讨其脑保护机制。方法将24只大鼠随机分为假手术组、模型组、滋阴活血解毒方组、阿加曲班组,每组分1、3 d两个时间点。滋阴活血解毒方组灌服中药水煎剂,每日剂量32.4 g/kg;阿加曲班组为腹腔注射给药,第1、2日每日剂量为11.16 mg/kg,第3日剂量为3.72 mg/kg。假手术组和模型组均灌服等容量生理盐水,每日剂量为2 mL/100 g。均分2次给药。线栓法制备大脑中动脉闭塞模型。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑组织中凝血酶原mRNA及PAR-1mRNA表达水平。结果与假手术组比较,模型组脑组织中凝血酶原mRNA、PAR-1 mRNA表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01),滋阴活血解毒方组和阿加曲班组能明显下调凝血酶原mRNA、PAR-1 mRNA表达,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论滋阴活血解毒方能抑制脑组织中凝血酶原mRNA和PAR-1 mRNA的表达,减轻凝血酶的毒性反应,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。

脑缺血大鼠凝血酶原和PAR-1的变化及滋阴活血解毒方的干预作用

目的观察局灶性脑缺血模型大鼠脑组织凝血酶原(prothrombin,F2)mRNA和蛋白酶激活受体-1(pro-tease-activated receptor-1,PAR-1)mRNA表达变化及滋阴活血解毒方的干预作用。方法将24只大鼠随机分为假手术组、模型组、滋阴活血解毒方组、阿加曲班4组,每组分1、3 d两个时相点。制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,检测各组大鼠脑组织中凝血酶原mRNA及PAR-1mRNA的表达水平。结果与假手术组比较,模型组脑组织中凝血酶原mRNA、PAR-1mRNA表达明显增强(P<0.01),滋阴活血解毒方组和阿加曲班组能明显下调凝血酶原mRNA、PAR-1mRNA表达(P<0.01)。结论局灶性脑缺血大鼠凝血酶原mRNA和PAR-1mRNA的表达增强,滋阴活血解毒方能抑制其表达,减轻凝血酶的毒性反应。

Antithrombin Ⅲ injection via the portal vein suppresses liver damage

AIM:To investigate the effects of antithrombin Ⅲ(AT Ⅲ) injection via the portal vein in acute liver failure.METHODS:Thirty rats were intraperitoneally challenged with lipopolysaccharide(LPS) and D-galactosamine(GalN) and divided into three groups:a control group;a group injected with AT Ⅲ via the tail vein;and a group injected with AT Ⅲ via the portal vein.AT Ⅲ(50 U/kg body weight) was administrated 1 h after challenge with LPS and GalN.Serum levels of inflammatory cytokines and fibrin degradation products,hepatic fibrin deposition,and hepatic mRNA expression of hypoxiarelated genes were analyzed.RESULTS:Serum levels of alanine aminotransferase,tumor necrosis factor-α and interleukin-6 decreased significantly following portal vein AT Ⅲ injection compared with tail vein injection,and control rats.Portal vein AT Ⅲ injection reduced liver cell destruction and decreased hepatic fibrin deposition.This treatment also significantly reduced hepatic mRNA expression of lactate dehydrogenase and heme oxygenase-1.CONCLUSION:A clinically acceptable dose of AT Ⅲ injection into the portal vein suppressed liver damage,probably through its enhanced anticoagulant and antiinflammatory activities.