金黄色葡萄球菌凝集因子A研究进展

金黄色葡萄球菌凝集因子A(ClfA)能介导金黄色葡萄球菌粘附于基质蛋白,从而感染宿主。综述了近年来关于ClfA的结构、功能及应用等方面研究进展,为深入研究金黄色葡萄球菌的致病机制和发展新的抗感染策略提供参考。

金黄色葡萄球菌凝集因子A的免疫原性

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)凝集因子A(ClfA)免疫原性及免疫保护作用,应用PCR方法扩增出金黄色葡萄球菌Newman、Wood46和HLJ23-1株的clfa基因并进行序列分析,再将Newman株的clfa基因插入到pQE-30载体上,导入宿主菌Escherichia coli M15(pREP4)并诱导表达和纯化ClfA重组蛋白。用纯化的ClfA免疫小鼠,检测血清中抗体和细胞因子水平,首次免疫后35 d时用金黄色葡萄球菌Wood46、HLJ23-1、Newman株对小鼠攻毒。结果发现:clfa基因序列高度保守;ClfA重组蛋白在E.coli M15中获得表达;在首次免疫后35 d时血清抗体效价和细胞因子浓度与对照组相比,均显著升高(P<0.05);攻毒结果为蛋白免疫组小鼠获得一定的免疫保护。由此表明,ClfA重组蛋白有较好的免疫原性和免疫保护力。

禽流感血凝抑制试验中鸭血清非特异性凝集因子去除方法研究

为解决在鸭禽流感血凝抑制试验中鸭血清与鸡红细胞的非特异性凝集,影响抗体效价的准确性,采用10 mL/L鸭红细胞直接测定法和50 mL/L鸡红细胞吸附法进行非特异性去除试验,并对结果加以比较。结果表明,10 mL/L鸭红细胞直接测定法检测血清无须前处理,具有操作简便、耗时短的优点,可用于大量样本的检测。在进行小样本、高精度要求的检测时,适宜使用50 mL/L鸡红细胞吸附+鸭细胞测定法,以更有效去除非特异性反应。

癌患者血清中癌细胞凝集因子特性的研究

前曾报道癌患者血清中存在选择性凝集具高转移潜能的人鼻咽癌细胞的凝集因子．现除扩大了检测例数外，重点对癌患者血清中凝集因子的化学本质及生物学特性进行了系统研究，证明其可能是一种内源性凝集素（糖结合蛋白质），特异性识别甘露糖及β1，6分枝的N-乙酰氨基乳糖．其作用不依赖于Ca+，而还原剂可提高其活性并对高碘酸氧化敏感．对这种内源性凝集素在癌栓形成及癌细胞转移中的作用进行了讨论．

血清肿瘤细胞凝集因子生化特性的研究

目的:探讨血清对肿瘤细胞凝集的影响,阐明血清中肿瘤细胞凝集因子的生化特性及其在瘤栓形成过程中的作用机制.方法:采用体外细胞凝集实验,通过测定未凝集细胞计算凝集率.结果:正常人、良性瘤患者及恶性实体瘤患者的血清均不同程度诱导高转移潜能人鼻咽癌细胞(CNE-2L2)凝集,细胞凝集率分别为28.2%±8.3%、33.7%±9.1%和68.7%±10.8%.但是层粘连蛋白糖肽处理L2细胞则极大地降低血清凝集活性,而且蛋白酶及高碘酸等处理血清也导致血清凝集活性的极大降低或丧失.然而正常人及良性瘤患者血清对热稳定,恶性瘤患者血清则比较敏感.结论:血清中存在肿瘤细胞凝集因子,其中正常人及良性瘤患者血清中的可能是糖复合物,而恶性瘤患者血清中的则可能是糖复合物和凝集素.它们可能在瘤栓及转移形成过程中起着重要作用,其测定可能有助于恶性肿瘤的临床诊断及预后.

鼻咽癌病人血清凝集因子检测

作者采用自行设计的方法，首次在鼻咽癌病人血清中检测出凝集因子（ＡＦ）。鼻咽癌病人血清以Ｄ－Ｈａｎｋｓ缓冲液倍比稀释（１：２０～２５６０）。人鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ－２）经胰蛋白酶消化，戊二醛固定制成单个细胞悬液。两者混合于９６孔培养板，５０００细胞／孔，经３７℃、４℃、再３７℃处理后，在倒置显微镜下观察，以能形成一个≥２０细胞的凝集团块为ＡＦ阳性，结果发现２３１例鼻咽癌病人血清都是阳性，几何平均滴度（ＧＭＴ）１：２６５．１。１１１名正常人中７４人ＡＦ阴性，３７人低滴度阳性（１：２０～１６０），ＧＭＴＩ：３９．２。提示鼻咽癌病人血清ＡＦ水平明显高于正常人（Ｐ＜０．００１）。作者对结果及方法进行了讨论。

癌症病人血清癌细胞凝集因子的检测

①目的通过检测癌症病人血清对不同转移潜能的人鼻咽癌细胞的凝集作用，以确定癌症病人血清中是否存在引起癌细胞凝集的因子，并探讨其与癌转移的关系。②方法采用细胞凝集实验检测了癌症病人及正常人血清对不同转移潜能的人鼻咽癌细胞的凝集活性。③结果癌症病人血清对高转移潜能鼻咽癌细胞（Ｌ２细胞）的凝集阳性率为８０．４％（８２／１０２），而正常人则为１８．３％（１５／８２），癌症病人阳性率显著高于正常人，两组比较差异有极显著性（χ２＝７０．３３，Ｐ＜０．０１）。上述两组均对低转移潜能鼻咽癌细胞（Ｌ４细胞）无凝集作用。④结论癌症病人血清中可能存在使癌细胞聚集的凝集因子。

肿瘤病人血清中癌细胞凝集因子单克隆抗体的制备

①目的通过制备癌细胞凝集因子的单克隆抗体（ＭｃＡｂ），进一步研究该凝集因子的结构、功能、组织来源，并为临床建立检测试剂盒打下基础。②方法采用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，经ＥＬＩＳＡ法结合癌细胞凝集抑制实验筛选出阳性克隆。③结果融合阳性率７８．１％；筛选出的杂交瘤细胞染色体数目为９６～１０６条，ＳＰ２／０骨髓瘤细胞为６８条，小鼠脾细胞为４０条，得到的ＭｃＡｂ亚类分别是ＩｇＧ１（Ｅ９）和ＩｇＧ２α（Ｅ１１）．④结论获得了２株既能分泌抗体，又能阻断癌细胞凝集的杂交瘤细胞株（Ｅ９和Ｅ１１）。

禽流感血凝抑制试验中鸡红细胞吸附鸭血清非特异性凝集因子方法的建立

禽流感血凝抑制试验中,建立鸡红细胞吸附鸭血清非特异性凝集因子方法,分别对鸡红细胞悬液与鸭血清吸附处理的取液量配比、吸附时间以及鸡红细胞浓度进行探讨。在确定取液量配比、及吸附时间后,通过对同一批鸭血清样品分别经不同浓度的鸡红细胞悬液吸附处理后进行一系列对比试验,找出鸡红细胞悬液吸附处理鸭血清中非特异性凝集因子的最佳浓度。对比发现,采用在96孔90o微孔板中逐孔加入0.05 m L待检血清和0.05 m L20%鸡红细胞悬液吸附1 h以上能够获得理想效果。

血凝抑制试验中两种鸭血清非特异性凝集因子去除方法的效果比较

非特异性凝集现象,是干扰血凝抑制试验的重要因素。本次试验因非特异性凝集而无法判定结果的比例占20%,采用红细胞沉淀吸附预处理法去除鸭血清中的非特异性血凝素及鸭血球直接测定法进行血凝抑制试验,均有较好去除非特异性凝集因子的效果,去非率达66%,且所得效价与常规检测法相比,无明显差异。

禽流感抗体检测中鸭血清非特异性凝集因子去除方法的研究

为探讨不同方法对血凝抑制试验中鸭血清非特异性凝集因子的去除效果，通过对同一批鸭血清分别经不同方法处理后进行一系列对比试验。结果发现，使用鸡红细胞吸附处理法比水浴前处理法（56℃，1min），更能有效去除非特异反应。经20%、10%鸡红细胞悬液预处理同一批鸭血清，表明20%、10%鸡红细胞悬液吸附处理能明显降低血清中非特异凝集因子的影响，20%鸡红细胞吸附在去除非特异性凝集上整体效果最好。在消除非特异性凝集因子上，采用20%鸡红细胞能够获得理想效果。

牛源耐药性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及黏附因子基因FnBP和clfA的表达分析

为探究致奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的生物学特性,对新疆垦区部分奶牛场乳房炎奶样进行病原学分析,并对病原菌进行耐药性、毒力因子的表达分析。从乳房炎奶样中分离得到S.aureus,采用血浆凝固酶试验、KB法、琼脂筛选法、生化鉴定法(VITEK32)、聚合酶链式反应等法进行鉴定。针对毒力基因clfA(凝集因子A)和FnBP(纤维结合素结合蛋白)进行特异性PCR扩增,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体,并构建原核表达载体pET-28a(+)-FnBP和pET-28a(+)-clfA。转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。常规鉴定出葡萄球菌105株,其中金黄色葡萄球菌(S.aureus)62株,从62株S.aureus中检出耐药性金黄色葡萄球菌(MRSA)13株,检出率为20.10%,2株未确检。经测序证实与GenBank中FnBP基因(J04151)和clfA基因(AB245457)序列同源性分别为100%和95.69%。SDS-PAGE显示,clfA和FnBP蛋白相对分子质量分别为45ku和58ku。Western blot分析显示,clfA蛋白和FnBP蛋白均可与金黄色葡萄球菌多克隆抗血清发生特异性反应。病畜奶样中MRSA检出率较高,新疆垦区部分牛场呈蔓延趋势,成功表达了clfA、FnBP蛋白,具有一定的免疫保护效果。

流感病毒血凝抑制试验非特异性因子去除方法

血凝抑制试验(HI)是判断流感病毒感染情况及检测流感抗体水平最常用的血清学方法。多种动物血清中存在非特异性凝集因子和非特异性凝集抑制因子,这两类因子如果不去除,会造成HI结果偏差,出现假阴性(抗体效价偏低)或假阳性(抗体效价偏高)。在HI试验前,需要对某些动物血清进行处理。文章对两类非特异性因子的处理方法及其应用进行了总结。

血清凝集肿瘤细胞活性及其意义的研究

目的 :探讨血清对肿瘤细胞凝集的影响以及血清凝集肿瘤细胞活性测定的意义。方法 :采用体外细胞凝集实验和实验性转移模型等 ,以及以热变性、酶消化和盐析等方法处理血清。结果 :血清诱导促进高转移潜能肿瘤细胞凝集 ,以恶性肿瘤患者血清凝集肿瘤细胞活性最高 ,其对恶性肿瘤诊断的灵敏度为 90 6% ,特异性为92 1% ,准确性为 91 3%。糖肽能有效地抑制血清诱导的黑色素瘤B16 细胞凝集及其实验性肺转移。此外蛋白酶及高碘酸处理血清可使血清凝集肿瘤细胞活性极大的降低 ,正常人及良性瘤患者血清活性对热较稳定 ,而恶性肿瘤患者血清活性则比较敏感等。结论 :血清中存在肿瘤细胞凝集因子 ,正常人及良性瘤患者血清中因子可能主要是糖蛋白 ,恶性肿瘤患者血清中的则可能还有少量氨基多糖和凝集素类。血清可能通过诱导肿瘤细胞凝集促进肿瘤转移。此外 ,血清凝集肿瘤细胞活性与肿瘤转移相关 ,其在恶性肿瘤的临床诊断及预后方面可能具有重要的应用价值。

血清糖蛋白参与肿瘤细胞凝集

目的 探讨糖蛋白在血清诱导肿瘤细胞凝集中的作用。方法 体外测定生化处理的小鼠血清诱导的黑色素瘤细胞凝集率。结果 盐析、蛋白酶及高碘酸等处理血清导致其诱导细胞凝集的活性极大降低或丧失，热处理对血清活性影响较小。结论 糖蛋白可能是血清中主要的肿瘤细胞凝集因子。

半乳糖凝集素-3在大鼠肝纤维化组织中的表达及意义

目的研究半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)、a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)在肝纤维化大鼠模型中的动态表达及意义。方法雄性SD大鼠随机分为健康对照组6只,肝纤维化模型组24只,采用二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制备肝纤维化模型。分别在造模后2、4、6、8周门静脉采血检测血清ALT、AST、Alb,采用HE及Masson染色观察肝组织学变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时间点肝脏galectin-3 mRNA的表达。结果正常肝组织中有galectin-3低表达,2周即升高,4周达高峰,6周下降,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,galectin-3水平与TGF-β1、a-SMA呈正相关(r=0.882～0.963,P<0.01)。结论 Galectin-3可能与肝纤维化的发生发展过程密切相关。

人早幼粒白血病细胞衍生的淋巴细胞凝集物质的部分纯化及特性

人早幼粒白血病细胞(HL60)衍生的淋巴细胞凝集物质已经用DEAE Sephadex A25离子交换层析和Sephadex G 200凝胶过滤层析进行了纯化。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳表明该物质是一种分子量为70KDa的蛋白质。~3H—TdR掺入实验表明,该物质能够抑制PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增殖反应。结果提示,这种与集落刺激样因子有别的凝集物质可能是一种抑制免疫反应的物质。

免疫层析法快速检测金黄色葡萄球菌的研究

为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的新方法,本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记鼠抗金黄色葡萄球菌凝集因子A(ClfA)重组蛋白特异性抗体,从抗金黄色葡萄球菌IgG包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。该方法可以在10min内完成对含金黄色葡萄球菌奶样的检测;敏感度为1×104cfu/mL以上,与PCR方法进行对比检测,相差一个数量级;与大肠杆菌、链球菌、李氏杆菌、巴氏杆菌及蜡样芽孢杆菌均无交叉;稳定性和重复性较好。该试纸条检测金黄色葡萄球菌临床样品表明其具有特异性好,灵敏度较高的特点。

癌患者血清中癌细胞凝集因子的初步研究

癌患者血清中癌细胞凝集因子的初步研究周柔丽，刘广超，候林，洪英瑜，王少斌，芮静安，张绍丛，刑蓓佩在癌细胞转移的复杂过程中，游离并进入血循环中的癌细胞相互聚集形成瘤栓，对于血流中癌细胞的存活及出血管都具有重要作用。癌细胞在宿主出血管中形成瘤栓主要由癌细...