P-选择素凝集样区和绿色荧光蛋白融合基因的构建

目的 构建P 选择素凝集样区与绿色荧光蛋白融合基因 (pEGFP N1/L) ,为进一步明确P 选择素不同表位与功能间的关系 ,为阐明P 选择素生理病理意义奠定基础。方法 应用PCR技术扩增质粒pCDM 1/cDNA凝集素样区 ,用T4连接酶将其插入载体 pEGFP N1;经酶切和测序对插入片段进行分析、鉴定。 结果 通过酶切和序列分析证实插入片段序列正确。结论 应用基因工程技术构建 pEGFP N1/L融合基因成功 ,为绿色荧光蛋白作为生物标记分子来研究P

人P选择素lectin基因片段的克隆及表达

应用PCR技术扩增P选择素lectin基因 ,克隆入pET42b (+)载体 ,测序验证后在大肠杆菌BL2 1中表达了lectinC端融合 6×His蛋白 ,表达产物经Ni2 + NTAsuperflow亲和柱纯化 ,纯度可达 90 %以上 ,得率为 0 9mg/ 10 0ml,其表达量达到总菌体蛋白的 15 %。SDS PAGE和Western印迹试验显示 ,表达产物相对分子质量为 130 0 0。