应用改良的凝集素亲和免疫电泳自显影法检测甲胎蛋白异质体

目的 解决在应用凝集素亲和免疫电泳自显影法检测甲胎蛋白异质体过程中对单一峰型的结果难以判断的问题。方法 对以往建立的凝集素亲和免疫电泳自显影法略作改进 ,在原来两块分别含凝集素和AFP抗血清的凝胶之间加一既不含凝集素也不含抗血清的凝胶条。选择 16例AFP异质体为均一型的血样本进行对照测定 ,并以凝集素亲和免疫电泳印迹法验证改良法的结果。结果 在只含凝集素的条件下表现为 1个峰的样本用改良法检测 ,良性肝病的样品峰型仍为 1个对称峰 ,恶性肝病的样品峰型由原来的 1个峰变为 2个峰。实验表明 ,应用改良法结果的重复性满意 ,并得到凝集素亲和免疫电泳印迹法的验证。结论 改良法使原本难以判断的结果清晰易辨 。

甲胎蛋白分子变异体交叉亲和酶联免疫电泳分析法

本研究创立一种快速、直接的甲胎蛋白小扁豆凝集素(LCA)亲和分子变异体分析法,这种新方法交叉亲和酶联免疫电泳法是由小扁豆凝集素亲和电泳和酶联火箭电泳结合构成的,能直接将甲胎蛋白分为 LCA 反应性和非反应性两个部分。分析了15例原发性肝癌,其血清甲胎蛋白 LCA 结合型占总量的21～90%,15例中有14例 LCA 亲和谱呈双峰型,而6例良性肝病患者均呈单峰型,属LCA 非结合型。显然,本法可以有效的鉴别这两种疾患。

两种亲和层析法纯化白桂木凝集素的比较

分别采用人血清γ球蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析及半乳糖（Ｇａｌ）－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和层析来分离纯化白桂木凝集素（ＡＨＬ）。结果：两种方法提取的ＡＨＬ在纯度、凝集活力及回收率上均无明显差别。但用Ｇａｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ来分离纯化ＡＨＬ更安全、简便、快捷和经济等优点，不失为分离桂木凝集素的一种好方法。

罗丹明6G发光分子纳米微球标记凝集素-亲和吸附固体基质室温燐光法测定碱性磷酸酶

在外重原子微扰剂Pb(Ac)2存在下,基于罗丹明6 G(Rhodamine 6G,简写为R)的SiO2纳米微球(简写为R-SiO2)在醋酸纤维素膜(ACM)上于λex/λem=482.38/648.59 nm处能发射强而稳定的室温燐光信号.由该发光微球标记的麦胚凝集素(Triticum vulgare lectin简称WGA),不仅仍能在ACM上与碱性磷酸酶(AP)发生定量的特异性亲和吸附反应,且亲和吸附反应产物能发射更强的室温燐光(RTP)信号,据此建立了R-SiO2纳米微球标记凝集素(WGA)亲和吸附(AA)固体基质室温燐光法(AA-SS-RTP)测定AP的一种新方法.本法的线性范围为1.00～360.00 ag AP spot-1(样品体积0.4μL/斑,对应浓度2.50～900.00fg/ml)),工作曲线的回归方程为△Ip=16.24+0.8856 m AP/ag spot-1,r=0.9993.检出限为0.14ag spot-1.分别对1.00和360.00 ag spot-1 AP重复测定11次,RSD为3.9%和3.1.%.本方法灵敏、准确、精密度好,已成功用于人血清中AP的测定.

4.0代树枝状分子-卟啉标记伴刀豆凝集素亲和吸附固体基质室温磷光法测定人血清中甲胎蛋白异质体

提出一种4.0代树枝状分子(4.0G-D)-卟啉(P)双发光分子新的磷光标记试剂(4.0G-D-P).基于4.0G-D-P标记伴刀豆凝集素(Con A)的产物(4.0G-D-P-Con A)能在聚酰胺素膜(PAM)上发射强而稳定的室温磷光(RTP),而且该标记产物能与甲胎蛋白异质体(AFP-V)发生特异性的亲和吸附(AA)反应,其反应产物保持了4.0G-D-P双发光分子RTP的优良特性,且ΔIp值与AFP-V的含量呈线性关系,加入Tween-80可以提高ΔIp值,据此建立了Tween-80-4.0G-D-P双发光分子标记Con A亲和吸附固体基质室温磷光法(AA-SS-RTP)测定人血清中AFP-V的新方法.直接法的检出限为0.31 pg/mL(4.0G-D)和0.43 pg/mL(P),灵敏度较高.无论用4.0G-D或P的激发/发射波长测定人血清中AFP-V的含量,结果与酶联免疫法(ELISA)相吻合.

序列凝集素亲和层析分析人血清骨型ALP糖链结构

用麦胚凝集素（WGA）、蔓陀萝凝集素（DSA）、伴刀豆蛋白（ConA）亲和层析技术分析正常小儿和良性骨病患者的血清骨型磁性磷酸酶（ALP）的糖链结构，推测出人血清骨型ALP的糖链结构主要为：含有平分型N-乙酸氨基葡萄糖（bisecting-GlcNAc）的“二天线”复杂型N-糖链，且糖铁外侧连有唾液酸（SA），不含2，2，6-和2，4，2，6-分枝的“多天线”糖链。为研究良、恶性骨病血清骨型ALP糖键结构变化打下了基础，也为血清肝型ALP糖链结构测定方法的改进提供了方便。

海南菠萝蜜凝集素的分离纯化及其生物学特性初探

采用常规蛋白提取法、亲和层析法、体外凝集反应以及3 H -TdR掺入法 ;从菠萝蜜种子中提取凝集素 ,并探讨其生物学特性。试验发现 ,纯化的凝集素 (JL)由两个亚基以非共价键结合 ,分子量分别为12 0kDa和 14 5kDa ;JL可凝集人、猫、兔和鼠的新鲜红血球 ;促进体外培养的小鼠胸腺细胞、L92 9细胞增殖 ,但它却抑制了小鼠3 T3 细胞的增殖。

半夏凝集素的分离纯化及其对HeLa细胞生长的影响

利用甘露糖-Sepharose 4B亲和柱从半夏总蛋白中分离纯化得到一种12kD的半夏凝集素,经质谱分析明确其为半夏凝集素单体。将该12kD凝集素单体作用于体外培养的HeLa细胞,MTT法检测细胞活性并用倒置相差显微镜观察凝集素对HeLa细胞生长状态的影响。结果显示:低浓度(0.004、0.02、0.1mg/mL)半夏凝集素具有一定促进HeLa细胞增殖的作用;高浓度(0.5、1mg/mL)半夏凝集素有一定抑制Hela细胞增殖的作用。

胃粘膜肠化中凝集素受体的分布及其与胃癌的关系

本文应用生物素标记的花生凝集素〈Biotin－PNA〉，菜豆凝集素〈Biotin－PHA〉及双花扁豆凝集素〈Biotin－DBA〉等3种凝集素对慢性胃炎伴肠化43例、胃癌癌旁肠化28例、正常胃粘膜10例，进行亲和组织化学法和粘液组织化学法研究。发现PHA、DBA受体在胃癌瘤旁肠化中阳性率明显高于胃炎伴肠化，差异具有显著性意义。结肠型肠化生中PHA及DBA受体阳性率均较小肠型肠化生高（P＜0．05）。提示带有PHA、DBA受体的肠化与胃癌关系密切，应视为癌前病变。

亲和吸附固体基质室温燐光法测定痕量糖

在外重原子微扰剂Pb(Ac)2存在下,异硫氰酸荧光素(FITC)的SiO2纳米微球(简写作FITC-SiO2)在醋酸纤维素膜(ACM)上能发射强而稳定的室温燐光(room temperature phosphorescence,简称RTP)信号.由FITC-SiO2标记的麦胚凝集素(Triticum vulgare lectin,简称WGA)产物(FITC-SiO2-WGA),不仅仍能在ACM上与葡萄糖(glucose,简称G)上生上量的特异性亲和吸附(affinity adsorption,简称AA)反应,且AA反应产物(WGA-G-WGA-FITC-SiO2)能发射更强的RTP信号,其△Ip值与G的含量成线性关系,据此建立了FITC-SiO2标记WGA-AA固体基质室温燐光法(affinity adsorption solid substrate-room temperature phosphorimetry,简称AASSRTP)测定G的一种新方固.按3Sb/k计算,本方固的检出限(LD)为0.47pg spot-1(对应浓度为1.2×10-9gm L-1,即5.3×10-9mol L-1),灵敏度高,用本法和G氧化酶法对比测定了血清试样中G的含量,结果相吻合.同时讨论了AASSRTP测定G的反应机理.

亲和吸附法测定甲胎蛋白异质体的方法学探讨

目的探讨将亲和吸附技术和不同的化学发光免疫分析技术相结合,进行甲胎蛋白(AFP)异质体测定的可行性。方法本实验室方法与Bayer Corporation,ARCHITECT i2000(Abbott Laboratories),Immulite(D.P.C.),ACCESS(Beckman Coulter Inc)和酶联免疫分析(CanAg Diag.AB)5种测定系统或试剂测定的比较,获得与本实验室检测AFP异质体上的差异。结果本实验室所采用的检测方法结果与上述5个测定系统或试剂测得的AFP异质体没有显著差异。结论亲和吸附法能将目前在临床实验室现用的AFP测定"升级"为AFP异质体的测定,这是一种适合临床诊断的方法,能在较短的时间内获得与现有方法相同或更好的结果,且有操作简便、结果可靠和测定成本低等优点。

亲和吸附固体基质室温磷光法测定痕量糖与疾病测报

在外重原子微扰剂LiAc存在下,3.5代树枝状分子-卟啉(3.5G-D-P)分子中3.5代树枝状分子(3.5G-D)与卟啉(P)在聚酰胺膜(PAM)上能发射强而稳定的室温磷光,Tween-80对3.5G-D与P的磷光信号有显著的增敏作用,而且Tween-80-3.5G-D-P标记麦胚凝集素(WGA)的产物(Tween-80-3.5G-D-P-WGA)能与糖(G)发生特异性的亲和吸附(AA)反应,其亲和吸附反应产物保持了3.5G-D与P双发光分子RTP的优良特性,且?Ip值与G的含量呈现线性关系,据此建立了Tween-80-3.5G-D-P双发光分子标记WGA亲和吸附固体基质室温磷光法(AA-SS-RTP)测定痕量G的新方法.本法的检出限为0.13 fg spot-1(1.7×10-12 mol l-1,3.5G-D)和0.14 fg spot-1(2.2×10-12 mol l-1,P).无论用3.5G-D或P的激发/发射波长测定血清中G的含量,结果都与酶联免疫法(ELISA)相吻合.

罗丹明6G-二溴荧光素发光分子纳米微球标记凝集素及其分析应用

基于外重原子微扰剂LiAc存在下,罗丹明6G(R)-二溴荧光素(D)SiO2发光纳米微球(R-D-SiO2)在醋酸纤维素膜(ACM)上可分别发射R(λex/λem=481/648nm)和D(λex/λem=457/622nm)强而稳定的室温光信号.用R-D-SiO2标记麦胚凝集素(WGA),在ACM上采用R-D-SiO2-WGA-ALP(直接法)亲和吸附反应方式,研究了利用亲和吸附固体基质室温磷光法(AA-SS-RTP)测定碱性磷酸酶(ALP)的条件和分析性能.研究结果表明,对0.4ml点样量,R-D-SiO2-WGA-ALP法的检出限为0.41agspot-1(457/622nm)与0.44agspot-1(481/648nm).用本法和ELISA方法对比测定了血清试样中ALP的含量,结果相吻合.本研究表明,可分别采用D或R的磷光激发/发射波长进行测定,不仅提高了AA-SS-RTP的灵活性,而且适应性更广.

小扁豆凝集素的制备与质量鉴定

作者采用甘肃产小扁豆,提取纯化出LCA,经鉴定达到了电泳纯度,其分子量为45000,血凝滴度,紫外、红外光谱特性和氨基酸组成等均与标准品基本一致,在LCA亲和交叉免疫电泳分离甲胎蛋白异质体中效果良好。有推广应用价值。

鼠伤寒沙门氏菌粘附素样糖蛋白的分离与鉴定

鼠伤寒沙门氏菌用去污剂NP 4 0处理 ,获得细菌外膜增溶液 ,经ConA Sepharose 4B亲和层析 ,甘露糖洗脱 ,得到了ConA结合糖蛋白 ,SDS PAGE电泳显示出了 5条蛋白带 ,分子量在 15～4 3kD之间。用不同处理并借助扫描电镜观察细菌在雏鸡肠上皮的粘附情况 ,表明分离的ConA结合糖蛋白具有粘附素样作用 ,肠粘膜表面含乙酰氨基葡萄糖的糖复合物则可能是粘附素的受体。

一种新的室温燐光法及其分析应用

提出一种新的4代树枝状分子(4G-D)-曲拉通-100X(Triton-100X)磷光标记试剂.基于Triton-100X-4G-D标记的麦胚凝集素(WGA)的产物(Triton-100X-4G-D-WGA),能与碱性磷酸酶(ALP)发生两种(直接法和夹心法)特异性亲和吸附反应(AA),其AA的产物仍然保持4G-D室温磷光的优良性质,且AA产物的-Ip值与ALP的含量成线性关系,据此建立了Triton-100X-4G-D标记麦胚凝集素-亲和吸附固体基质室温燐光法(AA-SS-RTP)测定痕量ALP的新方法.该方法的检出限为0.20agspot-1(直接法,对应浓度:5.0×10-18mol L-1)、0.14agspot-1(夹心法,对应浓度:3.5×10-18mol L-1),灵敏度高,重现性和精密度好.直接法和夹心法用于血清中ALP含量的测定,与漳州市中医院ELISA法临床检测的结果相吻合.

富勒醇-FITC磷光标记固体基质室温磷光法测定痕量碱性磷酸酶

开发了新的富勒醇、异硫氰酸荧光素和N,N-二甲基苯胺(F-ol-(FITC)n-DMA)标记试剂.基于F-ol的活性-OH与FITC游离的-COOH反应生成含有多个FITC分子的复合物(F-ol-(FITC)n-DMA),增加WGA-AP-WGA-F-ol FITC-DMA(WGA和AP分别为麦胚凝集素与碱性磷酸酶)生物靶的发光分子数而进一步提高SSRTP(固体基质室温磷光法)的灵敏度.用F-ol-(FITC)n-DMA标记WGA方法的检出限为0.15 ag spot-1(F-ol)与0.097 ag spot-1((FITC),比F-ol-DMA、FITC-DEA单发光分子标记WGA方法的检出限(0.20 ag spot-1(F-ol),0.22 ag spot-1(FITC)低.用于血清试样中AP含量的测定结果与酶联免疫法相吻合.

甲胎蛋白异质体作为肝癌标志物的临床应用

20世纪 70年代 ,Purves发现了甲胎蛋白异质体 (AFP variant)。之后 ,由于某些因素的制约 ,迄今尚未广泛应用于临床。近年来 ,许多中外学者对AFP异质体进行了更为广泛而深入的研究。本文作者殷正丰教授在收集、综合文献的基础上 ,对这一课题的基础理论和临床应用进行了更为深入的研究 ,从而论证了 AFP异质体可预警肝癌的发生 ,其作为诊断肝癌标志物的主要特点为 :此法不受 AFP>40 0 μg/L作为肝癌诊断标准的限制 ;不受影像学检查结果为阴性的束缚 ;有助于鉴别影像学检查难以确诊的肝占位性病变 ;无需动态观察 AFP的含量变化 ,从而可缩短肝癌的诊断时间。更具实用价值的是 ,可以借助 AFP异质体与 AFP检测值的对比 ,判断患者手术治疗是否彻底 ,从而为后续治疗提供重要参考依据。本文资料新颖 ,行文简洁 ,方法实用 ,现刊登于此 。

骨源性碱性磷酸酶同功酶的分离及其临床应用

目的分离骨源性碱性磷酸酶(ALP)同功酶酶谱并进行半定量扫描分析,用以探索骨型碱性磷酸酶(B_ALP)与骨矿化度指标的相关性以及儿童血清B_ALP水平随年龄增长的变化趋势。方法①酶速率法(AMP缓冲液)测定ALP总活力;②麦胚植物凝集素(WGA)亲和电泳法分离血清中B_ALP;③定量超声法(QUS)测定新生儿胫骨中端的超声传播速度(SOS)。结果①肝型、骨型ALP同功酶得到良好的分离效果;②新生儿的B_ALP水平与SOS存在负相关性(r=-0.575,P<0.01);③正常儿童的婴幼儿期血清中的B_ALP水平较高,随生长发育逐渐下降,到达青春期时再次升高。结论经麦胚植物血凝素处理的琼脂糖凝胶电泳可有效分离肝型、骨型ALP同功酶;B_ALP同功酶是判断儿童骨质发育的一个良好的生化指标。