细胞凝集素探针对典型赤潮生物的定量检测

采用14种异硫氰酸荧光素(FITC)标记的细胞凝集素探针对23株典型的有害赤潮生物进行了检测,结合流式细胞仪、荧光显微镜、荧光分光光度计对探针标记区分和识别目标藻的特异性和有效性进行定性和定量测定。结果表明,DBA可以把裸甲藻(Gymnodinium)GIXM01株与其他裸甲藻区分开;SBA、WGA和PNA探针能定性或定量地区分形态相似的裸甲藻GMDH01和TPXM01。PHA-E和SJA能分别将塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)ATDH04、ATMJ02株系与同种其他的藻株区分开;PNA也能从同种其他株系中识别塔玛亚历山大藻ATDH01,ATDH02,ATDH03株系;UEA I能从同种藻株中识别塔玛亚历山大藻ATCI01-JN、ATCI01藻株;RCA120可以区分产毒水平不同的亚历山大藻属(Alexandrium)的ASPGX01和ASPGX02。DBA、SBA、PNA和LCA探针能定性和定量区分微小原甲藻(Prorocentrum minimum)PMDH01和PMXM01;而PNA探针仅能定量区分原甲藻属(Prorocentrum)PDDH01与PMXM01。用WGA探针结合流式细胞仪、荧光显微镜、荧光分光光度等检测手段可以把探针标记的目标裸甲藻GSPXM01和TPXM01从米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)、东海原甲藻(P.donghaiense)和微小原甲藻(P.minimum)等组成的混合样品中区分开。

不同分子探针对赤潮样品检测效果的比较研究

采用荧光标记的DNA和lectin探针对来自赤潮现场样品中的目标赤潮原因种进行了检测.结果表明这些探针能从比较复杂的现场样品背景中把目标赤潮生物识别出来.从检测效果上看,各种DNA探针对塔玛亚历山大藻、微小原甲藻和T.pulchellum标记识别的荧光信号强度相对于lectin探针要弱.Lectin探针与明视野下的显微镜计数结果呈现出很好的相关性,但lectin探针对目标藻的绝对检出数量比明视野下的计数结果要低.lectin探针(ConA)和DNA探针(PM18S02、PM28S02)对现场样品中微小原甲藻的检测计数结果也有较好的相关性,表明在这些检测条件下,不同的探针对特定目标藻的检测结果具有可比性、相关性和可操作性.

尿液纤维连接蛋白糖链结构在膀胱癌患者中的变化及意义

目的寻求诊断膀胱癌的检测新方法。方法收集8例膀胱癌患者术前和术后3个月(正常)尿液标本16份,提纯纤维连接蛋白(Fn),辣根过氧化物酶(HRP)标记的凝集素作探针,连接到已固定在膜上的Fn糖链,检测已结合的HRP代表Fn糖链与凝集素的结合力,增强化学发光法(ECL)检测已结合HRP的结合力。高效液相(HPLC)和荧光标记底物测定膀胱癌和癌旁正常组织N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(GnT)活力。结果用伴刀豆球蛋白凝集素(ConA)-HRP作探针时,膀胱癌尿液Fn结合力仅为正常膀胱尿液Fn的0.18,而用蔓陀罗凝集素(DSA)-HRP和麦胚凝集素(WGA)-HRP作探针时,膀胱癌组的结合力为正常组的3.34倍和3.26倍。膀胱癌患者尿液中FnN-糖链的天线数和平分型GlcNAc结构都升高。尿Fn与WGA的结合力与病理分期、分级相关。膀胱癌组织GnT-Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ的酶活力比癌旁正常组织分别增加34.0、18.1和1.6倍。结论凝集素-HRP检测分析尿液Fn的N-糖链结构改变有可能是一种简单和精确诊断膀胱癌的方法。

前列腺增生和前列腺癌患者血、尿中PSA糖链结构的改变及意义

目的探索前列腺癌的早期诊断和鉴别诊断的新依据。方法收集前列腺增生和前列腺癌患者空腹第一次晨尿和血标本各90份和30份,随机分为3组,用PSA抗体亲和层析柱提纯尿液和血液中的PSA,用辣根过氧化物酶(HRP)标记的凝集素SNA(sambucus nigra agglutinin)做探针,连接到已固定在膜上纯化的PSA的糖链,检测已结合的HRP来代表PSA糖链与凝集素的结合力,用增强化学发光法(ECL)检测已结合的HRP的结合力,其数值用发光单位(LLU)来表示。结果用HRP标记的凝集素SNA-HRP作探针检测前列腺癌和前列腺增生血中PSA时,前列腺癌血中平均LLU仅为前列腺增生血中PSA的18.3%,与SNA-HRP的结合力两者之间有明显差异(P<0.001);而在尿液中两者无明显差异(P>0.05)。说明前列腺癌血中PSA糖链结构中唾液酸残基表达较前列腺增生明显减少。结论前列腺癌患者血中PSA糖链结构与前列腺增生相比发生改变,其中糖链结构中唾液酸残基表达的改变可能为今后前列腺癌的早期诊断和鉴别诊断提供新的依据。