红桂木凝集素结合蛋白在肾病尿液检测中的意义

目的 :建立检测尿液中 AL L 结合蛋白的夹心酶联免疫法。方法 :采用红桂木凝集素 (AL L)为包被物 ,确定最适包被浓度及酶标记红桂木凝集素 (AL L- HRP)工作稀释度 ,检测尿液中 AL L 结合蛋白 (U- L BP)。结果 :本法测定几种疾病的尿 U-L BP/ Cr(g/ mol) ,以 SL E肾病为最高 (44 .0 6± 32 .4 7) ,其次是急性肾炎 (38.0 7± 2 6 .13) ,肾病综合征 (32 .5 7± 2 0 .33) ,血尿(2 5 .30± 14 .6 2 ) ,慢性肾炎 (18.0 3± 13.70 ) ,其它内科疾病 (8.19± 5 .6 2 ) ,与正常对照组相比 ,均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :AL L- HRP酶联法检测 U- L BP方法简便 ,结果稳定 。

尿液中红桂木凝集素结合蛋白的检测及临床意义

目的 建立酶标记红桂木凝集素 (ALL HRP)夹心法检测尿液中ALL结合蛋白。方法 制备ALL HRP并经SephadexG 2 0 0纯化作为酶标凝集素 ,ALL为包被物 ,确定最适包被浓度及ALL HRP工作稀释度 ,夹心酶联检测尿液中ALL结合蛋白 (U LBP)。经精密度、重现性等实验并制备标准曲线。结果 以U LBP作标准制备的标准曲线线性检测范围为 9 4～ 15 0 μg/ml。本法测定几种疾病的尿U LBP/Cr( μg/ μmol) ,以SLE肾病为最高 4 4 0 6± 3 2 4 7,其次是急性肾炎 3 8 0 7± 2 6 13 ,肾病综合征 3 2 5 7± 2 0 3 3 ,血尿 2 5 3 0± 14 62 ,慢性肾炎 18 0 3± 13 70 ,糖尿病 15 69±12 0 8,与正常对照组相比 ,均有显著性差异。本法批内CV为 8 86% ,批间CV为 9 89%。结论 ALL HRP夹心酶联法检测U LBP方法简便 ,结果稳定 ,可望在临床上推广使用。

半乳糖凝集素3和半乳糖凝集素3结合蛋白在子痫前期中的表达和意义

目的:探讨子痫前期患者外周血及胎盘组织中半乳糖凝集素3 (galectin-3, Gal-3)、半乳糖凝集素3结合蛋白(galectin-3 binding proteins, Gal-3BP)的表达及意义。方法:选取青岛大学附属医院收治的子痫前期患者30例为实验组,同期入院体检正常的孕妇30例为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清Gal-3、Gal-3BP的浓度,经免疫组织化学法检测胎盘组织Gal-3、Gal-3BP的表达。采用Pearson双变量关联性分析法分析Gal-3、Gal-3BP与患者临床特征的相关性。结果:实验组外周血Gal-3、Gal-3BP水平均高于对照组(P < 0.05);实验组胎盘组织Gal-3、Gal-3BP的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)。实验组外周血Gal-3、Gal-3BP浓度分别与平均动脉压、24小时尿蛋白呈正相关(P < 0.05)。结论:Gal-3和Gal-3BP可能与子痫前期的发病有关,或可成为预测子痫前期的生物标记物。

唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨免疫检查点唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15(Siglec-15)在食管鳞癌中的表达及意义。方法免疫组化检测食管鳞癌组织、癌旁正常食管组织中Siglec-15表达情况,并比较分析其与食管鳞癌患者临床病理特征的关系。结果Siglec-15在食管鳞癌组织中表达阳性率为60.0%(48/80),高于癌旁正常食管组织中的23.75%(19/80)(χ^(2)=21.595,P<0.001)。食管鳞癌组织中Siglec-15蛋白表达与患者肿瘤直径、T分期、TNM分期、N分期及分化程度有关(χ^(2)=7.500,P=0.006;χ^(2)=10.342,P=0.001;χ^(2)=22.547,P=0.016;χ^(2)=20.508,P<0.001;χ^(2)=12.586,P=0.002)。结论Siglec-15在食管鳞癌组织中高表达,与患者的疾病进展显著相关。

凝集素半乳糖结合蛋白3在人子宫内膜的表达

目的探讨凝集素半乳糖结合蛋白3(galectin-3)在子宫内膜的表达与子宫内膜容受性的形成和胚泡着床的关系。方法用RT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测galectin-3mRNA和蛋白在增生晚期和分泌中期子宫内膜的表达。用免疫组化方法检测galectin-3蛋白在子宫内膜的定位和表达。结果galectin-3mRNA和蛋白在分泌中期子宫内膜的表达高于增生晚期,galectin-3蛋白定位于上皮细胞和间质细胞。结论结果提示galectin-3在分泌中期子宫内膜的高表达可能与子宫内膜容受性的形成和胚泡着床的过程有关。

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达

目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段。方法应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性。结果从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合。结论获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件。

唾液酸-唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素轴在肿瘤发生机制与治疗中的研究进展

唾液酸(sialic acid, Sia)广泛修饰于聚糖、糖蛋白和糖脂等分子末端,保护被修饰细胞免受免疫系统的识别和杀伤。唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin, Siglec)作为Sia的受体多见于免疫细胞表面,肿瘤细胞能够通过异常的糖基化模式经Sia-Siglec轴调控免疫细胞功能,从而维持抑制性肿瘤免疫微环境(tumor immune microenvironment, TIME)。因此,Sia和Siglec可能是潜在的“免疫检查点”,阻断Sia-Siglec轴是肿瘤免疫治疗的潜在方法。本文综述了Sia-Siglec轴的概况、在肿瘤发生中的作用机制及基于阻断Sia-Siglec轴的治疗方法,以期为更深入的Sia-Siglec轴研究提供参考。

甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)在HeLa细胞的表达

目的构建甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)真核表达载体并表达MAp19。方法应用PCR技术扩增得到MAp19基因,利用基因克隆技术构建真核表达载体pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19,酶切及测序对其进行鉴定;将构建成功的重组载体通过脂质体转染He La细胞,并采用G418筛选已获得整合有pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19的阳性细胞克隆,用荧光显微镜观察MAp19融合蛋白在He La细胞的定位;Western blot法检测MAp19融合蛋白的水平。结果构建了具有筛选特征和能够稳定表达的pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19重组质粒,测序结果与NCBI数据库比对完全一致;采用G418筛选后获得表达外源性MAp19蛋白的He La细胞,该蛋白定位于细胞质中;Western blot结果确定MAp19为分泌性蛋白。结论 MAp19真核表达载体构建成功,并能在真核细胞中表达出目的蛋白。

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶与相关疾病最新研究进展

恶性肿瘤与自身免疫性疾病的发病率逐年增高,国内外学者的目光逐渐聚焦在天然免疫这一方面。补体系统则是天然免疫中的关键环节,其在疾病发生、发展过程中所起作用也越来越受到重视。补体是存在于人或动物血清中一组不耐热的且具有酶活性的蛋白质,并非单一分子,是由30多种蛋白成分组成的限制性蛋白酶解系统,又称为补体系统。广泛参与机体的多种免疫效应机制。补体需要被激活才能发挥其相应的生物学作用。

人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2C端基因的克隆与鉴定

目的:获得人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2(MASP-2)C端编码基因,并表达人MASP-2C端片段,为制备单克隆抗体及应用于临床相关疾病的检测奠定分子学基础。方法:采用RT-PCR技术从人胎肝组织总RNA中扩增人MASP-2C端的cDNA,克隆入pGEX-6p-2表达载体,酶切图谱分析和序列分析鉴定。结果:获得编码人MASP-2C端片段的cDNA,并且与pGEX-6p-2载体连接,转化大肠杆菌XL1-blue,成功构建人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆。重组质粒酶切图谱分析和DNA测序分析,人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆与GenBank中人MASP-2C端的cDNA序列一致。结论:成功克隆了人MASP-2C端片段cDNA,并在大肠杆菌中表达人MASP-2C端多肽片段。

唾液酸结合性免疫球蛋白凝集素6的生物信息学分析及多克隆抗体制备

目的表达并制备唾液酸结合性免疫球蛋白凝集素6(Siglec-6)的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。为下一步探讨Siglec-6在介导细胞信号转导和调节造血细胞及免疫细胞的功能,研究其在免疫调节和炎症反应中的作用奠定基础。方法通过生物信息学分析方法预测Siglec-6蛋白的跨膜结构、理化特性、疏水性等因素,设计出两个多肽,两个多肽各自与血蓝蛋白(KLH)交联后对新西兰兔进行免疫,结果发现这两个多肽均可作为抗原免疫生物试剂,并成功获得高效价的抗Siglec-6多克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其效价,经过亲和层析纯化,用Western blotting测定抗体的特异度。结果通过ELISA检测其效价分别为1∶51200和1∶12800,Western blot结果表明该方法所制备的抗体具有特异度。结论该研究通过生物信息学方法成功预测了抗原表位,并据此预测成功制备了高效价、高特异度的抗Siglec-6多克隆抗体。

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2的研究进展

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)是补体凝集素途径关键酶,位于染色体1p36上,约20 kb,由686个氨基酸残基构成。通过病原相关分子模式识别病原体,与凝集素结合,以酶原形式存在的MASP-2活化,继而激活后续级联反应,致使入侵的病原体被机体清除破坏。MASP-2基因多态性普遍存在,过高或过低的MASP-2水平都不利于免疫系统正常运行,影响着多种疾病的易感性及发展进程。MASP-2血清浓度在不同疾病及同一疾病不同阶段的不尽相同。MASP-2与肿瘤、感染性疾病以及自身免疫性疾病的发生发展密切相关。

肝细胞肝癌患者血浆中甘露聚糖结合凝集素和甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2的表达水平

目的检测肝细胞肝癌患者血浆中甘露糖结合凝集素(MBL)、MBL相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)的表达水平,探讨其与肝细胞肝癌发生发展的相关性。方法用酶联免疫吸附测定方法检测64例肝细胞肝癌患者及30例健康人血浆中MBL及MASP-2的表达水平,并用统计学方法分析患者血浆中MBL及MASP-2的浓度与各临床指标的相关性。结果肝细胞肝癌患者血浆中MBL和MASP-2的浓度均显著高于健康人群(P=0.014、0.002),MBL/MASP-2比值在健康人群与肝细胞肝癌患者中的差异无统计学意义,此外,患者血浆中MBL与MASP-2并无相关性。在肝细胞肝癌患者中,血浆MBL水平与肿瘤的血管侵犯(r=0.253,P=0.047)和总胆红素水平(r=0.283,P=0.024)呈正相关;血浆中MASP-2水平与肝细胞肝癌的TNM分期呈正相关(r=0.276,P=0.027),而与血浆白蛋白呈负相关(r=0.-0.317,P=0.015)。经ROC曲线分析,MBL和MASP-2曲线下面积分别为0.665(P=0.010)和0.694(P=0.003),对肝细胞肝癌诊断的敏感性分别为50%和89.1%。结论补体凝集素途径的关键分子MBL、MASP-2与肝细胞肝癌患者的炎症状态和疾病进展相关,参与了肝癌的发生与发展。

血清唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素7、半乳凝集素-3联合MELD评分在失代偿期肝硬化患者预后评估中的临床预测价值

目的探讨血清唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素7(Siglec-7)、半乳凝集素-3(Gal-3)联合终末期肝病模型(MELD)评分对失代偿期肝硬化患者预后的评估价值。方法选择2017年1月至2020年12月中南大学湘雅医学院附属海口医院消化内科收治的248例失代偿期肝硬化患者为研究对象,对所有患者出院后进行1年时间的随访,并根据患者预后状况分为存活组169例和死亡组79例。采用多因素Logistic回归分析失代偿期肝硬化患者死亡的独立危险因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析各指标联合应用对失代偿期肝硬化患者死亡评估的预测价值。结果死亡组红细胞分布宽度(RDW)、中性粒细胞、降钙素原(PCT)、总胆红素(TBiL)、凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(INR)、Siglec-7、Gal-3水平以及MELD评分显著高于存活组(P均<0.05),而血小板、淋巴细胞、前白蛋白(PA)、白蛋白(ALb)水平显著低于存活组(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,上消化道出血、肝肾综合征、RDW、TBiL、Siglec-7、Gal-3、MELD评分是失代偿期肝硬化患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。Siglec-7、Gal-3联合MELD评分对失代偿期肝硬化患者死亡预测的ROC曲线下面积(AUC)为0.912,敏感度为0.899、特异度为0.870,高于各指标单独检测。结论上消化道出血、肝肾综合征、RDW、TBiL、Siglec-7、Gal-3、MELD评分是失代偿期肝硬化患者死亡的危险因素,Siglec-7、Gal-3联合MELD评分对失代偿期肝硬化患者死亡的预测价值较高。

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3的研究现状

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3(MASP3)是补体凝集素途径的酶成分之一,由MASP1/3基因编码。既往资料证实,MASP3不参与凝集素途径活化,对补体蛋白C3、C4以及C2均无酶切活性,而近期研究表明MASP3是参与补体D因子活化的关键酶,进而可能是联系补体凝集素途径和旁路途径活化的重要成分。此外,人们通过动物疾病模型研究发现MASP3可能作为补体旁路途径异常相关疾病的新治疗靶点,从而为相关疾病提供新的治疗思路。本文旨在对MASP3的编码基因、蛋白结构、生物学功能以及其在旁路途径功能异常相关疾病模型中的研究进展进行综述。

血清半乳糖缺陷型IgA1和甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3在IgA肾病发病机制中的研究进展

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是世界范围内最常见的原发性肾小球疾病,是导致终末期肾病的常见原因。目前,肾活检仍然是其诊断和评估病情活动的金标准。已有研究显示半乳糖缺陷型IgA1(galactose-deficient IgA1,Gd-IgA1)的沉积在IgAN致病过程中发挥重要作用,GdIgA1的沉积会激活补体系统,包括替代途径、凝集素途经和经典途径,甘露糖结合凝集素是凝集素途径起始的关键因子,活化的甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(mannose binding lectin-associated serine protease,MASPs)是凝集素途径的关键酶,MASPs存在三种不同的亚型(MASP1、MASP2、MASP3),MASP3作为一种新型的MASP蛋白酶,成为近期研究热点,国内外多项研究表明MASP3能够激活D因子,参与替代途径,造成肾小球系膜细胞的损伤。因此Gd-IgA1的沉积与MASP3地出现在IgAN当中可能存在一些联系,有待于进一步的实验研究。本文旨在系统综述GdIgA1、MASP3在IgAN的发病机制中的作用,并探讨Gd-IgA1与MASP3之间的相关性。

半乳糖凝集素-3结合蛋白在恶性肿瘤发生发展中的作用及临床应用价值

半乳糖凝集素-3结合蛋白(LGALS3BP)是一种在人体内普遍存在的多功能分泌型糖蛋白,可于血清和其他生物液体中被检测到。近年来的研究发现LGALS3BP与肿瘤转化和恶性肿瘤进展有关,但其在恶性肿瘤发生、发展中的具体作用机制尚存在争议,目前尚无全面详尽的总结。本文对LGALS3BP在恶性肿瘤发生、发展中的作用及机制进行了概括与综述,LGALS3BP可以通过介导细胞黏附、促进细胞增殖、促进细胞迁移、刺激血管生成、刺激机体对肿瘤免疫防御及其他机制发挥作用。此外,LGALS3BP具有免疫原性,在多种恶性肿瘤患者的血液中存在差异性表达,与患者的预后不良密切相关,有望成为恶性肿瘤的治疗靶点或发展为恶性肿瘤诊断及预后预测的生物标志物,具有潜在的临床应用价值。

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。

唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素的生物学功能及其在抗肿瘤中的作用

唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(sialic acid-binding immunoglobulin-type lectin,Siglec)是一类能够识别唾液酸化聚糖结构的膜蛋白,近年来,随着对Siglec调节肿瘤微环境研究的深入,其已成为抗肿瘤药物研发的重要方向之一。本文系统介绍Siglec家族成员中的Siglec-1、-2、-3、-7、-9、-10、-15通过与其各自配体相互作用而调节固有免疫或适应性免疫的机制及其在抗肿瘤治疗中的应用进展,为肿瘤免疫治疗提供新的思路。

唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(Siglecs)在肿瘤免疫中的作用及临床应用研究进展

凝集素是机体负责识别糖分子信号的蛋白,唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(Siglecs)可通过识别含有唾液酸的糖链结构,通过免疫受体酪氨酸抑制基序介导下游信号,调控肿瘤微环境中的固有免疫和适应性免疫应答。据此,近年来通过构建唾液酸糖蛋白介导药物靶向递送,通过抗体抑制Siglecs识别肿瘤表面配体等产生多种靶向唾液酸-Siglecs轴的肿瘤治疗方案。未来可以通过与糖蛋白纳米疗法、抗体疗法和基因疗法结合,利用Siglecs准确定位肿瘤靶点,能够释放机体的抗肿瘤免疫,从而达到有效杀伤肿瘤的目的。