罗非鱼鱼皮胶原蛋白降血压酶解液的制备与活性研究

本文研究了单酶和复合酶水解罗非鱼鱼皮胶原蛋白制备抑制血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的工艺条件。通过正交试验确定了菠萝蛋白酶和Alcalase2.4L蛋白酶单独水解鱼皮胶原蛋白的最适酶解条件。菠萝蛋白酶和Alcalase2.4L蛋白酶的最适酶解温度,pH,酶/底物,时间,底物浓度分别为45℃,pH4.5,4000U/g,4h,6%和55℃,pH7.5,6000μ/g,2h,4%。在单酶水解的基础上,进行复合酶水解实验,结果表明:先采用菠萝蛋白酶水解,再用Alcalase2.4L蛋白酶水解,效果更佳。采用该双酶复合水解工艺,所得水解产物的水解度为30.43%,体外对ACE的抑制率达68.6%。采用SephadexG-25,HPLC的分离方法对酶解液进行分离纯化,得到了高抑制活力的组分。所得水解原液,SephadexG-25过柱所得高活力组分的IC50分别为2.82mg/ml和0.65mg/ml。

红非鲫(Oreochromis niloticus)鱼皮胶原蛋白酶解条件的研究

目的研究单酶和复合酶水解红非鲫鱼皮胶原蛋白制备具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)生物活性的寡聚肽的工艺条件。方法根据6种单酶的水解产物对ACE抑制作用的测定结果,确定了两种酶即菠萝蛋白酶和alcalase 2.4L碱性蛋白酶组成复合水解酶。采用正交试验确定了这两种酶单独水解鱼皮胶原蛋白的最适酶解条件。结果与结论菠萝蛋白酶和alcalase 2.4L蛋白酶的最适酶解温度,pH,酶/底物,时间,底物浓度分别为45℃,pH4.5,4000U.g-1,4h,6%和55℃,pH7.5,6000U.g-1,2h,4%。在此基础上,进行复合酶水解实验,结果表明先采用菠萝蛋白酶水解,再用alcalase 2.4L蛋白酶水解,效果更佳。采用该双酶复合水解工艺,所得水解产物的水解度为30.43%,体外对ACE的抑制率达68.6%。

长鳍金枪鱼鱼皮胶原蛋白肽制备工艺的研究

以长鳍金枪鱼鱼皮为原料,采用碱热复合酶三步水解法制备胶原蛋白多肽。以水解度、氮回收率和水解产物分子量为指标,通过单因素和多因素正交设计试验,确定最佳酶解条件。结果表明：碱处理为第一步,鱼皮经过0.1 mol/L Ca（OH）2反复清洗数次,最后清水冲洗干净;热处理为第二步,鱼皮于水浴锅中90℃处理30 min;酶解为第三步,梯度加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味酶,酶解的最佳工艺条件为：复合酶料比1∶200（g/g）,料水比1∶2.5（g/m L）,酶解温度55℃,p H为9.0～6.5,酶解总时间为4 h,水解度平均能达到30%,酶解液脱色的最佳条件为,活性炭添加量2%,自然pH,温度70℃,时间30 min,经过浓缩喷雾干燥后的胶原蛋白粉末经过HPLC分析,得到分子量在3 kD以下的多肽占到85%以上。

表皮细胞、成纤维细胞和几丁质-胶原蛋白复合人工皮的体外构建

目的 探讨几丁质 胶原蛋白膜作为表皮细胞、成纤维细胞培养支架的可能性 ,体外构建包含双层细胞的复合皮。方法 取健康成人环切包皮 ,分离成纤维细胞、表皮细胞 ,分别制成单细胞悬液 ,将几丁质 胶原蛋白膜 (有孔面向上 )平铺于 60mm培养皿中 ,首先接种成纤维细胞 ,培养 2d后 ,将含 10 %小牛血清的DMEM更换成完全型DMEM ,翻转膜 ,使光滑面朝上 ,再种植表皮细胞 ,每日换液。定期观察细胞与材料的粘附、细胞贴壁及其生长增殖情况。结果 几丁质 胶原蛋白膜对成纤维细胞、表皮细胞无明显毒性作用 ,成纤维细胞培养 1d后 ,细胞贴附于材料支架 ,细胞胞体较大 ,呈典型的梭形。加入表皮细胞复合培养 2d示表皮细胞贴壁生长 ,并分化、增殖。复合皮构建 2周 ,网格支架及孔内均有大量细胞生长 ,膜表面细胞融合成片 ,表皮细胞分化形成复层。结论 几丁质 胶原蛋白膜对细胞无毒性 ,有利于培养细胞的粘附、生长。在体外可以构建成功类似生理性皮肤的人工皮肤。

胶原基生物材料在医学美容领域的研究进展

胶原是哺乳动物体内含量最多的蛋白质,在人体皮肤内的含量约为70%,是细胞外基质的主要成分,对皮肤的弹性、光泽、毛孔和水分等具有重要影响。作为天然高分子材料,胶原具有抗原性低、可吸收降解、美白保湿和填充修复等特性,基于天然胶原、水解胶原和重组人源胶原开发研制的产品可以满足不同患者、不同病症的治疗需求,已被广泛用于医学整形美容领域。纯胶原的湿热稳定性、耐酶解性和力学性能较差,将其与天然高分子材料共混制备复合材料可以弥补单一组分的不足,兼具多种材料的优势,胶原蛋白的复合改性是胶原基生物医用材料的研究热点之一。本文介绍了胶原蛋白、水解胶原和重组人源胶原的结构与性能,分析了胶原基复合材料对纯胶原材料缺陷的改善机理,列举了胶原基生物材料在注射医美、人工皮肤、美容敷贴和日用化妆品领域的应用进展,指出了胶原基材料目前存在的问题及今后的发展前景,以期为胶原基生物材料在医学美容领域的产品开发和临床应用提供参考。

可降解复合人工食管重建犬颈段食管的实验研究

目的 采用生物可降解材料与非降解材料复合制成人工食管 ,诱导自身食管组织爬行再生与生物材料降解相匹配 ,最终再生食管完全替代人工食管。 方法 将长 5 0 mm、内径 2 0 mm的医用聚氨酯内管表面覆盖海绵状胶原蛋白壳聚糖膜 ,体外制成人工食管 ,通过手术替换 组 (5只犬 )和 组 (10只犬 )颈段 5 cm食管缺损 ,术后给予营养支持 ,禁食 2周或 4周后通过内镜分别取出 、 组聚氨酯内管 ,通过组织学及电镜等检测、观察新生食管上皮化过程。 结果 禁食 2周后取出 组聚氨酯内管的 5只实验犬 ,新生食管上皮再生不完全 ;术后 4周内均出现进行性狭窄无法吞咽 ,致全身衰竭死亡。 组禁食 4周后取出聚氨酯内管的 10只实验犬 ,新生食管完全上皮化 ;12周时黏膜全层结构完整再生 ;2 4周时食管肌层部分再生 ,有 3只犬生存 8个月以上。 结论 由聚氨酯内管提供暂时通道和支撑 ,海绵状胶原蛋白壳聚糖膜提供适宜细胞爬行再生的三维支架 ,维持 4周的降解时间能够重建犬颈段 5 cm长食管缺损。

可降解复合人工食管重建犬颈段食管的实验研究(英文)

目的 :研究聚氨酯胶原蛋白壳聚糖复合人工食管重建犬颈段食管的可行性。方法 :将医用聚氨酯管表面覆盖海绵状胶原蛋白壳聚糖膜制成的人工食管 ,通过手术替换 15只犬颈段 5 cm食管缺损 ,术后给予营养支持 ,禁食 2周或 4周后通过内镜取出聚氨酯内管进行观察。结果 :禁食 2周后取出聚氨酯内管的 5只实验犬 ,新生食管上皮再生不完全 ,术后 1个月内均出现进行性狭窄无法吞咽 ;禁食 4周后取出聚氨酯内管的 10只实验犬 ,术后 1个月新生食管完全上皮化 ,术后 3个月 ,黏膜全层结构完整再生 ,术后 6个月食管肌层部分再生。结论 :聚氨酯胶原蛋白壳聚糖复合人工食管重建犬颈段食管具有可行性 ,通过聚氨酯内管提供临时通道 ,海绵状胶原蛋白壳聚糖膜提供适宜细胞爬行再生的三维多孔支架并维持足够长的降解时间 ,能促使自身食管完全再生。

皮耐克修复口腔软组织缺损30例临床分析

口腔肿瘤手术及外伤造成的口腔软组织缺损在临床极为常见,而口腔软组织缺损会造成患者语言表达、咀嚼吞咽、呼吸等功能障碍,严重影响患者生活质量和生理、心理健康以及参与社会的能力。因此,口腔颌面软组织的修复一直是口腔颌面外科的重要研究方向。本报告采用的皮耐克是一种新型人工真皮,由抗原性极低的无末端胶原蛋白海绵和硅胶膜组成的双层结构移植物,能够诱导创面肉芽样组织生长,为创面愈合提供再生支架,诱导真皮重建。文章选取我科采用皮耐克修复口腔软组织缺损患者30例,分析其治疗效果。

心肌支架材料在心肌梗死治疗中的应用与研究热点

背景:近年来心肌组织工程快速崛起,通过应用外源性生物材料模拟细胞外基质,使受损的心肌细胞得到有效修复或重建,在治疗心肌梗死等缺血性心脏病方面具有很大的潜在价值。目的:综述心肌支架材料在心肌梗死治疗应用中的研究进展。方法:应用计算机检索NCBI数据库和万方数据2008至2018年发表的相关文献,检索关键词为"心肌支架材料,心肌梗死;Myocardial scaffold materials,myocardial infarction"。结果与结论:目前常用的心肌支架材料主要有天然生物材料(包括胶原/Matrigel、纤维蛋白、壳聚糖、透明质酸、海藻盐酸等)、人工合成材料(聚酯类人工合成材料与纳米材料)及复合支架材料。由于心脏环境和心脏功能的复杂性,支架材料的选择应充分考虑到生物相容性、免疫原性、导电性、降解率、对缺血缺氧易感性等各方面因素,尽管目前许多支架设计开始满足所提出的诸多要求,但应用于临床仍然存在着各种各样的问题,相信随着研究者的进一步深入及应用工具的进一步发展,人们可期待能够创造出接近原生组织生理机能的心肌支架,使心脏功能得到更理想的恢复。

载柚皮苷复合支架对兔骨软骨缺损修复的实验研究

目的探讨载柚皮苷复合支架的性能及其对兔骨软骨缺损修复的效果。方法利用W/O/W方法制备载柚皮苷和无载柚皮苷缓释微球;以凹凸棒石和Ⅰ型胶原蛋白为材料,通过"3层夹心法"分别构建载柚皮苷、无载柚皮苷和载TGF-β_1复合支架。分别利用体外缓释、扫描电镜和细胞计数试剂盒8法评价载柚皮苷微球的缓释效果、支架的形貌和细胞相容性。取40只日本大耳白兔随机分为A、B、C、D4组,每组10只。于兔双侧股骨髁间窝处制备直径4.5 mm、深4 mm的骨软骨缺损模型,A组为缺损组(空白对照),B、C、D组分别于骨软骨缺损处植入无载柚皮苷复合支架(阴性对照组)、载柚皮苷复合支架(实验组)及载TGF-β_1复合支架(阳性对照组)。分别于术后3、6个月时取材,行大体、HE染色、甲苯胺蓝染色,分别观察骨软骨缺损修复效果;Western blot检测新生软骨Ⅱ型胶原蛋白表达水平。结果载柚皮苷微球具有良好的缓释效果;构建的骨软骨复合支架有较好的孔隙;载柚皮苷软骨层支架细胞的增殖率与无载柚皮苷支架比较明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。兔体内植入实验大体观察示,术后3个月C、D组缺损范围与A、B组相比明显缩小;术后6个月C组缺损处被新生软骨所覆盖,D组新生软骨与周围正常软骨整合良好。组织学染色示,术后3个月A、B组缺损处被少量纤维组织填充,C、D组可见少量软骨生成;术后6个月C、D组新生骨软骨组织与正常骨软骨类似,A、B组缺损处以大量纤维组织为主。Western blot检测示,术后3、6个月C、D组缺损处新生组织中Ⅱ型胶原蛋白表达量均显著高于A、B组,差异有统计学意义(P<0.05);C、D组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论载柚皮苷复合支架具有良好的组织相容性,并对兔关节骨软骨缺损有较好的修复效果。