甲壳素微结晶分散体系的研制:一种新的甲壳素溶解环试验

目的:鉴定细菌是否分泌甲壳素酶,并分解利用甲壳素的经典方法是甲壳素缺刻试验,但其需时较长,结果不明显,为解决以上缺点,研制甲壳素微结晶分散体系,拟创造一种新的实验方法甲壳素溶解环试验,并探讨其影响因素。方法:实验于2005-04/2006-12在浙江省医学科学院医学生物工程研究所完成。①通过高温高压、超声等综合手段,制备乳白色的甲壳素微结晶分散体系,并进行透射电镜观察。②采用制备的甲壳素微结晶分散体系,制造甲壳素培养基,取副溶血弧菌和致病性大肠杆菌44815菌悬液106cfu/mL各1μL,分别注入甲壳素培养基中,37℃培养72h,如接种点周围出现明显的透明环,即为阳性,反之为阴性。③制备2%,1%,0.5%3种不同浓度的NaCl及相应8.0,7.0和6.0不同pH值组合的3种甲壳素培养基,分别接种副溶血弧菌菌悬液106cfu/mL各1μL,37℃培养72h后测量溶解环直径。④菌量和培养温度的影响:将3种浓度菌悬液(108,106和104cfu/mL)各1μL注入甲壳素培养基中,37℃培养72h;固定菌量(2.8×106cfu/mL)接种后,分别在40℃、37℃和25℃培养72h,测量溶解环直径。结果:①成功制备了甲壳素微结晶分散体系,甲壳素浓度为4%,微粒粒径<0.5μm。②培养72h后,接种副溶血弧菌甲壳素培基上呈现阳性反应。③在NaCl浓度为2.0%,pH为8.0环境条件下,溶解环直径最大。④在菌量108￣104cuf/mL范围内,菌量与溶解环直径大小呈正比,但最适浓度为106cuf/mL;在37℃环境中溶解环直径最大。结论:①甲壳素溶解环试验是鉴定细菌能否分泌甲壳素酶、并分解利用甲壳素的一种直观、快速、准确的方法。②甲壳素培养基NaCl、pH值、培养温度及菌量等对甲壳素溶解环试验均有直接的影响。

几丁质溶解环试验在细菌学鉴定中的应用

目的研制几丁质微结晶分散体系，创造一种几丁质溶解环试验来替代传统的几丁质缺刻试验，用于鉴定细菌是否分泌几丁质酶，分解利用几丁质的一种新的实验方法。方法运用物理和化学综合手段，制备几丁质微结晶分散体系，几丁质浓度为4％，微结晶粒径〈0．8μm。采用制备的几丁质微结晶分散体系，进行几丁质溶解环试验和影响因子的研究。在几丁质培养基接种点周围出现明显的透明环，即为实验结果阳性，说明该细菌具有几丁质酶，对几丁质具有生物降解作用，反之为阴性。结果副溶血弧菌具有几丁质酶，能降懈、利用几丁质，而大肠杆菌则无此生物学功效。NaCl、pH、温度及菌量等因子对几丁质溶解环试验有直接的影响作用。结论几丁质溶解环试验是鉴定细菌能否分泌几丁质酶，并分解利用几丁质的一种直观、快速、准确的方法，在细菌学鉴定中具有实际意义。