中华白凤液的部分药理作用

中华白凤液灌服给药的半数致死量为34土3.0g/kg;6.9g/kg大鼠灌服每天一剂连续服用30天,对体重的增长、肝、肾功能和血象均无明显影响。中华白凤液有提高小鼠耐力、降低实验性高胆固醇和高血糖血清中的胆固醇和血糖含量,抗血小板聚集和抗炎等作用。

复方五凤草液负压滴灌治疗Ⅲ-Ⅳ期压力性损伤的疗效及其作用机制

目的观察复方五凤草液负压滴灌治疗(NPWTi)Ⅲ-Ⅳ期压力性损伤(PI)的临床疗效,并初步探索其作用机制。方法(1)临床研究:选取2019年1月-2022年10月于南京市中西医结合医院瘰疬科病区及伤口护理门诊就诊的60例PI患者,随机分为生理盐水NPWTi组与复方五凤草液NPWTi组,每组30例。两组均在全身基础治疗的前提下进行NPWTi,分别于治疗前及治疗第1、2、3周拆除负压装置后统计PI愈合计分量表(PUSH)评分、创面细菌培养检出率及创面愈合时间,并用ELISA法检测创面组织血管内皮生长因子(VEGF)的含量。(2)动物实验:24只SD大鼠随机分为空白组、模型组、生理盐水NPWTi组与复方五凤草液NPWTi组,每组6只,通过局部组织缺血/再灌注损伤法建立PI大鼠模型,每天治疗结束后将负压装置拆除。分别于治疗前及治疗3、7、10 d观察各组大鼠创面形态,HE染色观察创面组织病理情况,免疫组化检测创面组织CD34阳性细胞百分比,并用ELISA法及RT-qPCR分别检测各组大鼠血液、创面组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、精氨酸酶-1(Arg-1)、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平。结果(1)临床研究:两组均能有效降低PUSH评分和创面细菌培养检出率,缩短创面愈合时间,促进创面组织VEGF表达,复方五凤草液NPWTi组优于生理盐水NPWTi组(P<0.05)。(2)动物实验:与空白组相比,模型组大鼠创面炎症反应及组织损伤明显,CD34阳性细胞百分比,以及血液和创面组织p38 MAPK、NF-κB p65、iNOS、TNF-α水平明显升高,Arg-1、TGF-β水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,生理盐水NPWTi组与复方五凤草液NPWTi组治疗7 d后创面形态评分明显降低,组织病理学形态明显改善,CD34阳性细胞百分比明显升高,血液及创面组织p38 MAPK、NF-κB p65、iNOS、TNF-α水平明显降低,Arg-1、TGF-β水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且复方五凤草液NPWTi组优于生理盐水NPWTi组(P<0.05)。结论复方五凤草液NPWTi可有效促进PI创面的愈合,其作用机制可能是通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路的活化及表达,进而调节M1/M2巨噬细胞极化平衡。

复方五凤草液对结核性溃疡VEGF、FGF-2表达的影响

目的:观察复方五凤草液对结核性溃疡VEGF、FGF-2表达的影响。方法:将63例结核性疮疡患者随机分为两组,两组均口服异烟肼、利福平。治疗组以复方五凤草液外用,对照组以异烟肼针剂外用。试验时间设为21 d。治疗第3天、第7天、第14天、第21天刮取两组患者疮疡内侧壁少许肉芽组织行ELISA法检测。动态观察2组细胞生长因子(VEGF、FGF-2)的变化。结果:治疗组VEGF、FGF-2表达渐升高,第14天到达高峰后渐平缓;而对照组VEGF始终处于低释放水平,FGF-2表达则缓慢升高。组间比较,两组第3天、第7天,2组VEGF、FGF-2比,差异均无学意义(P>0.05);第14天、第21天治疗组VEGF明显高于对照组(P<0.01),治疗组FGF-2高于对照组(P<0.05)。结论:复方五凤草液治疗结核性溃疡疗效确切,可能是通过刺激VEGF、FGF-2的表达来完成其溃疡修复的功能。

复方五凤草液对结核性溃疡的临床研究

目的:观察复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效,并探讨其作用机制。方法:将96例结核性溃疡患者随机分为两组,两组均口服抗结核药物。治疗组根据祛腐生肌法配制的复方五凤草液外用,对照组以异烟肼针剂外用。实验时间设为21d,在0d、3d、7d、14d、21d观察治疗过程中症候积分(窦道深浅、溃疡面积、腐肉、脓液等)变化及创面愈合率;创面FQ-PCR结核杆菌定量检测。动态观察创面VEGF、FGF-2的变化。结果:治疗第3天,两组创面证侯积分无显著性差异,第7、14、21天,治疗组能更有效地改善证侯积分,促进创面愈合,较对照组有统计学差异(P<0.01)。两组在治疗初始创面结核杆菌数量即有所减少,治疗组在第7天创面结核杆菌数量持续减少,而对照组表现较为平缓,两组相比有显著差异(P<0.01)。两组VEGF、FGF-2的表达自治疗开始后第3天起渐升高,治疗组在第14天明显高于对照组。组间比较,第3天、第7天,两组VEGF、FGF-2的变化(P>0.05)。第14天、第21天治疗组VEGF明显高于对照组(P<0.01),治疗组FGF-2高于对照组(P<0.05)。结论:复方五凤草液能有效减少创面结核杆菌数量、刺激血管生长因子的表达,从而促进结核性溃疡愈合。

复方五凤草液对结核性溃疡家兔创面愈合的影响

目的探讨复方五凤草液对结核性溃疡家兔创面愈合的影响。方法 36只新西兰兔随机分为模型组、异烟肼组、亲水性纤维含银辅料组、复方五凤草液高、中、低剂量组6组,每组6只,建立结核性溃疡模型。并分别造模后0 d、3 d、7 d、14 d、21 d计算创面愈合率;切取创面肉芽组织,进行TB-PCR量化监控、并统计各组的创面愈合时间。结果各组间创面愈合时间均有统计学意义(P <0.05或P <0.01);除0 d、3 d,各组各时间点的创面愈合率有统计学意义(P <0.05或P <0.01);除0 d、3 d,各时间点组间创面组织中TB-PCR表达的差异有统计学意义(P <0.05或P <0.01)。结论结核杆菌数量会影响结核性溃疡创面愈合;复方五凤草液通过有效减少创面结核杆菌数量促进愈合。

外敷复方五凤草液对结核性溃疡患者创面愈合影响及作用机制研究

目的:观察外敷复方五凤草液对结核性溃疡患者创面愈合的临床疗效并初步探究其作用机制。方法:选择60例结核性溃疡患者随机分为对照组和观察组各30例,在基础抗结核治疗基础上,对照组给予康复新液外用治疗,观察组给予以复方五凤草液外用治疗,观察4周。在给药前以及给药治疗第1、2、4周记录患者的局部体征积分,检测患者血浆中TGF-β、TNF-α,肉芽组织中IL-1,IL-6,NF-κB,VEGF,PDGF的含量,采用qPCR技术检测肉芽组织中TGF-β、TNF-αmRNA的表达,并观察创面大体观及组织病理切片。结果:观察组总体有效率明显高于对照组,给药4周后与对照组比较,观察组患者血浆TNF-α,肉芽组织中IL-1,IL-6,NF-κB含量明显降低,血浆TGF-β及肉芽组织VEGF,PDGF含量显著提高,肉芽组织TGF-βmRNA水平上升、TNF-αmRNA水平下降,溃疡创面肉芽组织学形态改善。结论:复方五凤草液能有效促进结核性溃疡患者创面的愈合,其作用机制可能与降低TNF-α通路相关蛋白的表达水平、提高TGF-β相关生物因子的表达水平相关。

外用复方五凤草液对结核性溃疡患者MDM2、p53的影响

目的:通过观察复方五凤草液对结核性溃疡患者MDM2、p53表达的影响,探讨其治疗结核性溃疡可能的作用机制。方法:选取南京中医药大学附属南京市中西医结合医院通过病理学证实为结核性溃疡患者76例,随机分为实验组和对照组,每组各38例。两组均给予规范抗结核治疗,同时实验组予以复方五凤草液外用换药,对照组予以康复新液外用换药,治疗28 d。观察两组患者治疗后第3、7、14、28天的创面愈合率;两组患者创面腐去时间及上皮生长时间;于治疗前、治疗后第3、7、14、28天收集患者血浆,使用ELISA法检测血浆中MDM2、p53蛋白的表达水平,RT-qPCR技术检测血浆中MDM2、p53 mRNA表达水平;于治疗前、治疗后第28天收集患者创面组织,使用WesternBlot法检测其中MDM2、p53蛋白的表达水平。结果:与治疗后第7天比较,治疗后第14、28天时两组患者创面愈合率明显升高(P<0.05);与对照组比较,治疗后第28天时实验组的创面愈合率明显升高(P<0.05)。治疗前,实验组与对照组血浆中MDM2、p53蛋白及mRNA表达情况差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前相比,第7、14、28天时,两组患者血浆中MDM2、p53蛋白及mRNA表达水平均有明显改善(P<0.05),而与对照组同一时间相比,实验组血浆中MDM2蛋白及mRNA表达水平升高更明显(P<0.05),p53蛋白及mRNA表达水平降低更明显(P<0.05)。与治疗前相比,两组患者治疗后创面组织中MDM2蛋白表达水平均升高,p53蛋白表达水平均降低;与对照组相比,实验组创面组织中MDM2、p53蛋白表达改善更明显。结论:复方五凤草液能够促进结核性溃疡愈合,其机制可能与上调MDM2表达、下调p53表达,从而调控巨噬细胞极化失衡有关。

外用经验方复方五凤草液治疗结核性溃疡的应用总结

黄子慧分析结核性溃疡(Teberculous Ulcer,TU)的病机特点为邪毒壅盛,气血亏虚,提出泄毒生新法的治则,基于该法则自拟复方五凤草液外用治疗,能在较短时间内脱落腐肉、引流脓液,加快组织新生,从而达到促进创面愈合的目的,疗效确切,值得临床进一步推广应用,为临床使用中医药治疗慢性难愈性创面提供思路。

复方五凤草液对创面愈合和巨噬细胞极化的影响

目的观察复方五凤草液对创面愈合和巨噬细胞极化的影响,探究其泄毒生新的机制。方法人单核系U937细胞经PMA诱导成为M0型巨噬细胞,采用LPS/IFN-γ和IL-4/IL-13诱导成为M1和M2型巨噬细胞,加入1.0、1.5、2.0 mg/mL复方五凤草液进行处理,采用流式细胞仪检测细胞膜表面CD86、CD206的表达,采用免疫印迹法检测Arg-1、iNOS蛋白表达,ELISA法检测上清液中TNF-α、TGF-β水平。建立大鼠难愈性创面模型,对照组采用凡士林处理,治疗组采用复方五凤草液处理,在第1、3、7、14天记录创面愈合率、肉芽量和腐肉量,并取创面肉芽组织,采用实时荧光定量法检测组织匀浆中Arg-1、iNOS的mRNA表达,ELISA法检测TNF-α、TGF-β水平。结果不同剂量复方五凤草液对M1型标志分子iNOS、TNF-α、CD86的表达无影响;能上调M2型标志分子Arg-1、TGF-β、CD206的表达。与对照组比较,复方五凤草液能提高创面的肉芽量和愈合率,降低创面的腐肉量,降低iNOS和TNF-α的表达,提高Arg-1和TGF-β的表达。结论复方五凤草液通过调节巨噬细胞M1、M2的极化发挥“泄毒生新”作用,促进慢性难愈性创面的修复。

UPLC-PDA法同时测定复方五凤草液中7种成分

目的建立UPLC-PDA法同时测定复方五凤草液(五凤草、白芨、猫爪草)中没食子酸、原儿茶酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、金丝桃苷、槲皮素、柚皮素的含有量。方法该药物80%甲醇提取液的分析采用Waters BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;检测波长266 nm。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率96.96%~102.26%,RSD 0.65%~2.10%。结论该方法稳定准确,重复性好,可用于复方五凤草液的质量控制。

复方五凤草液对大鼠慢性溃疡的药效学筛选研究

目的:观察复方五凤草液对大鼠几种常见慢性溃疡的治疗改善作用,进行药效学初筛研究。方法:构建下肢静脉性溃疡、烧伤性溃疡、压力性溃疡、糖尿病溃疡4种大鼠模型,每种模型24只,分为模型组、复方五凤草液组、阳性药组。分别于造模后第3d、第7d、第10d、第14d对大鼠溃疡创面进行相机拍照,采用Adobe Photoshop CS5软件图像处理创面,得创面面积,计算创面愈合率。结果:下肢静脉性溃疡实验结果表明,复方五凤草液给药前期显著促进了大鼠创面的愈合(P<0.05,P<0.05),效果优于阳性药复方黄柏液;烧伤实验结果表明,复方五凤草液给药后期能显著促进大鼠创面的愈合(P<0.05,P<0.01),效果优于阳性药康复新;压力性溃疡实验结果表明,复方五凤草液对大鼠创面的愈合没有显著影响,而阳性药康复新在给药后期显著促进了大鼠创面的愈合(P<0.01,P<0.05);糖尿病溃疡实验结果表明,复方五凤草液对大鼠创面的愈合没有显著影响,而阳性药复方黄柏液给药后期能显著促进大鼠创面的愈合(P<0.05)。结论:复方五凤草液能有效促进大鼠下肢静脉性溃疡、烧伤创面的愈合,可以考虑进行进一步的药效与机制研究。

五凤草液的HPLC指纹图谱建立与有效部位的质量控制

目的建立复方五凤草液HPLC指纹图谱与复方五凤草液总黄酮含量的测定方法,为全面评价复方五凤草液质量提供方法。方法采用HPLC法建立指纹图谱,对主要指纹峰进行了归属。同时以芦丁为对照品,用三氯化铝法测定复方五凤草液中总黄酮含量,对方法测定条件进行系统优化,并进行方法学验证。结果 HPLC指纹图谱方法精密度、重复性和稳定性良好。总黄酮含量测定最佳条件为检测波长415nm,0.1mol·L^-1显色剂用量为2mL,pH 5.2的乙酸-乙酸钠缓冲液用量为1mL,显色时间为30min。芦丁标准品在0.006~0.030mg·mL^-1质量浓度范围内,吸光度与质量浓度呈良好的线性关系,相关系数r=0.9998,平均加样回收率为105.75%,RSD为3.15%。结论建立的HPLC指纹图谱与总黄酮测定方法简单易操作、精确、专属性强、重复性好,为该复方的质量控制提供方法依据。

基于HPLC指纹图谱和化学计量学的复方五凤草液的质量评价

目的建立复方五凤草液HPLC指纹图谱,结合化学计量学,测定成分含量,对不同产地泽漆的复方五凤草液进行质量评价。方法采用HiQ sil C_(18)W色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^(-1);检测波长为270 nm;柱温为40℃;建立不同产地泽漆的复方五凤草液指纹图谱,进行相似度评价以及化学计量学分析,借助变量重要性投影值等方式筛选指认目标成分,进行含量测定。结果15批复方五凤草液指纹图谱含7个共有峰,所有样品与对照图谱相似度在0.795~0.999之间;经化学计量学分析,15批复方五凤草液聚为两类,复方五凤草液中没食子酸成分含量0.90~4.32 mg·g^(-1)。结论建立的指纹图谱分析和含量测定方法可靠、重复性好,可为复方五凤草液的质量控制提供参考。

复方五凤草液对家兔结核性溃疡iNOS、Arg-1的影响

目的:探讨复方五凤草液对结核性溃疡iNOS、Arg-1的影响。方法:将42只新西兰家兔随机分为七组:空白组,模型组,复方五凤草液高、中、低剂量组,异烟肼组,亲水性纤维含银辅料组,每组6只,隔天换药,分别于造模后0d、3d、7d、14d、21d观察创面组织、血清中iNOS、Arg-1的变化。结果:①模型组较空白组相比,iNOS持续高表达,Arg-1低表达,相比有统计学意义(P<0.01)。②第3天,各组iNOS含量差异无统计学意义(P>0.05);第7天,空白组iNOS含量较前相比明显降低(P<0.05),与其他组相比有统计学意义(P<0.05);第14、21天:各组与前一时间点相比iNOS含量均有统计学意义(P<0.05),复方五凤草液高、中剂量组、空白组与其他各组相比有统计学意义(P<0.05)。③除了模型组之外其他各组家兔随时间变化肉芽组织及血清中Arg-1活性检测数值都呈现增高趋势(P<0.05)。治疗第3天,各组Arg-1含量差异无统计学意义(P>0.05);治疗第7天,空白组与其他各组相比有统计学意义(P<0.05);治疗第14天,空白组、复方五凤草液高、中剂量组Arg-1含量增高,与前一时间点相比有统计学意义(P<0.05),与其他各组相比有统计学意义(P<0.05);治疗第21天,空白组、复方五凤草液高、中剂量组与其他各组相比Arg-1含量增高明显(P<0.01)。结论:结核性溃疡创面迟迟难愈可能与iNOS异常高表达而Arg-1低表达相关,复方五凤草液可能是通过抑制iNOS过度表达并促进Arg-1表达,从而促进愈合。

基于网络药理学探讨槲皮素治疗结核性溃疡的机制

目的基于网络药理学及分子对接方法探讨槲皮素治疗结核性溃疡的分子机制。方法通过PubChem、SwissTarget和TargetNet数据库检索槲皮素的药物靶点,结合课题组前期结核性溃疡基因测序结果,获得交集靶点。利用DAVID数据库完成交集靶点的基因本体(GO)功能富集分析和京都基因和基因组数据库(KEGG)信号通路富集分析。交集靶点经STRING数据库与Cytoscape软件分析其相互作用关系并筛选枢纽节点,采用PyMOL与AutoDock Tolls软件完成槲皮素与枢纽节点的分子对接,筛选以槲皮素为核心的药物靶点,最后构建巨噬细胞模型,对上述核心基因进行验证。结果经筛选共得到54个药物靶点,富集分析结果显示,槲皮素治疗结核性溃疡可涉及的信号通路有代谢通路、脂质与动脉粥样硬化、MAPK信号通路等,另外,ALOX5、TNF、SRC、MMP9、EGFR等基因可能是槲皮素治疗结核性溃疡的关键基因,细胞实验结果表明槲皮素干预后,M1、M2巨噬细胞SRC、EGFR表达水平显著升高,MMP9表达水平显著下降。结论槲皮素可能通过影响SRC、EGFR及MMP9表达发挥其调控巨噬细胞极化的作用。

从巨噬细胞角度探讨复方五凤草液干预结核性溃疡的机制

目的:探讨复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效及对巨噬细胞极化的影响。方法:(1)临床实验。将南京市中西医结合医院145例结核性溃疡患者按随机数字表法分为观察组、对照Ⅰ组和对照Ⅱ组。3组均予以基础抗结核化学治疗的同时,观察组予以复方五凤草液,对照Ⅰ组予以康复新液,对照Ⅱ组予以异烟肼液局部外用治疗,疗程4周。分别观察3组患者创面愈合总有效率、中医证候积分、创面组织病理学形态及创面组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg-1)的表达水平。(2)细胞实验。RAW264.7细胞在完全培养基DMEM(10%的胎牛血清,1%青-链酶素溶液)于37℃、5%CO_(2)的细胞培养箱中培养。经佛波酯(PMA)诱导后向巨噬细胞分化,分别用脂多糖(LPS)诱导成M1巨噬细胞、白细胞介素-4(IL-4)诱导成M2巨噬细胞,分别予康复新溶液、异烟肼液、复方五凤草液处理以上细胞模型36 h,收集细胞上清液并离心,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、iNOS和Arg-1的蛋白量的表达,流式细胞术(FCM)检测药物对CD86、CD206表达的影响。结果:(1)临床实验。与对照Ⅰ组[87.5%(42/48),χ^(2)=3.962,P<0.05]和对照Ⅱ组[83.3%(40/48),χ^(2)=6.162,P<0.05]比较,复方五凤草液组的总有效率[98.0%(48/49)]明显较高;治疗28 d后,与对照Ⅰ组、对照Ⅱ组比较,复方五凤草液组的中医证候积分明显降低(P<0.05),复方五凤草液组创面组织病理学形态改善更为明显;免疫组化结果显示,治疗28 d后,与对照Ⅰ组、对照Ⅱ组比较,复方五凤草液组局部病灶组织样本中的iNOS表达量明显降低(P<0.05),Arg-1表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。(2)细胞实验。Western blot实验结果显示,与M0组比较,LPS组中iNOS、TNF-α表达升高(P<0.01)。与LPS组比较,LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS、TNF-α表达下降(P<0.05);与LPS+异烟肼组比较,LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS表达下降(P<0.05,P<0.01),LPS+复方五凤草液组TNF-α水平显著下降(P<0.01);与LPS+康复新液组比较,LPS+复方五凤草液组中TNF-α表达下降(P<0.05)。与M0组比较,IL-4组中Arg-1、TGF-β表达升高(P<0.01)。与IL-4组比较,IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高(P<0.05,P<0.01)。与IL-4+异烟肼组比较,IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高(P<0.05,P<0.01);与IL-4+康复新液组比较,IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术结果显示,与M0组比较,LPS组CD86表达升高,IL-4组中CD206表达升高(P<0.01)。与LPS组比较,LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降(P<0.01);与LPS+异烟肼组比较,LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降(P<0.01);与LPS+康复新液组比较,LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降(P<0.01)。与IL-4组比较,IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高(P<0.01);与IL-4+异烟肼组比较,IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高(P<0.01);与IL-4+康复新液组比较,IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高(P<0.05)。结论:复方五凤草液能有效促进结核性溃疡愈合,其作用机制可能是通过抑制iNOS、TNF-α、CD86的表达并促进Arg-1、TGF-β、CD206的表达,从而调控M1/M2巨噬细胞极化平衡来完成。